钙调神经磷酸酶对前B淋巴细胞及其转化的白血病细胞凋亡影响的研究

本研究比较钙调神经磷酸酶（calcineurin,PP2B,PP3）在小鼠前B淋巴细胞系（S9）及其转化的白血病细胞系（S4C2）中的差异表达,并探讨其参与白血病细胞凋亡的可能机制.用实时定量PCR技术检测H2AX磷酸化酶ATM、ATR、DNA-PKs、JNK1、P38和γ-H2AX磷酸酶PP1、PP2A、calcineurin、PP4、PP6、PP5 γ-PP2c、WIP-1在S9细胞和S4C2细胞之间的表达差异.用CCK-8法和流式细胞术检测伊马替尼（IM）和环孢霉素A（CsA）对细胞的毒性作用和凋亡的影响.利用Western blot技术检测药物对S9细胞和S4C2细胞凋亡的影响.结果发现,钙调神经磷酸酶基因在白血病细胞S4C2中的表达约为S9细胞的3.5倍,而其余基因的表达在两种细胞间无明显差异.IM和CsA对S4C2细胞的促凋亡作用明显强于S9细胞,同时两种药物对S4C2细胞毒性作用高于对S9细胞的毒性作用.钙调神经磷酸酶蛋白在S4C2细胞中的表达高于S9细胞.CsA特异性抑制钙调神经磷酸酶活性后,DNA损伤标记物γ-H2AX在S9细胞的表达明显低于S4C2细胞,而伊马替尼对其表达的影响在两细胞系之间无明显差异,联合应用两种药物时γ-H2AX在S9细胞的表达也低于S4C2细胞.结论：钙调神经磷酸酶在B淋巴细胞白血病细胞中发挥一定的抗凋亡作用,环孢素A抑制钙调神经磷酸酶活性促进了白血病细胞的凋亡.     

HBsAg和HBV-DNA与银屑病关系的研究

我们在临床工作中多次发现银屑病(旧称牛皮癣(PSORIASIS)患者可伴发肝炎.刘承煌、Frantisek Novotny等也曾报告该病可伴有肝脏改变.为探讨乙型肝炎与银屑病的关系,我们于1982年对156例银屑病患者进行有关乙型肝炎的临床调查和实验研究,并从鳞屑中检出了HBsAg.1985年又对102例患者进行研究,用单克隆抗体免疫荧光、固相放免和HBV-DNA探针三种试验,从部分患者的鳞屑中检出了HBsAg和HBV-DNA.     

乙肝患者血液、精液、唾液及尿液中HBV-DNA等的检测

本文采用斑点杂交法和放射免疫法检测乙肝患者血液、唾液、尿液以及精液中的HBV-DNA和DNA-P。血清中HBV-DNA和DNA-P的阳性检出率基本一致。精液、唾液和尿液中HBV-DNA阳性者,血清中HBV-DNA均阳性。血清中HBV-DNA阴性者,唾液、尿液中均未检出HBV-DNA。血清中HBeAg阳性与否,在血清、精液,唾液、尿液中均能检出HBV-DNA。文章认为:(1)血清中HBV—DNA、DNA-P的检出率最高,传染性较强。(2)血清中HBeAg阴性者,四种体液中亦可检出HBV-DNA,不能排除其传染性。(3)唾液中HBV—DNA的检出率为45.45％,其流行病学意义值得重视。(4)精液中检出HBV-DNA,父系垂直传播也是值得研究的一个问题。     

一种新型自体NK细胞扩增培养方法的建立和初步临床应用

目的应用一种新型的自体NK细胞扩增培养方法,并进行初步的临床试验。方法采集患者静脉血30ml,用Ficoll法分离外周血单核细胞,用NKGM培养体系培养两周,收集细胞后回输患者。实验全程在GMP实验室进行,并做好质量控制。结果通过14 d的细胞培养,淋巴细胞总数扩增了约200～300倍,其中NK细胞和CD8+T细胞均扩增了约500倍,最终NK细胞和CD8+T细胞的比例约为36%～53%、38%～51%。对1例处于化疗后部分缓解的肺癌且伴多发转移的患者进行两个疗程的细胞治疗,患者血清肿瘤标志物糖类抗原(CA)19-9呈进行性降低。而且在NK细胞输注后的2～6周,仍可检测出患者外周血淋巴细胞中NK细胞的比例高达约31%。结论 NKGM培养体系可通过两周的培养使外周血单核细胞扩增约250倍,而且NK细胞的纯度可高达53%。同时,该细胞疗法具有很好的安全性和便捷性,应用于肿瘤患者可通过维持外周血NK细胞的高比例而发挥积极的临床疗效。     

