人白细胞介素2受体α链在因第三内含子的克隆与核苷酸序列分析

应用ＰＣＲ技术扩增了人白细胞介素２受体ａ链（ＩＬ２Ｒα）基因第三内含子２５ｋｂ片段，并成功地克隆到ｐＢＳＳＫ载体中。构建了一系列亚克隆并测定了２５ｋｂ全核苷酸序列，其中２２２８ｂｐ碱基序列为国内外首次测定，其数据已被ＧｅｎＢａｎｋ接受，接受号为Ｕ５６３８９。通过计算机分析发现ＩＬ２Ｒα基因第三内含子具有典型的Ｇ↓ＧＵ……Ｐｙｒｉｃｈ（∽１５ｂｐ）ＮＣＡＧ↓Ｇ结构特点，但在３’剪接点５’上游５００ｂｐ范围内未发现分支点结构，该序列的确定为进一步了解ＩＬ２Ｒα基因组的结构和变异剪接的机理奠定了基础     

白细胞介素2受体α基因负调控元件相关结合蛋白的筛选与克隆

白细胞介素２受体（IL-２R）α亚基的胞内末端较短，可能不直接参与IL-２的信号传递，但它在激活淋巴细胞中的特异表达以及与IL-２结合参与淋巴细胞增殖和免疫应答强度的调控。本组曾报道IL-２Rα基因５'端顺式调控元件NRE不仅与其３'端下游NRE反向重复序列（NIRS）共同参与对I     

硫酸软骨素A及C的分离与提纯

本文报道了从牛气管中分离及提纯硫酸软骨素A(ChS-A)及硫酸软骨素C(ChS-C)的方法。为了除去与硫酸软骨素结合的蛋白质并尽量减少硫酸软骨素的降解,我们采用了两种蛋白质水解酶,即胰蛋白酶及木瓜蛋白酶,使大部分的蛋白质分解。然后再采用有机溶剂沉淀法,活化浮石土吸附法以及离子交换树脂等,以去除少量的残余蛋白。加入氯化十六烷吡啶使ChS-A及ChS-C沉淀,并利用此沉淀在不同浓度的氯化钠溶液中溶解度不同的这一特性以去除可能与ChS-A及ChS-C同时存在的其它酸性粘多糖。最后用乙醇分段沉淀法将ChS-A及ChS-C分开。用本法所提制出的ChS-A及ChS-C经化学及物理化学分析证明纯度很高。     

白细胞介素2基因的表达及热休克对它的影响

研究人外周血T淋巴细胞中白细胞介素2(IL-2)mRNA的表达和分泌IL-2的活力,实验结果表明植物血凝素(PHA)单独诱导IL-2的能力很弱,诱导过程较长;加入促癌剂12-0-十四酰佛波-13-乙酯(TPA)后能诱导IL-2的早期转录,并增强16h后PHA诱导的转录作用和培养细胞的上层液中IL-2的活力。45℃,10min的热休克不影响IL-2的诱导合成。在分析、比较PHA,TPA和/或热休克影响的基础上,对T淋巴细胞激活过程中IL-2基因表达的调控机制进行了讨论。     

野生型90β对热休克蛋白90β基因表达的调控作用

为了阐明野生型p53在热休克蛋白90β(hsp90β)基因表达调控中的作用,我们利用野生型p53的表达质粒转染Jurkat细胞,发现野生型p53可以剂量依赖方式抑制hsp90β基因的启动子活性,并且证实hsp90β基因的表达在mRNA和蛋白水平均明显减少.     

肿瘤抑制剂GA对SH-SY5Y细胞凋亡的影响及分子机制研究

为了探讨HSP90特异的功能抑制剂geldanamycin(GA)能否用于神经母细胞瘤的临床治疗 ,通过检测未分化的和全反式维甲酸 (RA)诱导分化的神经母细胞瘤SH SY5Y细胞在不同浓度GA处理后的细胞存活率 ,发现GA呈剂量依赖性诱导SH SY5Y细胞凋亡 ,但是分化细胞对同样剂量的GA不是很敏感 [细胞存活率依次为 (82 0±6 0 ) %比较 (6 5 0± 3 0 ) % ,P <0 0 2 ;(6 7 9± 3 1) %比较 (4 3 4± 3 9) % ,P <0 0 3;(4 3± 0 8) %比较 (0 4±0 1) % ,P <0 0 5 ]。Western印迹分析和免疫荧光实验显示 ,GA能抑制细胞中c Jun和c Fos的表达 ,并且GA剂量越高 ,其抑制越明显 ;同时GA也诱导了p5 3的核聚集。与未分化细胞相比 ,在相同剂量GA处理后分化细胞中c Jun和c Fos的表达均比未分化细胞略高 ;但是分化细胞中p5 3的核聚集却不如前者明显。提示未分化细胞对同样剂量的GA比分化细胞更敏感 ,可能与分化细胞能抵抗GA引起的c Jun、c Fos的降低以及p5 3的核聚集有关。     

地塞米松对人白细胞介素2受体α链基因表达的影响

白细胞介素２／白细胞介素２受体（ＩＬ－２／ＩＬ－２Ｒ）系统在免疫系统中起极重要作用，研究糖皮质激素对ＩＬ－２／ＩＬ－２Ｒ系统的影响有助于了解糖皮质激素免疫调节作用的分子机理。通过荧光素酶报告基因的表达及狭缝杂交，发现在Ｊｕｒｋａｔ细胞中地塞米松对ＩＬ－２Ｒα链基因ｍＲＮＡ的基础表达及ＰＨＡ的诱导表达均有直接促进作用，这种正调节作用与ＩＬ－２Ｒα链基因５＇上游一４８２ｂｐ以内近端已知的诱导转录元件无关，且与ＰＨＡ的活化机制不同，两者间具有协同效应。     

小檗碱激活PAK1/PDK1缓解胰岛素抵抗治疗糖尿病脑病的作用

目的： 观察小檗碱对糖尿病模型大鼠胰岛素抵抗及PAK1/PDK1通路的作用,并探讨其改善糖尿病脑病的作用。方法： 将100只Wistar大鼠构建糖尿病模型后分为正常组（control,Con）、糖尿病组（diabetes mellitus,DM）、小檗碱组（berberine,BBr）、二甲双胍组（metformin,Met）、石杉碱甲组（huperzine A,Hup）5组。期间监测每组大鼠体质量、饥饿血糖值、空腹胰岛素水平并计算胰岛素抵抗指数。HE染色观察神经元结构改变,刚果红染色检测Aβ42的生成,Western-blot法检测p-PAK1/PAK1与p-PDK1/PDK1的蛋白表达水平。结果： 与Con比较,DM组大鼠体质量降低,饥饿血糖值、空腹胰岛素水平及胰岛素抵抗指数增加;与DM组比较,BBr组大鼠体质量增加,饥饿血糖值、空腹胰岛素水平及胰岛素抵抗指数降低,其作用与Met组相当。与Con组比较,DM组大鼠海马神经元结构紊乱、Aβ42明显增加以及PAK-1/PDK-1信号通路显著抑制;与DM组比较,BBr组、Met组及Hup组大鼠海马神经元结构改善,Aβ42生成减少且PAK-1/PDK-1信号通路被明显激活。结论： 小檗碱一方面可直接通过降低饥饿血糖值、空腹胰岛素水平改善外周胰岛素抵抗,另一方面也可通过激活PAK1/PDK1信号通路改善中枢胰岛素抵抗从而改善糖尿病脑病。