可溶性gp130和gp130反义核酸对IL-6诱导的靶基因启动子活性的影响

ｇｐ１３０是ＩＬ－６信号转导子，ＩＬ－６介导的信号转导起始于ｇｐ１３０与ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒα形成的复合物。为了研究ｇｐ１３０胞外区的结构与功能，在肝癌细胞ＨｅｐＧ２中建立了检测ＩＬ－６诱导基因表达强弱的方法，并观察了含胞外区全长（５９７个氨基酸）及氨基端３０４个氨基酸残基的ｇｐ１３０突变体，以及ｇｐ１３０反义核酸对ＩＬ－６生物学效应的影响。证明两个突变体和反义核酸均拮抗ＩＬ－６信号，为进一步研究ＩＬ－６受体拮抗剂奠定了基础。     

人可溶性IL-6R基因在COS7细胞中的表达及活性分析

目的在ＣＯＳ７细胞中表达具有生物学功能的人可溶性ＩＬ－６Ｒ（ｓＩＬ－６Ｒ），作为研究ｓＩＬ－６Ｒ结构与功能关系的基础。方法首先利用ＰＣＲ技术扩增出人可溶性ＩＬ－６Ｒ（ｈｓＩＬ－６Ｒ）编码基因片段，并重组入克隆载体ｐＡＬＴＥＲ－１。通过基因序列分析确定了目的基因的核苷酸序列，并进一步构建了由ＳＶ４０晚期启动子和ＨＣＭＶ早期启动子控制的表达质粒ｐＳＶＬ６Ｒ和ｐＣＭＶ６Ｒ。用脂质体介导的方法将表达质粒转染ＣＯＳ７细胞，并分别在ｍＲＮＡ水平（斑点杂交）和蛋白水平（ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ）检测ｓＩＬ－６Ｒ基因在ＣＯＳ７细胞中的表达。在７ＴＤ１，ＬＴ１２两种ＩＬ－６反应细胞系上检测转染细胞上清（含ｓＩＬ－６Ｒ）的生物学活性。结果在ｍＲＮＡ水平和蛋白水平分别检测到ｓＩＬ－６Ｒ基因在ＣＯＳ７细胞中的表达，表达产物分子量约为５００００。表达产物在７ＴＤ１，ＬＴ１２细胞系上检测到明显的生物学活性。结论天然ｓＩＬ－６Ｒ基因在ＣＯＳ７细胞中的成功表达为进一步制备ｓＩＬ－６Ｒ突变体及其结构与功能关系的研究奠定了基础     

造血细胞集落刺激因子检测的研究进展

造血细胞集落刺激因子检测方法已由经典的半固体培养法逐步被免疫学法和依赖细胞学检测法所取代，形成了ＥＬＩＳＡ和依赖细胞系ＭＴＴ比色分析法。本文比较了经典的生物学法和免疫学法的优缺点。     

胆酸钠对人卵巢癌细胞系作用的研究

目的 探讨胆酸钠单独应用及联合全反式维甲酸对2株卵巢癌细胞系(COC2、CAOV3)的体外抑制作用。方法 2003年5～8月对经不同浓度的胆酸钠及胆酸钠联合全反式维甲酸作用后的两株细胞采用MTT比色法测定细胞生长抑制率，流式细胞仪测定细胞周期变化，并行培养细胞的光镜、电镜观察。结果胆酸钠对两株细胞的抗增殖活性在50～150mg／L范围内呈现剂量依赖效应，并且在两药合用时此作用更明显；单用胆酸钠及两药联合应用均能随用药浓度而明显增加G0／G1期细胞比例，降低S、G2／M期比例，并以两药合用更为明显；光镜、电镜结果显示：胆酸钠100mg／L组与全反式维甲酸10μmol／L组细胞形态变化相似，但两者合用时细胞凋亡明显。结论 在两株卵巢癌细胞中胆酸钠不但具有单独而且有协同全反式维甲酸抑制肿瘤的作用，胆酸钠能明显降低全反式维甲酸的用量从而减少其副反应，并且不降低其抗肿瘤作用。     

ELISA方法检测重组的人白细胞介素-2

白细胞介素-2(IL-2)在机体免疫调节中起重要作用。近年来,随着对 IL-2与肿瘤的关系以及在肿瘤治疗中的作用的不断认识,IL-2的定量分析逐渐被提上日程。生物学测定法是目前最常用的方法,具有较高的特异性、敏感性及可重复性,但需要培养靶细胞,比较费时,而且测定还受多种因素(包括支原体污染或丝裂原存在的影响等)的干扰。放射性标记的免疫测定法快速、特异、灵敏度高,但测定需要放射性标记的免疫纯试剂,而且血清或血浆样品均降低测定灵敏度。本工作将重组的人白细胞介素-2(rhIL-2)粗提液参照文献方法纯化成 SDS-聚丙烯酰胺凝胶     

