促进胚胎干细胞来源造血干/祖细胞移植后细胞免疫功能恢复

目的:体外诱导胚胎干细胞分化为造血干/祖细胞过程中, 增加成熟T淋巴细胞的含量, 以促进其重建致死量照射小鼠的造血功能后免疫功能的早期重建。方法:胚胎干细胞在含甲基纤维素的培养基中自由分化形成胚胎体, 分化第6d添加造血生长因子, 同时添加胸腺肽, 流式细胞仪检测分化细胞中CD₃₄⁺的造血干/祖细胞和CD⁺₃的成熟T淋巴细胞含量, 最后将分化细胞注射入致死量照射小鼠体内, 观察60d, 以移植物抗宿主病(GVHD)发病率作为T淋巴细胞免疫功能的指标, 用PCR检测Sry反映移植细胞在宿主体内的存活。结果:分化第13d, 未加胸腺肽, CD⁺₃的成熟T淋巴细胞含量仅10.52%, 重建造血后无GVHD发生;添加胸腺肽, CD⁺₃的成熟T淋巴细胞含量升高达22.93%, 重建造血后GVHD发病率100%。结论:胚胎干细胞体外分化为造血干/祖细胞过程中, 添加胸腺肽, 能增加CD⁺₃的成熟T淋巴细胞含量, 体内重建造血后细胞免疫功能恢复较快。     

微波凝固肝癌细胞活性的酶组织化学检测

目的比较HE染色和酶组织化学染色对判断微波消融灭活肝癌细胞活性的价值。方法用10W、1.5～2min(85～95℃)和5W、1.5～2min(55～65℃)两种条件的微波消融,分别治疗A、B两组(每组3只)小鼠移植型肝癌,并取微波消融前后的肿瘤组织标本制成切片,进行常规HE染色及琥珀酸脱氢酶的酶组织化学染色,在显微镜下观察两种染色的情况。结果从HE染色观察到,A、B两组小鼠肝癌组织在微波消融后的即刻,其细胞核形态和排列较消融前无明显改变。酶组织化学染色显示,A组肿瘤消融区内的琥珀酸脱氢酶的活性均消失,这说明了癌细胞的灭活;B组肿瘤消融区内上述的酶活性都呈散在阳性,提示部分癌细胞仍存活,A、B两组的肿瘤灭活效果明显不同(Ρ<0.01)。结论HE染色不能评价微波消融对肝癌的即刻灭活效应,用酶组织化学染色测琥珀酸脱氢酶的活性能判定MA对肝癌的灭活效果。     

尘螨变应性鼻炎全血细胞IL-4、IL-13的表达及临床意义

目的探讨IL-4、IL-13在变应性鼻炎发病机制中的作用及IL-4、IL-13拮抗剂治疗变应性鼻炎的临床意义。方法取52例变应性鼻炎（实验组）及25例无过敏性疾病（对照组）患者的外周血，用PMA（phorbol 12-myristate 13-acetate佛波酯）＋inomycin（离子霉素）及标准化尘螨抗原刺激后经细胞内染色，流式细胞仪检测IL-4、IL-13、IFN-γ的表达细胞百分数，ELISA检测血清IL-4、IL-13含量。结果对照组经标准化尘螨变应原刺激后细胞内测出IFN-γ为0．3％-0．4％，但检测不到IL-4与IL-13，经PMA＋inomycin刺激后IFN-γ为5．0％-12．4％、IL-4为0．5％-0．8％、IL-13为0％-0．2％；实验组经标准化尘螨变应原刺激后IFN-γ为0．3％-0．5％、IL-4为0．9％-1．3％、IL-13为0．5％-0．9％，经PMA＋inomycin刺激后IFN-γ为17.3％-24．0％、IL-4为2．1％-3．5％、IL-13为0．8％-2．0％。实验组血清中IL-4含量为（1．768±0．485）pg／ml、IL-13为（5．427±1．263）pg／ml，对照组IL-4与IL-13含量均低于敏感度。结论IL-4、IL-13在变应性鼻炎患者中表达升高，参与了变态反应过程，为临床应用IL-4、IL-13拮抗剂治疗变应性鼻炎提供了依据。     

冠心病干细胞移植疗法种子细胞体外诱导分化的实验研究

目的　为探讨冠心病的干细胞移植疗法提供理想的种子细胞来源。方法　收集健康成人骨髓 ,通过Ficoll离心法获得骨髓单个核细胞 ,置于纤维连接蛋白预衬的DMEM培养基中 ,用血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)加以诱导 ,并通过荧光显微镜和免疫组织化学方法对诱导后的细胞进行形态学观察和鉴定。结果　在VEGF、bFGF等诱导因子存在的条件下 ,骨髓单个核细胞分化成为内皮祖细胞 ,倒置荧光微镜下呈典型的“纺锤样”梭形细胞 ,单层细胞贴壁生长融合时呈铺路石样排列 ,免疫组织化学示vWF抗体染色阳性 ,CD34抗体染色阳性。结论　成人骨髓单个核细胞在特定条件下可诱导分化成为内皮祖细胞 ,此细胞可作为冠心病干细胞移植疗法的种子细胞。     

