肺癌细胞系内皮蛋白C受体的表达及其意义

目的 从细胞、蛋白和基因三个水平分析内皮蛋白C受体（endothelial protein C receptor，EPCR）在肺癌细胞系的表达。方法 以EA．hy926内皮细胞作阳性对照，人胚肺W138细胞作阴性对照，通过流式细胞术、West-ern．blot及半定量逆转录-聚合酶链反应分析EPCR在6种肺癌细胞系的表达水平。结果 6株肺癌细胞系均有EPCR的表达。高转移肺癌95D细胞表达最高。结论 EPCR的表达是肺癌细胞的重要特征，可能与肺癌增殖及转移有关。     

紫雪丹的质量控制

目的:建立紫雪丹的质量控制标准。方法:采用薄层色谱法对甘草、木香进行定性鉴别;采用气相色谱法对龙脑进行含量测定。结果:定性鉴别阴性无干扰,分离度高;龙脑在100μg·m L-1~800μg·m L-1(r=0.9996)范围内线性关系良好,加样回收率为100.79%,RSD为2.5%(n=6)。结论:方法可用于紫雪丹的质量控制。     

柴捆状Auer小体对急性早幼粒细胞白血病诊断价值探讨

目的 探讨柴捆状Auer小体在诊断急性早幼粒细胞白血病（APL）中的价值。方法骨髓涂片按常规染色及过氧化酶染色，观察有无柴捆状Auer小体，并进行形态学分析。用单克隆抗体经流式细胞仪检测白血病细胞免疫学表型。用R显带技术分析染色体核型。用定量PCR方法检测白血病相关融合基因。结果 3例出现柴捆状Auer小体初诊为急性髓系细胞白血病（AML）患者中，诊断为M1 1例，M4Eo1例，M2a1例。结论 柴捆状Auer小体虽常见于APL，但无绝对特异性。     

阿司匹林对维持性血液透析患者血小板活化的影响

目的探讨阿司匹林对维持性血液透析患者血小板活化的影响。方法将研究对象分3组(A组和B组各10 人,均为维持性血液透析患者,其自身动静脉内瘘反复失败;C组10人,为健康志愿者,做为对照组),A组病人口服阿司匹林75mg／d,B组不服用阿司匹林,观察3个月内血透病人自身动静脉内瘘的存活情况,并采用流式细胞仪测定其治疗前后血小板活化指标(CD62P,CD63,PAC-1)的表达,并进行组间比较。结果阿司匹林治疗后,A组活化血小板百分率明显低于B组,但仍高于C组(CD62P:A组2．63±1．08,B组5．21±1．90,C组1．31±0．88,PA-B<0． 002,PA-C<0．01;CD63:A组1．34±0．53;B组1．92±0．88,C组0．77±0．47,PA-B>0．05,PA-C<0．05;PAC-1:A组1． 35±0．68,B组2．13±0．87,C组0．81±0．41,PA-B<0．05,PA-C<0．05)。结论阿司匹林能部分抑制血小板活化。     

CAG方案清除T细胞急性淋巴细胞白血病细胞株A3细胞作用机制的研究

本研究主要探讨CAG方案清除T细胞性急性淋巴细胞白血病（T-ALL）细胞株A3细胞的作用机制及G-CSF／G—CSFR配体受体系统在清除过程中的作用。以单克隆抗体结合流式细胞术测定A3细胞表面G—CSFR表达率；以A3细胞为体外实验模型，分组加入不同浓度的G—CSF作用48小时后收集细胞，碘化丙锭细胞核染色法分析细胞周期变化；用Cell Counting Kit（CCK-8）检测不同浓度阿糖胞苷（Ara—C）和G-CSF组合作用48小时后对细胞生长抑制率的影响；用AnnexinV试剂盒结合流式细胞术检测Ara—C、阿克拉霉素（ACR）及G-CSF联合作用48小时后细胞凋亡水平。结果表明：T—ALL细胞株A3细胞表面高表达G—CSFR（94．2％）；G—CSF作用48小时后S期A3细胞比例在一定浓度范围内随G—CSF浓度的增加而升高；CCK-8检测显示Ara—C＋G—CSF组较单药Ara—C组抑制细胞生长更明显（Ara—C浓度10^-5mmol／L和10^-6mmol／L时P〈0．05）；凋亡检测显示Ara—C＋ACR＋G-CSF组细胞早期凋亡率高达38％，显著高于Ara—C＋ACR组。结论：T—ALL细胞株A3细胞表面高表达G-CSFR；G-CSF／G—CSFR配体受体系统在CAG方案清除A3细胞的过程中与化疗药物具有协同作用，即通过动员G0期细胞进入细胞增殖周期使细胞对化疗药物的敏感性增强、导致细胞凋亡，从而清除细胞。诱导凋亡是CAG方案清除T—ALL细胞株A3细胞的机制之一。     

