多药联合应用抗多重耐药鲍曼不动杆菌的实验研究

目的分析不同抗菌药物单用和联合应用抗多重耐药鲍曼不动杆菌效果。方法检测36株多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药基因,测定不同抗菌药物对其中10株鲍曼不动杆菌的最低杀菌浓度(MBC),然后用该浓度的不同单种抗菌药物及抗菌药物组合治疗鲍曼不动杆菌感染的小鼠,观察各药对感染小鼠的保护作用。结果36株多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药基因均为OXA-23型。亚胺培南/西司他丁钠(泰能)、哌拉西林/他唑巴坦(特治星)、头孢哌酮/舒巴坦(舒普深)、利福平、头孢他啶、阿米卡星、环丙沙星、多粘菌素E的MBC分别为64,512,64,250,2 048,2 048,150,2μg.mL-1;哌拉西林/他唑巴坦(256μg.mL-1)使阿米卡星MBC从2 048μg.mL-1下降到64μg.mL-1,头孢哌酮/舒巴坦(32μg.mL-1)可使利福平从128μg.mL-1下降到8μg.mL-1,头孢哌酮/舒巴坦(32μg.mL-1)与阿米卡星(1 024μg.mL-1)联合应用具有抑菌效应,亚胺培南/西司他丁钠(32μg.mL-1)与阿米卡星(1024μg.mL-1)联合无效,哌拉西林/他唑巴坦(256μg.mL-1)与利福平(128μg.mL-1)、亚胺培南/西司他丁钠(32μg.mL-1)与利福平(128μg.mL-1)联合均无效;多粘菌素E[0.1 mg.(24 h)-1]、哌拉西林/他唑巴坦[140.4 mg.(24 h)-1]、哌拉西林/他唑巴坦[70.2 mg.(24 h)-1]与阿米卡星[7.8 mg.(24 h)-1]、头孢哌酮/舒巴坦[41.6 mg.(24 h)-1]与阿米卡星[7.8 mg.(24 h)-1]联合治疗对感染小鼠的保护率(%)分别为100.0%,30.0%,90.0%,90.0%,头孢哌酮/舒巴坦[83.2 mg.(24 h)-1]、亚胺培南/西司他丁钠[83.2 mg.(24 h)-1]治疗组小鼠全部死亡。结论多重耐药鲍曼不动杆菌对常见抗菌药物的MBC均显著增加。合理的多药联合不仅对治疗多重耐药鲍曼不动杆菌有效,而且可以减少药物剂量。     

微流体芯片在乙型肝炎病毒基因型检测中的应用

目的：探讨微流体芯片检测乙型肝炎病毒基因型的价值。方法：应用微流体芯片及基因测序技术检测41例慢性乙型肝炎患者感染的乙型肝炎病毒基因型；比较两种方法检测结果的一致性。结果：41例HBV患者中B基因型21例（51．2％），C基因型20例（48．8％），未检测到B＋C混合基因型感染。微流体芯片检测结果与基因测序结果完全一致。结论：微流体芯片技术可以准确快速检测乙型肝炎病毒基因型，对乙型肝炎病毒的分子流行病学研究具有重要意义。     

肺炎支原体感染的致病机制及实验室检测

肺炎支原体对呼吸道上皮细胞的黏附以及在其上面滑动是导致肺炎发生的先决条件,机体通过抗体和补体调理吞噬并最终引起细胞毒作用和炎症反应,其中过氧化氢和社区获得性呼吸窘迫综合征毒素是肺炎支原体的重要毒力因子。肺炎支原体实验室检测包括培养、血清学实验和核酸扩增检测技术（NAATs）,由于NAATs具有高灵敏度和短周转时间,被认...     

联检多项指标对类风湿关节炎诊断的临床价值

目的:探讨类风湿因子(Rheum atoid factor,RF)、抗角质蛋白抗体(AKA)、C-反应蛋白(C-reactiveprote in,CRP)和血沉(erythrocyte sed im entation rate,ESR)联检对类风湿关节炎(rheum atoid arthritis,RA)的临床诊断价值。方法:对35例类风湿关节炎患者、30例系统性红斑狼疮和30名正常健康体检者的RF、AKA、CRP及ESR检测,应用速率散射比浊法测定RF和CRP;间接免疫荧光法检测AKA;应用魏氏法测定ESR值。结果:35例RA患者血清中,RF灵敏度和特异性分别为71.4%、91.7%,AKA灵敏度和特异性分别为34.3%、96.7%,CRP灵敏度和特异性分别为91.4%、25%,ESR灵敏度和特异性分别为88.6%、83.3%。联检RF和AKA的灵敏度和特异性分别为81.2%、99.7%,联检RF、AKA、CRP及ESR的灵敏度和特异性分别为99.98%、99.97%。结论:RF、AKA、CRP及ESR可作为RA诊断的血清学指标,且四者联检有助于提高RA诊断的灵敏度及特异性。     

蟾酥体外抑菌活性的实验研究

目的：探讨蟾酥的体外抑菌活性。方法：采用琼脂扩散法和微量稀释法研究蟾酥对临床常见分离菌株的抑菌圈直径和最小抑菌浓度,以及不同抗菌药物与蟾酥联合作用对临床常见分离株最小抑菌浓度的改变。结果：醇提蟾酥对临床常见分离株均具有一定的抑菌效果,最小抑菌浓度可达3.125mg/mL。醇提蟾酥与不同的抗菌药物联合使用,可以降低抗菌药物的最小抑菌浓度。不同的提取方法影响蟾酥的体外抑菌活性。结论：乙醇能有效提取蟾酥抗菌活性成分。醇提蟾酥对常见临床分离株,特别是阴性杆菌具有一定的抑菌活性。蟾酥与不同抗菌药物具有协同抑菌作用。     

