应用两轮荧光原位杂交进行人类植入前胚胎染色体嵌合型的研究

目的应用2轮荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)对人类植入前胚胎染色体嵌合型的发生机制和影响因素进行初步研究。方法选择体外受精与胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transplantation,IVF-ET)治疗周期中不适于胚胎移植和冷冻的正常受精胚胎为研究对象,固定后进行2轮FISH,分析13、16、18、21、22、X、Y等7条染色体组成。结果51个胚胎中正常胚胎14个(27.5%),嵌合型16个(31.4%),无规律分裂12个(23.5%),异常非嵌合型9个(17.6%)。5～8细胞期胚胎中嵌合型胚胎的比例显著高于≤4细胞期胚胎(40.0%比12.5%)。非整倍体胚胎的比率在≥35岁组为57.1%,显著高于<35岁组(23.3%)。结论胚胎染色体嵌合型是植入前胚胎的常见现象,可能是影响IVF成功率的重要因素,而应用2轮FISH技术可有效地进行常见染色体异常的筛查。     

用全染色体涂抹探针进行卵母细胞第一极体荧光原位杂交

 【目的】建立用全染色体涂抹探针（WCP）对卵子第一极体进行荧光原位杂交（FISH）检测染色体的方法。【方法】收集单精子卵胞浆内注射（ICSI）中不成熟卵母细胞经体外培养成熟和常规试管婴儿（IVF）中未能成功受精的成熟卵母细胞，活检第一极体，固定后行13、14号染色体的全染色体涂抹探针荧光原位杂交。活检后，一部分卵母细胞固定行FISH以分析卵子自身的13、14号染色体，其余行ICSI受精，观察受精和卵裂情况。【结果】共获得成熟母细胞93个，成功活检85个，成功固定78个，共29个第一极体处于分裂中期，均有FISH结果。卵母细胞体外培养成熟后立即取极体进行固定，90．5％（19／21）的极体处于分裂中期，而取卵后30-48h和72h后活检的第一极体处于分裂中期的比例分别为27．3％（6／22）和11．4％（4／35），3组相比有统计学差异（P〈0．01）。11个卵母细胞同时获得了极体和相对应卵细胞的FISH结果，其中10个极体和相对应的卵细胞分别有1条13，14号染色体，剩余1个卵母细胞的极体有2条14号染色体和1条13号染色体，相对应的卵细胞仅有1条13号染色体，二者互补。活检后行ICSI受精的卵母细胞受精率为78．6％（11／14），优质胚胎率45．5％（5／11）。【结论】全染色体涂抹探针对卵子第一极体进行遗传分析可以有效、准确地推测相对应卵母细胞的染色体构成，从而应用于女性染色体易位患者的植入前遗传诊断。     

苦丁茶中熊果酸的分离纯化研究

 目的研究苦丁茶(Ilex kudingcha C.J.Tseng)中熊果酸的分离纯化,建立分离纯化工艺条件,以利于苦丁茶资源的开发利用。方法以熊果酸浸出率为考核指标,采用正交实验法考察诸因素对浸出率的影响。乙醇提取液经沉淀富集和大孔树脂柱色谱纯化得到熊果酸,采用HPLC分析检测。结果优化的提取条件为:在85℃水浴中,以体积分数90％乙醇水溶液为提取溶剂。固液比为1:14,提取2次,每次提取2.5h,熊果酸的浸出率可达到1.44％。D₈树脂分离富集的最优条件:样品溶液熊果酸浓度1～2 mg·mL^-1,样品溶液pH=6.0～7.0,吸附1h,洗脱剂pH=11.0,依次用水、4倍体积30％乙醇、4倍体积90％乙醇以2～3mL·min^-1的流速洗脱,收集90％乙醇洗脱液,熊果酸回收率为97.82％,纯度为95.0％。结论 该工艺产品纯度高,收率高,可实现工业化。     

着床失败、生化妊娠和流产是一码事吗?