人成骨细胞系hFOB1．19生物学特性的研究

本研究以成骨细胞系hFOB1．19（hFOBs）为对象，探讨成骨细胞在造血调控中的作用。采用RT-PCR检测hFOB多能干细胞的标志（Oct-4，Rex-1，hTERT）的表达及体外向脂肪细胞诱导分化程度，以测定其多向分化的能力。用流式细胞术（FCM）检测hFOB的细胞表型，RT—PCR检测细胞因子（SCF，IL-6，IL-11，SDF-1α，GM—CSF及G—CSF）的表达，并和骨髓来源的间充质干细胞（BM—MSC）进行比较。结果表明：hFOBs可表达Oct-4、Rex-1多能干细胞的标志，但不表达hTERT；体外诱导分化实验证实hFOB具有多向分化潜能。FCM发现hFOBs和BM—MSC具有相同的细胞表型，均表达CD44、CD73（SH3）、CD105（SH2）及CD90（Thy-1），但不表达CD34、CD45、HLA—DR等造血细胞标记。RT—PCR检测还发现：hFOBs和BM—MSC均表达SCF，IL-6，IL—11，SDF-1α等细胞因子mRNA，但hFOBs还能表达GM-CSF和G-CSF。结论：人成骨细胞系hFOB1．19可能是处于较早阶段的成骨祖细胞，表达多种造血相关的细胞因子，是研究成骨细胞调控造血的较好的模式系统。     

CD40L在特发性血小板减少性紫癜患者中的表达及其意义

目的研究特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者血浆中可溶性CD40配体（sCD40L）及T、B淋巴细胞和血小板上CD40L的变化,探讨CD40分子在ITP中的作用。方法应用酶联免疫吸附法检测患者血浆中sCD40L的变化;流式细胞术检测不同细胞上CD40L的表达水平。结果 ITP患者血浆中的sCD40L浓度明显高于正常对照组（P〈0.05）,且血小板计数对血浆中sCD40L浓度有一定程度的影响（r=0.58,P〈0.05）;ITP患者T淋巴细胞上CD40L的表达率较正常对照组明显升高（P〈0.05）。结论 ITP患者血浆及T细胞上CD40L升高,淋巴细胞表面的CD40-CD40L相互作用可能与ITP的发病有关。     

转染VEGF-C cDNA对NB4细胞增殖、分化与凋亡的影响

目的探讨转染血管内皮生长因子(VEGF)-C cDNA 对急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞增殖、全反式维甲酸(ATRA)诱导分化及化疗药物介导的细胞凋亡作用的影响。方法采用脂质体法将重组表达载体(pcDNA3.1-VEGF-C)和 pcDNA3.1转染 NB4细胞建立稳定细胞株;采用MTT 法及集落形成实验分析转染 VEGF-C cDNA 对 NB4细胞增殖的影响;NB4/VEGF-C 细胞经 ATRA诱导后涂片经瑞特-姬姆萨染色作形态学分析,实时荧光定量 PCR 检测调控粘细胞分化基因 C/EBPα相对表达水平,同时以流式细胞术检测细胞表面的 CD11b 表达量;Annexin V/PI 双染流式细胞术检测NB4/VEGF-C 细胞经鬼闩乙叉甙(Vp16)诱导的细胞凋亡;并以实时荧光定量 PCR 检测 bcl-2基因相对表达水平,均以 NB4/pcDNA3.1细胞为对照。结果成功转染获得稳定表达 VEGF-C 的细胞株 NB4/VEGF-C,其增殖能力显著高于 NB4/pcDNA3.1细胞;NB4/VEGF-C细胞对抗 ATRA 介导的早幼粒细胞分化成熟,CD11b 表达量低于对照组,C/EBPα基因含量仅为对照组的1/32;NB4/VEGF-C 细胞经Vp16介导后 bcl-2基因表达约为 NB4/pcDNA3.1细胞的2.28倍,而凋亡的 NB4/VEGF-C 细胞百分率(7.20±2.52)%明显低于凋亡的 NB4/pcDNA3.1细胞的(16.07±3.58)%(P=0.005)。结论 VEGF-C 通过 VEGF 受体3(VEGFR-3)信号途径促进白血病细胞增殖,抑制分化诱导剂介导的 NB4 细胞分化及化疗药物介导的细胞凋亡,推测 VEGF-C/VEGFR-3信号途径在白血病疾病进展中发挥重要作用并可望作为白血病治疗的靶点。     