幽门螺杆菌cheA基因在细菌体外趋化和体内定植过程中的作用

目的 了解cheA基因在幽门螺杆菌体外趋化和体内定植中的作用.方法 从幽门螺杆菌NCTC11637株基因组DNA中扩增并克隆全长cheA和cheY基因.构建该两个基因原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提取目的 重组蛋白rCheA和rCheY.rCheA和rCheY免疫家兔制备抗血清,采用硫酸铵沉淀法及DEAE-52柱层析法制备rCheA-IgG和rCheY-IgG.构建cheA基因自杀质粒,根据同源重组交换原理利用该自杀质粒构建cheA基因敲除突变株(cheA-),采用PCR及测序对cheA-突变株进行鉴定.采用rcheA-IgG和rCheY-IgG锚定靶蛋白及蛋白磷酸化检测试剂盒,测定cheA-突变株与野生株CheA和CheY分子磷酸化水平.采用幽门螺杆菌趋化模型及BALB/c小鼠感染模型,比较cheA-突变株与野生株体外趋化及体内定植能力的差异.结果 PCR及测序结果证实cheA-突变株基因组中cheA基因被敲除.0.001～0.1 mol/L盐酸作用10 min,野生株CheA和CheY磷酸化水平分别从(59.6±11.5)和(55.5±10.2)μmol迅速下降至(10.8±2.6)和(5.5±1.2)μmol(P＜0.05),cheA-突变株CheY磷酸化水平均较低且无明显变化(P＞0.05).cheA-突变株对盐酸、硫酸和乙酸趋化聚集环直径[(10～20)±(2～3)mm]明显小于野生株[(16～24)±(2～3)mm],P＜0,05.野生株感染小鼠胃黏膜标本中幽门螺杆菌分离阳性率(90%)明显高于cheA-突变株(40%),P＜0.05;荧光定量PCR结果也显示野生株感染小鼠胃黏膜标本中幽门螺杆菌数量(6.3×103±2.1×103拷贝/mg)也明显高于突变株的(8.3×101±3.1 ×101拷贝/mg),P＜0.05.结论 cheA基因在幽门螺杆菌体外趋化和体内定植中有促进作用.     

T3/T4、TSH、AKP对无痛性甲状腺炎及Graves'病的鉴别诊断价值

无痛性甲状腺炎（Painless Thyroiditis，PT），又称为静寂性甲状腺炎。主要由于甲状腺滤泡被破坏，甲状腺素释放而引起甲状腺素过多，临床表现为怕热、多汗、消瘦等。与Graves’病的临床表现极为相似，极易误诊为Graves’病。二者的病因不同，治疗也不一样。无痛性甲状腺炎是一种自限性疾病，给予β受体阻断剂即可改善症状，而无需抗甲状腺素药物。本文检测了血清中．T3／T4、TSH、AKP（ALP），探讨其在PT和Graves’病鉴别诊断中的价值。     

乙醇去除血清纤维蛋白原在蛋白电泳中的临床价值

目的探讨用乙醇去除血清中纤维蛋白原（FG）在蛋白电泳时的临床应用价值。方法用无水乙醇选择性沉淀20例健康体检者（正常组）和20例留置导管患者（观察组）血浆和血清中的FG，并对其蛋白电泳结果进行分析比较。结果正常组血浆和观察组血浆、血清中FG在处理前后均差异有显著性（P〈0．叭），而TP、IgG、IgM和IgA．在处理前后差异无显著性（P〉0．05）。结论蛋白电泳前用乙醇除去血清中纤维蛋白原是一种简便、有效的方法，同时对临床中使用留置导管的患者有一定的应用价值。     

AllGlo探针4重荧光定量PCR技术同时检测4种疱疹病毒

目的 探讨多重荧光定量PCR技术的优化条件,建立基于AllGlo探针技术荧光定量法检测4种疱疹病毒新方法.方法 分别采用单重和多重定性PCR扩增临床常见4种疱疹病毒[单纯疱疹病毒1型(HSV-1)、HSV-2、Epstein-Barr病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)]并测序鉴定,然后分别采用AllGlo探针和TaqMan探针的单重和多重定量PCR技术对4种疱疹病毒进行单种和多种病毒同时定性定量检测.结果 TaqMan探针和AllGlo探针单种疱疹病毒检测阳性率和特异性均为100％,AllGlo探针单重定量PCR检测比4重探针单种定量PCR的检测Ct值高1～3,AllGlo探针4重定量PCR可以同时检测4种疱疹病毒,相同样品AllGlo探针4重定量PCR检测与单探针单重定量PCR分别检测的结果符合率100％.结论 AllGlo探针荧光定量PCR技术的通量、灵敏度和特异性均高于TaqMan探针,应用前景广阔.     

乳汁样本乙型肝炎病毒DNA提取方法探讨

目的 探讨不同样本处理方法对乳汁样本中HBV DNA定量结果的影响,筛选出适合临床实验室检测病毒DNA的样本前处理方法.方法 分别采用专用DNA提取液法、碱裂解法、酸化法、无水乙醇法和冷藏法,提取不同HBV DNA载量的乳汁样本中的HBV DNA,然后进行荧光定最PCR检测.结果乳汁样本中的HBV DNA>10~4 IU/mL时,以专用DNA提取液法、碱裂解法、冷藏法处理的乳汁样本HBV DNA结果阳性率达100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,酸化法和无水乙醇法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测,且NaOH浓度应控制在0.4%～1.0%之间. HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,酸化法和无水乙醇法 理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测,且NaOH浓度应控制在0.4%～1.0%之间. HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符 率100%,酸化法和无水乙醇法 理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测,且NaOH浓度应控制在0.4%～1.0%之间. HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符 率100%,酸化法和无水乙醇法 理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测