花生四烯酸对游离脂肪酸诱导肝细胞胰岛素抵抗的缓解作用研究

目的：探讨游离脂肪酸（FFA）诱导肝细胞胰岛素抵抗及花生四烯酸（从）在软脂酸（PA）诱导的肝细胞胰岛素抵抗中的作用。方法：分别用不同浓度的PA和从与HepG2细胞共同培养不同的时间，并设立正常对照组（Coatrol组）。采用葡萄糖氧化酶法测定培养液中的葡萄糖浓度，蒽酮法测定细胞内糖原含量以确定HepG2细胞产生胰岛素抵抗程度．结果：1．0．25mmol／L PA组中的葡萄糖浓度高于Control组和PA＋AA（20umol／L）组（P〈0．05），糖原含量低于Control组和PA＋从（20umol／L）组（P〈0．05）。2，PA从（20umol／L）组与0．25mmol／L PA组比较，PA＋AA（50umol／L）组与Control组比较，葡萄糖浓度和糖原含量变化有显著意义（P〈0．05）。结论：高浓度的PA可以诱导肝细胞产生胰岛素抵抗，并呈现剂量依赖性；一定浓度的从能够缓解PA引起的胰岛素抵抗。     

移行上皮反应基因TERE1的结构与功能分析

目的 用生物信息软件分析移行上皮反应基因TERE1蛋白的跨膜结构,并预测分析其重要蛋白结构域功能.检测TERE1在细胞中表达定位.方法 采用不同生物信息学软件预测分析TERE1的蛋白跨膜结构及重要结构域功能.采用分子克隆方法构建绿色荧光蛋白-移行上皮反应基因(pEGFP-TERE1)重组质粒,转染人膀胱癌细胞系T24,激光共聚焦显微镜观察TERE1在细胞中表达定位.结果 TERE1蛋白为多次跨膜的蛋白,保守的区域形成3个环loop 1、loop 2和loop 3;N端和loop 1合有高度保守的位点;以loop 2和loop 3之间的区域采用PROSITE软件分析显示UbiA类异戊烯转移酶家族具有一致性序列.采用菌液PCR、双酶切鉴定和DNA测序验证pEGFP-TERE1重组质粒构建成功.TERE1主要在T24细胞浆中表达.结论 TERE1为多次跨膜的蛋白,保守的区域形成3个环,UbiA类异戊烯转移酶家族具有一致性序列.TERE1主要在T24细胞浆中表达.     

应用aCGH技术对胎儿染色体大片段重复进行产前诊断

目的对产前B超检测出现异常的胎儿应用基于芯片的微阵列比较基因组杂交(aCGH)技术检测其遗传物质的变异,该研究中检测的是染色体较大片段的重复。方法通过超声波对胎儿进行健康状况的检测与分析,对检测出的1例异常胎儿进行羊膜腔穿刺获取胎儿脱落细胞样本,进一步利用aCGH技术对提取的样本DNA进行全基因组高分辨率扫描,检测并判断导致胎儿异常的遗传物质变异,并进行相关疾病的预测。结果 aCGH扫描检测出在该胎儿染色体13q22.2q34区带存在大小为38.51M的重复[(76,432,267~114,946,264)×3]。通过数据库及文献的检索发现该重复可能与13号染色体三体征前脑无裂畸形、膈疝等疾病相关。结论利用aCGH技术可以方便快速地鉴定和分析染色体重复的变异,也能高效地对染色体重复片段进行定位,该技术的广泛使用有助于对染色体遗传物质变异引起的疾病进行快速产前诊断以及一些复杂疾病的早发现。     

PLAGL2与SP-C基因启动子相互作用的研究

目的研究PLAGL2(pleiomorphic adenoma gene like-2,PLAGL2)对SP-C基因(surfactant pro-tein-C,SP-C)启动子的结合与影响作用。方法定点诱变技术(site-directed mutagenesis)及凝胶电泳迁移实验(electrophoresis mobility shift assay,EMSA)研究PLAGL2与SP-C基因启动子之间的相互结合作用;体外培养MLE12细胞共转染和荧光素酶报告基因活性值检测技术,研究PLAGL2对SP-C基因启动子表达活性的影响;结果EMSA及竞争性EMSA实验表明:PLAGL2能通过其核心和簇结合位点序列与同位素标记的SP-C基因启动子片段相结合形成蛋白-DNA复合物;细胞共转染及荧光素酶报告基因活性值检测结果显示:PLAGL2能明显促进SP-C基因启动子的表达。结论在肺Ⅱ型细胞中,PLAGL2能与SP-C基因启动子相互作用并促进其表达。     

