结核分枝杆菌优势蛋白PPE37重组载体的构建及原核表达

目的构建结核分枝杆菌ppe37基因的重组原核表达质粒,并将其转化到E.coli BL21中诱导表达。方法以结核分枝杆菌国际标准株H37Rv基因组DNA为模板,PCR法扩增ppe37基因,将其克隆至pEasyE2克隆载体中,构建pEasyE2-ppe37重组质粒。经双酶切后将ppe37基因片段亚克隆到pET30a载体中,构建重组原核表达质粒pET30a-ppe37,并转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达。利用SDS-PAGE及WesternBlot对表达产物进行鉴定。结果 PCR法扩增出约1600bp的条带。重组质粒pEasyE2-ppe37经PCR及双酶切鉴定构建正确,测序结果与GenBank中登录的PPE37蛋白基因序列一致。重组原核表达质粒pET30a-ppe37经PCR及双酶切鉴定构建正确。SDS-PAGE鉴定表达的组氨酸标签重组蛋白相对分子质量约为50KDa,Western blot验证重组蛋白可与抗组氨酸单抗发生特异性反应。结论成功构建结核分枝杆菌ppe37基因重组原核表达质粒pET30a-ppe37,并成功诱导表达,为PPE37蛋白作为结核病特异性诊断抗原的开发奠定了基础。     

钩藤汤治疗脾虚肝旺型小儿抽动障碍42例临床观察

目的:观察张耀主任中医师治疗脾虚肝旺型小儿抽动障碍的有效性,为其临床治疗提供用药参考。方法:2016年9月~2017年9月,选择脾虚肝旺型小儿抽动障碍患者42例,运用《良方》钩藤汤随证加减治疗。结果:本组42例患者中,临床治愈26例,显效13例,无效3例,总有效率92. 86%。结论:钩藤汤加减治疗小儿抽动障碍脾虚肝旺型疗效确切,值得临床推广。     

肺性脑病中医治疗体会

肺性脑病属于内科危急重症之一，是由于慢性肺胸疾患发展到严重阶段呼吸衰竭时，导致机体严重缺O2伴有CO2潴留所引起的一系列中枢神经精神症状综合征。其发生率约为40％-50％，死亡率为30％左右。肺性脑病在中医古籍中无专门论述，但在“喘证”、“痰饮”、“肺胀”、“闭证”、“痉证”、“脱证”等病症中均有类似本病的主要症状记载。     

抑制miR-21表达的腺病毒载体构建、病毒包装及其对HepG2细胞的作用

目的:构建能高效抑制成熟miR-21小分子表达的腺病毒载体,探讨其对肝癌细胞株HepC2的影响与机制.方法:基于miRNA sponge技术,合成一段与miR-21序列完全互补的8个重复片段,克隆至穿梭载体pAdTrack-CMV中,经酶切、测序鉴定正确无误后,与pAdEasy-1腺病毒骨架质粒进行同源重组,转染至293A细胞中,包装成重组腺病毒感染HepG2细胞,通过Hochest33258染色、Western blot法及MTT试验检测细胞的凋亡与增殖水平.结果:经酶切、测序及GFP表达证实,成功构建了携带与miR-21互补的DNA片段的重组腺病毒.经Hochest33258染色、Western blot法及MTT试验证实,该重组腺病毒可以抑制HepG2细胞中miR-21的表达并抑制HepG2细胞的增殖,促进细胞的凋亡.结论:重组包装的抑制miR-21表达的腺病毒可有效的降低miR-21在HepG2细胞中的表达,抑制HepG2细胞的增殖.     

5·12地震灾害紧急医疗救援

目的:回顾大地震突袭我市周边地区,短时间内,来自北川、安县、平武等地大量伤员,不断运抵现场,需要紧急救治。方法:本院迅速组织人员、车辆、药品、器械、通讯、物资等力量,及时到达九州体育馆,立即开展紧急救援,进行搜寻、分检、急救,识别、监测和伤情的评估。结果:24000余例伤病员经止血、清创、包扎、固定、控制感染、吸氧等处理,全部伤病员实现安全分流、转运。结论:伤病员因及时得到有效救治,平稳渡过了生理极限即致死性三联征之前的一段时间,紧急救援取得显著成效。     

分析卡维地洛治疗老年不稳定型心绞痛的临床疗效以及药理作用

目的 探讨老年不稳定型心绞痛治疗中使用卡维地洛的临床疗效和药理作用。方法 100例老年不稳定型心绞痛的患者,随机分为对照组和试验组,各50例,两组患者进行常规治疗的基础上对试验组患者加用卡维地洛,对两组患者心率(HR)、舒张压(DBP)、收缩压(SBP)、内皮素(ET)和血浆中一氧化氮(NO)的变化和治疗效果进行比较。结果 经治疗后,试验组HR、DBP、SBP和ET的下降幅度明显大于对照组,试验组NO的改善效果明显好于对照组NO的改善效果,试验组患者的总有效率为98.00%,明显高于对照组患者的总有效率70.00%,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 老年患者不稳定型心绞痛的治疗中加用卡维地洛取到了显著的效果,患者的生活质量得到了有效的改善,安全性较高,值得临床上广泛使用。     

BCG对小鼠RAW264.7巨噬细胞miR-203、miR-142-3p、miR-21表达的影响

目的:检测卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin,BCG)刺激巨噬细胞后miR-203、miR-142-3p、miR-21表达量的变化,为研究microRNA(miRNA)在巨噬细胞抗结核分枝杆菌免疫应答中的调控作用提供依据。方法:利用浓度为1.0×107ml-1的BCG刺激培养的小鼠RAW264.7细胞,分别在4、8、12、24小时提取细胞small RNA,并利用相应的茎环反转录引物,反转录成cDNA,同时构建成熟miR-203、miR-142-3p、miR-21的T载体,绘制标准曲线,利用Real-Time PCR检测miR-203、miR-142-3p、miR-21的表达量。结果:BCG作用RAW264.7细胞4、8、12、24小时后,miR-21表达显著性上调(10倍以上,P<0.05),miR-142-3p表达显著性下调(20倍以上,P<0.05),miR-203在4、8、12小时表达下调(3倍以上,P<0.05),24小时后表达上调(2倍以上,P<0.05)。结论:BCG刺激RAW264.7巨噬细胞后,miR-203、miR-142-3p、miR-21的表达发生显著性变化,说明这些miRNA可能通过调控免疫相关基因在巨噬细胞抗结核分枝杆菌的免疫应答中发挥着重要的作用。     

pri-miR-21重组腺病毒载体构建及其对TLR4基因调控的研究

目的:构建能高效表达成熟miR-21小分子的腺病毒载体,探讨其对TLR4基因的靶向调控关系。方法:以正常小鼠基因组DNA为模板,PCR扩增pri-miR-21基因,克隆至穿梭载体pAdTrack-CMV中经PCR、酶切及基因测序分析正确无误后,与pAdEasy-1腺病毒骨架质粒进行同源重组,并利用293A细胞,包装成pri-miR-21重组腺病毒感染HeLa细胞,通过Western blot检测TLR4的蛋白表达水平,验证miR-21与TLR4靶向调控的关系。结果:经PCR、酶切、测序及GFP表达证实,成功构建携带pri-miR-21基因的重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒。Western blot证实,miR-21可抑制TLR4蛋白的表达。结论:所制备的小鼠pri-miR-21重组腺病毒,可以高效表达成熟miR-21小分子,能够抑制靶基因TLR4的表达。