系统性红斑狼疮患者骨髓基质细胞因子表达及对免疫功能的影响

 【目的】研究系统性红斑狼疮（SLE）患者骨髓基质细胞因子表达情况,及其对外周血淋巴细胞增殖反应的影响,探讨SLE的发病机制。【方法】采用ELISA方法观察SLE患者骨髓基质细胞培养液IL-6、MIP-1、IFN-γ、TGF-β等细胞因子的表达,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）,观察基质细胞培养上清液对外周血淋巴细胞增殖反应的影响。【结果】SLE患者骨髓基质细胞培养液IL-6、MIP-1、IFN-γ浓度明显增高,TGF-β则降低,3种细胞因子与SLEDAI评分相关;正常人及SLE患者骨髓基质细胞上清液均对刀豆蛋白A诱导的外周血淋巴细胞增殖有明显的抑制作用,而SLE患者的上清液抑制作用明显低于正常人;在分别加入抗MIP-1、抗IFN-γ单抗后,骨髓基质细胞上清液对外周血淋巴细胞增殖的抑制作用明显增强,而加入抗TGF-β单抗后,抑制作用明显减弱。【结论】SLE患者骨髓基质细胞对外周血淋巴细胞增殖的抑制作用较弱,与其部分细胞因子异常表达有关,骨髓基质细胞可能与SLE的发病、发展有一定关系。     

小径聚氨酯人工血管内皮化种子细胞的体外诱导分化及种植

[目的]探讨体外诱导骨髓单个核细胞分化成为内皮祖细胞，为小径聚氨酯人工血管内皮化提供合适的种子细胞的可行性。[方法]收集健康成人骨髓单个核细胞，置于纤维连接蛋白预衬的DMEM培养基中，用血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)加以诱导，通过荧光显微镜和免疫组化分析等方法观察和鉴定诱导后的细胞。将诱导分化的内皮祖细胞种植到聚氨酯小径人工血管表面，用扫描电镜观察。[结果]在VEGF、bFGF等诱导因子存在的条件下，骨髓单个核细胞分化成为内皮祖细胞，倒置荧光显微镜下呈典形的“纺锤样”梭形细胞，单层细胞贴壁生长融合时呈铺路石样排列，免疫组化示VWF和CD34抗体染色阳性。扫描电镜下，未种植细胞的聚氨酯小径人工血管表面呈典型的多孔蜂窝状结构，孔径大小比较适合内皮祖细胞爬行。种植细胞后，聚氨酯小径人工血管表面有大量的内皮祖细胞黏附、爬行及铺展生长，有时可见内皮祖细胞长入蜂窝状孔径内。[结论]体外诱导骨髓单个核细胞分化为内皮祖细胞可作为小径聚氨酯人工血管内皮化的种子细胞。     

系统性红斑狼疮患者骨髓基质细胞因子表达及对免疫功能的影响

【目的】研究系统性红斑狼疮（SLE）患者骨髓基质细胞因子表达情况,及其对外周血淋巴细胞增殖反应的影响,探讨SLE的发病机制。【方法】采用ELISA方法观察SLE患者骨髓基质细胞培养液IL-6、MIP-1、IFN-γ、TGF-β等细胞因子的表达,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）,观察基质细胞培养上清液对外周血淋巴细胞增殖反应的影响。【结果】SLE患者骨髓基质细胞培养液IL-6、MIP-1、IFN-γ浓度明显增高,TGF-β则降低,3种细胞因子与SLEDAI评分相关;正常人及SLE患者骨髓基质细胞上清液均对刀豆蛋白A诱导的外周血淋巴细胞增殖有明显的抑制作用,而SLE患者的上清液抑制作用明显低于正常人;在分别加入抗MIP-1、抗IFN-γ单抗后,骨髓基质细胞上清液对外周血淋巴细胞增殖的抑制作用明显增强,而加入抗TGF-β单抗后,抑制作用明显减弱。【结论】SLE患者骨髓基质细胞对外周血淋巴细胞增殖的抑制作用较弱,与其部分细胞因子异常表达有关,骨髓基质细胞可能与SLE的发病、发展有一定关系。     

螺内酯对冠心病患者内皮细胞功能的影响

目的　本实验旨在探讨螺内酯对冠心病患者内皮细胞功能的影响。方法　选择 5 0例冠心病患者作为实验组 ,5 0例健康者作为对照组 ,给药前先测定实验组和对照组的内皮素 (ET)、血栓素 A2 (TXA2 )、一氧化氮 (NO)、前列环素 (PGI2 ) ,再予以实验组螺内酯 2 0 m g/ d,3个月后再测定实验组的 ET、TXA2 、NO、PGI2 并进行比较。结果　给药前实验组的 ET、TXA2 水平较对照组高 ,NO、PGI2 水平较对照组低 ;给药后 NO、PGI2 水平较给药前高 ,ET、TXA2 较给药前低。结论　螺内酯可以有效地改善血管内皮细胞功能 ,对逆转冠心病患者内皮细胞功能紊乱起着重要的作用。     

肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因型分布

目的阐明广州地区肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因型分布。方法用药敏纸片法对67株耐三代头孢菌素类抗生素的肺炎克雷伯菌进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型筛选,采用PCR检测β-内酰胺酶耐药基因,对部分ESBLs菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)。结果 67株菌中有58株菌ESBLs表型阳性,β-内酰胺酶基因检测显示,44株产CTX-M、43株产SHV(其中10株产超广谱的SHV)、14株产OXA-1群、38株产TEM,7株菌产AmpC。产CTX-M的菌株有20株产CTX-M-1群(包括15株产CTX-M-15)和24株产CTX-M-9群(包括14株产CTXM-14)。PFGE结果显示产ESBLs菌株同源性低。结论广州地区耐三代头孢肺炎克雷伯菌以产CTX-M-1群和CTX-M-9群ESBLs为主。     

芦荟胶外用对小鼠炎症损伤的保护作用

目的:探究芦荟胶外用对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶致小鼠足趾肿胀和冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高炎症模型的抗炎作用及其可能的作用机制.方法:每组实验均取40只健康昆明小鼠随机分为空白组、模型组、实验组和对照组,造模后创面外涂0.1 mL相应药物,模型组涂抹等量的0.9％氯化钠溶液,以各组小鼠耳廓肿胀度、足趾肿胀度...