肺表面活性蛋白C基因异常与婴幼儿肺间质性疾病

肺表面活性蛋白C(surfactant protein C,SP-C)基因是目前被发现的唯一仅在肺泡Ⅱ型上皮细胞中表达的肺表面活性蛋白基因,其蛋白表达产物SP-C是构成肺表面活性物质的小分子疏水性蛋白之一,具有调节肺泡液-气界表面张力、维持肺表面活性膜的稳定及参与肺器官局部防御体系等重要的生理功能。SP-C基因异常可造成SP-C结构变化和功能丧失,从而导致各种婴幼儿肺疾病,其中,肺间质性疾病(in- terstitial lung disease,ILD)的发病与SP-C基因突变的关系尤为密切。     

妊娠中、后期胎儿染色体病的产前诊断

目的通过对妊娠中、晚期高危孕妇羊水细胞及脐血染色体的核型分析,进行胎儿染色体病的产前诊断,了解胎儿染色体异常发生情况及与各种产前诊断指征的关系。方法对2001年～2009年来我院遗传门诊就诊的456例符合产前诊断指征的妊娠中晚期孕妇进行羊膜腔穿刺术或脐血管穿刺术抽取羊水或脐带血进行染色体核型分析。结果在456例孕妇中发现27例染色体异常,占5.92%,数目异常16例(59.26%),其中21-三体7例,18-三体6例,13-三体1例;结构异常11例(40.74%),包括平衡易位6例,倒位4例,缺失1例。结论染色体三体型是妊娠中晚期最常见的染色体病,孕中期母血清学筛查和胎儿系统超声检查可提高胎儿染色体病的产前诊断率。     

单个细胞染色体畸变的遗传学分析及实验对策

目的对外周血中单个细胞染色体畸变的类型及其临床表现进行遗传学分析并探讨相应对策。方法取两种培养基,采用外周血常规培养法,培养72h后收获制片,G显带,进行核型分析,以每30～100个分裂相中找到1个异常染色体核型作为单个细胞染色体畸变的诊断标准,并比较两种培养基中出现单个细胞染色体畸变的比例。结果26例外周血单个细胞染色体畸变的畸变类型可分为平衡易位,不平衡易位,倒位,缺失及性染色体数目异常等;主要临床表现包括性发育异常,不良生育史及病残等;两种培养基中出现单个细胞染色体畸变的比例有显著性差异。结论在遗传咨询中,单个细胞染色体畸变有一定的临床意义,具有这种异常的个体生育后代时可考虑做产前诊断;染色体制备要严格控制条件,使用有正规批号的培养基。     

花生四烯酸改善饱和脂肪酸诱导肝细胞胰岛素抵抗的作用机制

目的探讨花生四烯酸（AA）改善软脂酸（PA）诱导的肝细胞胰岛素抵抗（IR）的作用机制。方法分别用0.25 mmol/L PA和PA＋50μmol/L AA与HepG2细胞共同培养24 h,并设正常对照组。测定每组在有无胰岛素刺激时及胰岛素刺激情况下加和不加入PI3K抑制剂WT或PKC抑制剂CC时细胞内糖异生限速酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）活性和胰岛素受体底物2（IRS-2）蛋白水平。结果PA组基础及胰岛素刺激的PEPCK活性比对照组和PA＋AA组明显升高,IRS-2蛋白下降（P〈0.05）。加入WT与否,对照组和PA＋AA组PEPCK活性、IRS-2蛋白水平有明显差异（P〈0.05）;加入CC与否,对照组和PA＋AA组IRS-2蛋白水平有明显差异（P〈0.05）;PA组均无变化。结论肝细胞IR时,胰岛素信号转导通路的PI3K途径和PKC通路可能存在严重障碍。AA通过纠正异常的糖代谢关键酶活性和胰岛素信号蛋白量,改善胰岛素信号转导通路缺陷,缓解PA引起的IR。     

蛋白质异戊烯化修饰与抗肿瘤研究

蛋白质经过异戊烯化翻译后修饰正确的定位于膜上,在生物体内的信号转导过程(如异三聚体G蛋白)中起非常重要作用.其修饰过程包括异戊烯化、蛋白水解、甲基化以及棕榈化等.目前已知主要有3种蛋白质异戊烯化转移酶:法尼酰基转移酶(FTase)、二牛龙牛儿基转移酶Ⅰ(GGTaseⅠ)、二牛龙牛儿基转移酶Ⅱ(GGTase Ⅱ).作用于异戊烯化修饰的关键酶或下游因素是目前抗肿瘤的主要策略之一.