血管内皮生长因子C对NB4细胞裸鼠种植瘤生长及血管生成的影响

目的 建立裸鼠体内NB4/VEGF-C细胞种植瘤模型,探索VEGF-C及其受体对白血病细胞生物学性状影响.方法 每组9只4～5周龄的BALB/c裸鼠,经4 Gy60Co照射后腋窝皮下分别接种1×107个NB4/VEGF-C、NB4/pcDNA3.1细胞(对照组),观察成瘤性,3周后处死裸鼠.免疫组化法检测NB4/VEGF-C细胞组种植瘤组织切片微血管密度及BCL-2蛋白表达水平.结果 NB4/VEGF-C及对照细胞在裸鼠腋下均成瘤,NB4/VEGF-C细胞组肿瘤生长速度快于对照组,NB4/VEGF-C细胞组与对照组瘤体体积分别为(631.44±114.42)mm3和(491.22±70.05)mm3,差异有统计学意义(P=0.006);NB4/VEGF-C细胞与对照组瘤块质量分别为(321.78±27.84)mg和(288.57±40.12)mg,差异有统计学意义(P=0.031).免疫组化检测显示NB4/VEGF-C细胞组种植瘤组织切片微血管密度及BCL-2蛋白表达水平高于对照组.结论 VEGF-C不仅诱发NB4细胞种植瘤体的血管新生,而且可能通过VEGFR-3信号途径促进白血病细胞增殖及上调抗凋亡蛋白BCL-2抑制细胞凋亡.

Abstract：

Objective To establish NB4/VEGF-C cells xenograft in nude mice model, and explore the effect of VEGF-C on hematological malignancies Methods NB4/VEGF-C or NB4/pcDNA3.1 cell lines were established by transfecting the recombinant pcDNA3. 1-VEGF-C plasmid and the vacant pcDNA3. 1 vector into NB4 cells. The recombinant VEGF-C was identified by RT-PCR and Western blotting. Eighteen male BALB/c nude mice aged 4-5 weeks were equally divided into two groups. Mice irradiated by 4 Gy 60Co were subcutaneously injected with 1 × 107 NB4/VEGF-C or NB4/pcDNA3. 1 cells into one side of axilla. The volumes of xenograft tumor was evaluated according to L × t2 × 0.52. Microvessel density(MVD) on the xenograft tumor section was detected by IHC with VWF antibody. Results NB4 cell xenograft tumors were developed in all mice of both the two groups. The growth of NB4/VEGF-C cells in nude mice was faster than in controls. There were statistically significant differences in the volume and weight of xenograft tumor between NB4/VEGF-C and NB4/pcDNA3. 1 cell groups [ (631.44 ± 114.42) mm3 vs (491.22 ± 70.05) mm3 ](P=0.006) and [(321.78 ±27.84) mg vs (288.57 ±40.12) mg] (P=0.031), respectively. MVD in xenograft tumor of NB4/VEGF-C cells [ (50.8 ± 11.7)/mm2 ] was higher than that in controls [ ( 18.9 ±7.0)/mm2] (P =0.021 ). The Bcl-2 protein level in NB4/VEGF-C cells xenografts was higher than that in controls. Conclusion VEGF-C could promote proliferation of NB4 cells by inducing angiogenesis and inhibit cells apoptosis by upregulating antiapoptotic Bcl-2 protein expression in NB4 cells xenograft tumor.     

伴淋系抗原表达的急性髓系白血病的临床及MIC分型特征

白血病细胞存在丢失某一分化发育阶段正常应有的抗原，或表达某一分化发育阶段正常不应有的抗原，或表达其他系列抗原的特征。因此白血病细胞抗原表达与正常造血细胞不同，部分丧失了系列专一性和分化的严格性。伴淋系抗原（Ly）表达的急性髓系白血病（Ly^＋AML）是一组具有异质性的AML，其临床、MIC分型及预后特点，目前已逐渐引起重视。我们总结了155例Ly^＋AML患者的MIC分型及临床特征，并与279例Ly^-AML进行比较，现报道如下。