造血干细胞移植中HLA—Ⅱ类基因分型影响因素的探讨

目的：为了准确地进行造血干细胞移植供－受体的ＨＬＡ－Ⅱ类配型，对ＨＬＡ－Ⅱ类基因分型实验的影响因素进行了探讨。方法：采用美国莱姆达公司提供的微量ＳＳＰ＾ＴＭＨＬＡ－Ⅱ类ＰＣＲ－ＳＳＰ分型试剂盒对４００例造血干细胞移植供－受体进行基因分型。结果：采用０．５％ＥＤＴＡ抗凝的血标本与肝素抗凝的血标本相比，前者的护增效果好。ＤＮＡ终浓度为２５～２００ｎｇ／ｕｌ，最佳浓度为１００ｎｇ／ｕｌ，Ａ２６０／Ａ２８     

不完全相合造血干细胞移植中GVHD的预测研究:模拟HLA抗原结构的比较与应用

采用通用的微量淋巴细胞毒实验和序列测定方法对拟进行造血干细胞移植的患者及供体进行HLA分型；用计算机分子模拟手段，从HLA分子三维结构方面探讨预测移植物抗宿主病（GVHD）发生程度，以预测移植后GVHD的发生情况。结果发现，8例供受体中，3例为半匹配移植，其中2例发生了Ⅳ度GVHD，1例发生了Ⅱ度GVHD；3例为两个抗原不相合移植，其中1例发生了Ⅱ度GVHD，2例发生了Ⅱ度GVHD；2例口才为一个抗原不相合移植，分别发生了Ⅰ度、Ⅱ度GVHD；GVHD的发生程度与HLA不相合抗原RMSD差异的大小呈正相关。提示异基因造血干细胞移植时，GVHD发生程度与HLA分子三维结构的差异有密切关系，三维结构分子模拟进行GVHD预测可以为临床医生提供较好的预后指标。     

HLA-A抗原的三维结构模型预测GVHD的发生

如何准确预测GVHD的发生始终是造血干细胞移植领域中十分棘手的难题。采用HLA抗原三维结构的模型来预测GVHD的发生是移植免疫研究的最新进展之一。我们在对17个移植家系进行筛选时,发现了一个供、受体HLA-A位点不合的家系,临床移植后该患者发生了Ⅳ级GVHD。本实验采用高分辨巢式PCR-SSP和DNA序列测定证实患者的HLA-A位点发生了重组(A~*6901→A~*0201)。进行蛋白质三维结构模型分析显示,供、受体差异抗原的空间构象存在明显差异。可能会成为移植后发生GVHD的分子基础,从而验证了我们的实验结果和理论推断。由此可见,该HLA抗原三维结构模型在预测GVHD的发生中具有重要意义。     

造血干细胞移植中HLA-II类基因分型影响因素的探讨

目的: 为了准确地进行造血干细胞移植供-受体的HLA - II 类配型,对HLA - II 类基因分型实验的影响因素进行了探讨.方法:采用美国莱姆达公司提供的微量SSPTM HLA-II类PCR-SSP分型试剂盒对400例造血干细胞移植供-受体进行基因分型.结果:采用0.5 %EDTA抗凝的血标本与肝素抗凝的血标本相比,前者的扩增效果好.DNA终浓度为25～200 ng/μl,最佳浓度为100 ng/μl,A260/A280比例在1.65～1.80之间.PCR反应参数是影响反应的重要因素之一.DNA Taq酶的使用量和活性将直接影响反应结果.D-MIX管应保存在-65℃,避免反复冻融,否则将使反应带变弱.结论:HLA-II类基因分型标本的处理和反应条件的优化是影响基因分型效果的因素.     

影响胸腰椎爆裂骨折椎管减压手术效果的多因素分析

[目的]探讨胸腰椎爆裂骨折椎管减压手术效果的影响因素.[方法]选取本院手术治疗的83例胸腰椎爆裂骨折患者作为研究对象,根据患者术后椎管前后径与邻近椎管前后径之比是否≥90％ 分为减压良好组(57例)、减压不良组(26例).对比两组患者的年龄、性别、体重指数(BMI)、受伤原因、损伤节段、AO分型、ASIA分型(A～E级...     

重组人IL-6D24-PE40外毒素融合蛋白的构建及其生物学效应

目的 构建重组人白细胞介素6－绿脓杆菌外毒素融合蛋白IL－6D24－PE40,以选择性杀伤高表达IL－6受体（IL－6R）的肿瘤细胞和白血病细胞。方法 采用重叠延伸的基因融合技术将N－末端缺失24个氨基酸的重组人白细胞介素6（IL－6D24）cDNA与缺失细胞结合区的绿脓杆菌外毒素PE40基因进行融合,构建IL－6D24－PE40融合基因。利用HB101／pBV220表达系统,实现了IL－6D24－PE40融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达,经MonoQ柱进行层析纯化,采用MTS法检测细胞毒活性。结果 IL－6D24－PE40融合蛋白在大肠杆菌中的表达水平达到40％－60％。包涵体蛋白经分离、复性及纯化得到纯度＞95％的融合蛋白。Western blot证明,纯化的融合蛋白与IL－6抗体及PEA抗体均发生特异性结合。细胞毒活性检测证实,IL－6D24－PE40融合蛋白能高度特异地选择性杀伤高表达IL－6R的U937细胞,ID50约为250ng/ml,而对不表达IL－6R的CEM细胞无杀伤作用。结论 IL－6D24－PE40融合蛋白能够选择性杀伤高表达IL－6R的靶细胞,有希望成为导向治疗高表达IL－6／IL－6R系统的某些白血病和其他肿瘤的新型导向药物。     