大鼠gp130反义寡核苷酸阻断rhIL-6对大鼠急性髓系白血病细胞系R2体外增殖的抑制效应

IL 6受体 (IL 6R) β链是分子量为 130kD的膜结合糖蛋白 (gp130 ) ,它是介导IL 6生物效应的信号转导子。我们的实验已经证实了重组人IL 6 (rhIL 6 )可作用于大鼠急性髓系白血病细胞系R2 ,rhIL 6与R2细胞表达的hIL 6R结合并与大鼠 gp130缔合而转导IL 6的信号 ,产生其生物效应。本文在体外液体培养中试验观察到 ,大鼠 gp130的反义寡核苷酸片段被摄入R2细胞后 ,对rhIL 6生物效应产生明显的影响。我们的研究结果表明 ,所合成的大鼠gp130反义寡核苷酸片段在细胞体外液体培养中可部分阻断rhIL 6对R2细胞的增殖抑制效应 ,在最适的终浓度 ,其阻断率可达 (45± 7) %。     

猪胆酸钠对人早幼粒白血病细胞系(HL-60)作用机理的初步探讨

观察了猪胆酸钠和维甲酸对人早幼粒白血病细胞系(HL-60)体外诱导分化过程中细胞膜脂肪酸的组成、细胞蛋白激酶C(PKC)活性及c-myc癌基因表达的变化,初步探讨猪胆酸钠对HL-60细胞作用的分子机理,结果表明,经100～400μg·ml~(-1)猪胆酸钠处理3d的HL-60细胞,其PKC活性和c-myc表达与对照组比较均明显下调;1μmol·L~(-1)维甲酸诱导3 d的细胞,PKC活性未见明显变化,而癌基因c-myc表达则降至对照组的17％;无论是猪胆酸钠(400 μg·L~(-1))还是维甲酸(1μmol·L~(-1))诱导3d的HL-60细胞,其细胞膜脂肪酸组成均无明显改变。     

R2细胞用于测定人白介素6受体的生物活性

目的　确定可靠的筛选小分子人白介素 6(IL 6 )受体拮抗剂先导化合物的细胞模型。方法分别用间接免疫荧光法和MTT检测法检测了R2细胞的人IL 6受体蛋白表达水平和对重组人白介素 6(rhIL 6 )的反应性。结果　检测到R2细胞具有高丰度的人IL 6受体蛋白表达并对rhIL 6具有极为灵敏的反应性和极高的亲和力 ;用R2细胞检测抗人IL 6单克隆抗体对rhIL 6的拮抗活性 ,发现单抗在 2 0mg·L- 1浓度下对rhIL 6所引起的R2细胞的增殖有很强的抑制作用 ,抑制率达 92 %。结论　R2细胞是可靠的筛选人IL 6受体拮抗剂的细胞模型     

重组大鼠白介素3对培养的大鼠正常骨髓细胞及其白血病细胞的影响

将携带大鼠白介素３（ｒＩＬ－３）全基因的ｐＩＬＲ１质粒转染猴肾ＣＯＳ－１细胞，表达制备了重组ｒＩＬ－３（ｒｒＩＬ－３）．用半固体培养系统和液体培养测定了ｒｒｌＬ－３对大鼠正常骨髓细胞及其髓系白血病细胞系ＬＴ１２的影响。研究结果表明，所表达的ｒｒＩＬ－３剂量依赖地明显促进ＢＮ大鼠正常骨髓造血祖细胞的增殖。并进一步观察到无论在半固体培养系统或液体培养中，ｒｒＩＬ－３具有抑制白血病ＬＴ１２细胞生长的作用，同样呈量一效相关。     

维生素A酸诱导HL-60细胞时细胞功能的变化及膜表面抗原表达的变化

维生素A酸(RA)能够诱导人的急性早幼粒白血病细胞系HL-60向成熟粒细胞方向分化.临床上RA已作为治疗急性早幼粒白血病及前白血病的药物.分化后,细胞的生长状况、细胞功能及表面抗原的表达均发生变化.我们采用NBT还原反应及吞噬发光实验观察诱导前后细胞功能的变化.并采用间接免疫荧光的方法,使用流式细