抗人心肌单克隆抗体的制备及其生物学特性的初步研究

本文以人心肌抗原免疫BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获2株(2F_1和1F_6)分泌抗人心肌单克隆抗体的杂交瘤细胞系。免疫印迹试验证明,细胞培养上清及小鼠腹水中的特异性抗体均能与分子量为55KD蛋白带结合。抗原阻断试验结果,证明获得的两株单抗是人心肌抗原特异的。染色体数分别为102条和96条。1F_6和2F_1的Ig亚类型均为IgG_1。间接免疫荧光呈肌束膜型,ABC免疫组化显示肌束膜和肌原型(胞浆)。     

从银屑病鳞屑中检出乙型肝炎病毒(HBV)成份

为探讨HBV与银屑病的关系,应用免疫学和分子杂交技术,我们从银屑病患者鳞屑中检出了HBsAg,HBeAg和HBV-DNA.     

73 例沙眼衣原体引起的前列腺炎分析

为了解临床诊断为淋病患者中淋球菌和衣原体感染情况,协助临床治疗。从我院门诊病人中诊断为疑似淋病患者,其中标本采取时先用消毒棉签除与感染部位的多余粘液,女性患者用特制棉签擦取感染的尿道口或宫颈内上皮细胞,男性患者将棉签装入铝手柄后轻轻插入,施以一定压力轻轻转动,擦取尿道上皮细胞,检测试剂采用天津新传生物技术有限公司提供的淋球菌和衣原体快速诊断试剂盒,按说明书进行操作。共检测患者１０８７例,其中男性５６５例,主要症状为尿路刺激征及尿道口红肿、溢脓;１　空军总医院皮肤性病科（北京１０００３６）２　空军…     

自体黑素细胞培养移植治疗白癜风疗效评价

目的：评价黑素细胞培养移植治疗白癜风的疗效。方法：采用从发疱壁上获取黑素细胞、纯黑素细胞培养与增殖、移植区刮除种植法,进行自体黑素细胞培养移植治疗白癜风;应用计算机皮肤数字图像分析系统进行疗效评价。结果：23例白癜风患者中28块皮损进行了自体黑素细胞培养移植,总有效率为89.29%;移植后的平均灰度与正常皮肤平均灰度相接近。结论：此操作方法较简单,治疗面积大,色素分布均匀,值得临床参考应用;计算机图像分析系统的疗效评价更具有客观性。     

乙型肝炎患者尸检肝及肝外组织中HBV-DNA的检测

既往认为HBV具有严格的嗜肝性。但最近的研究表明,HBV感染不仅限定于肝脏,而且可在人体多种组织器官中存在。我们采用分子杂交技术,对3例乙肝患者尸检部分器官进行了观察。 材料和方法 1.尸检对象,为3例乙肝患者和l例非乙肝患者(做为对照),详见表1。 2.方法:(1)标本处理:取适量冻存组织块,用 PBS洗去表面物,剪成2-3mm小块。磷酸盐缓冲盐水溶液(PBS)洗3次,经胰蛋白酶消化后,洗去胰酶。加少量缓冲液,用吸管吹打使细胞分散。再用0.14MNaCl溶液洗3次,收集细胞沉淀物。(2)DNA提取;参照顾健人的方法(中华传染病杂志1984,4(2):221)。(3)斑点杂交:参照杜绍财的方法[上海免疫学杂志1084;4(4):230]。 结果:显示黑色斑点为阳性,详见表2。 表2 尸检组织器官HBV—DNA检测结果