造血干细胞移植中供—受体配型选择新标准—HLA分子模拟三维结构匹配

为了确定人类白细胞抗原（HLA）三维结构配型的标准,总结出主要的可允许错配和免疫原性错配等位基因。我们采用分子模拟技术模拟了HLA分子的三维结构。用计算机软件比较模拟结构间的差异大小,结果表明,HLA分子模拟结构间的差异不同,在大量统计分析基础上可以认为,HLA-A和-B分子整体相对均方差（relative mean square deviation,RMSD,单位nm)大于0.04nm为差异显,小于0.02nm为差异不显;DRB1位点间RMSD大于0.02nm为差异显,小于0.01nm为差异不显,据此进一步总结了主要的可允许错配和免疫原性错配等位基因情况。本研究提示,HLA三维结构配型是移植配型领域的新观点,值得进一步深入研究。     

细胞因子-受体介导靶向杀伤白血病细胞的新策略IL-6/IL-6R系统介导重组IL-6-PE40外毒素融合蛋白的特异性杀伤

鉴于白血病细胞异常高地表达IL-6/IL-6R系统,而正常造血细胞几乎不表达抑或微量表达这一事实,我们本研究率先在国际上开展了利用IL-6/IL-6R系统介导重组IL-6-PE40外毒素融合蛋白特异性杀伤高表IL-6R白血病新策略的科学性及可行性的探讨.构建并表达及纯化IL-6-PE40;应用核酸及蛋白质序列软件GOLDKEY系统计算机模拟分析IL-6-Linker-PE40及IL-6-PE40的柔性、抗原性、亲水性及表位等分子生物学特性;建立了表达人IL-6R的大鼠急性早幼粒白血病细胞模型;鉴定了人IL-6R基因在LT12中的表达;分析了人IL-6R基因的整合对LT12-IL-6R~ 细胞模型生物学特征的影响及IL-6-PE40对白血病及正常造血细胞的体外作用和IL-6R的白血病及正常大鼠的体内效应.结果发现:①利用     

基因重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子/白细胞介素-3融合蛋白在猕猴中的药代动力学

目的　研究重组人粒 /巨噬细胞集落刺激因子 白细胞介素 3融合蛋白 (PIXY32 1)在猕猴中的药动学。方法　12 5I 标记结合反相高效液相和酸沉淀法。结果　 12 5I PIXY32 1纯度为 94 5 % ,标记前后PIXY32 1对TF 1细胞增殖的ED50 分别为 0 12 5和 0 119μg·L-1。12 5I PIXY32 1在体内迅速降解。iv和sc后末端T1/ 2 相近 ,为 6 6～ 8 2h。AUC随sc剂量增大 ,全身清除率ClS 相近 ,sc生物利用度6 3 %± 2 1%。泌尿系统浓度最高 ,胆汁其次 ,骨髓和脾脏高于其它组织略低于血清 ,脑内最低。主要经尿排泄 ,少部分在尿中以原型排出。结论　猕猴sc12 5I PIXY32 12 0～ 80 μg·kg-1后为线性药代动力学。肾脏在12 5I PIXY32 1的降解中起一定作用     

HLA-I类PCR-SSP基因分型在异基因造血干细胞移植中的应用

目的：提高异基因造血干细胞移植供、受者HLA－I类配型的精确度,有效防止移植物抗宿主病（GVHD）的发生。方法 采用准确、简便的DNA、RNA提取方法和HLA－I类PCR－SSP基因分型方法。建立HLA－A33、A68、B40、B13 PCR－SSP分型方法以及HLA基因序列测序分析。结果：对300例中清学难以判断结果的30例临床标本进行基因水平的研究发现,DNA及RNA提取方法可以满足此项研究对样本的要求。HLA－I类PCR－SSP分型方法具有良好的稳定性、可靠性和特异性;重复率达100％。同时,HLA－A33、A68、B40、B13结果与HLA－I类PCR－SSP分型结果一致。HLA基因测序分析进一步肯定了HLA－I类PCR－SSP分型的特异性。HLA－I类PCR－SSP不受某些血清学影响因素的干扰。整个实验过程仅耗时2．5h。结论：HLA－I类PCR－SSP基因分型方法准确、特异、重复性好,可作为临床骨髓移植配型和正常人群无关供者筛选的常规方法,对GVHD的发生必将起到重要的预防作用。