近年来辅助生殖技术的成功率不断提高,但是着床失败、生化妊娠和流产这三种体外受精-胚胎移植(IVF-ET)失败情况仍占相当大比例。本文就三者的概念、产生原因、及预后进行综述,旨在为降低其发生率、改善IVF-ET的临床结局提供一定的参考资料。     

妊娠前甲状腺自身抗体阳性甲状腺功能正常妇女五例临床观察

自身免疫性甲状腺疾病为妊娠期常见疾病,甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)是甲状腺自身免疫功能紊乱的重要标志。不同的报道显示,育龄期妇女甲状腺自身抗体(anti-thyroid antibody,ATA)阳性率为5.4%～31%[1]。有研究显示ATA阳性的妇女在妊娠期发生甲状腺功能异常、产后甲状腺炎(postpartum thyroiditis,PPT)以及自然流产、早产、妊娠期高血压、胎盘早剥等妊娠不良结局的风险可能增高[2-3]。本研究追踪随访5例孕前血清TSH<2.5mIU/L,总T4(TT4)和游离T4(FT4)水平正常,TGAb和(或)TPOAb阳性妇女,观察其妊娠期及产后1年间甲状腺功能、TGAb、TPOAb水平、妊娠不良结局及PPT的发生情况,报道如下。一、病例资料例1,37岁,因"婚后不孕5年,拟行辅助生殖技术,术前检     

不同的胚胎移植管对体外受精-胚胎移植技术结局的影响

目的：比较不同的胚胎移植管对新鲜体外受精-胚胎移植技术（in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET）妊娠结局的影响。方法：自2012年7月至2013年11月,由同一移植医生完成前瞻性对照研究,选取在北京大学第三医院生殖医学中心完成IVF-ET/卵胞浆内单精子注射 (intracytoplasmic sperm injection,ICSI) ET治疗的2 064个新鲜胚胎移植周期,分为两组,组1采用Cook Sydney IVF移植管（型号：K-JETS-7019 SIVF）移植,共949周期,组2采用Frydman- CCD管（型号：131230301）移植,共1 115周期,比较不同的移植管对IVF结局的影响。结果：在年龄、不孕原因、促排卵方案、平均获卵数、平均移植胚胎数及胚胎评价等基本情况一致的情况下,组1的着床率、临床妊娠率及活产率均显著高于组2（34.40% vs. 26.92%,51.21% vs. 41.52%,42.57% vs. 33.09%,P值均<0.05）,两组流产率差异没有统计学意义（11.93% vs. 15.98%, P>0.05）,组1的困难移植比例高于组2（5.27% vs. 3.41%,P<0.05）,两组困难移植周期的临床妊娠率及活产率无显著差异。结论：不同移植管可能会影响IVF结局,COOK Sydney IVF移植管可获得较好的临床妊娠结果。     

极体分析在植入前遗传学诊断中的应用

极体活检是植入前遗传学诊断常用的一种取材方法.极体是卵母细胞减数分裂的产物,含有和卵母细胞互补的遗传物质,通过对极体的分析可以间接推测相应卵母细胞的染色体状态.极体活检具有对胚胎的损伤小、在伦理上易于被接受的特点,而且极体具有自身特有的生物学属性.可用极体分析进行植入前遗传学诊断的情况包括女方单基因遗传疾病、染色体结构异常以及非整倍体的筛查等,尤其对母源性遗传携带患者具有独特优势,在植入前遗传学诊断中有着不可替代的地位.对近年来极体活检在植入前遗传学诊断中的研究进展做综述.     

PGD周期中机械法和激光法活检对胚胎发育及妊娠结局的影响

目的:比较机械法和激光法进行卵裂球和极体活检对胚胎发育及着床前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)周期妊娠结局的影响。方法:本研究包括20对夫妇的21个PGD周期,其中18个周期分别用机械法或激光法于受精后第3天进行卵裂球活检,并用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)分析检出的卵裂球,于受精后第5或第6天移植信号正常的胚胎;2个周期分别用机械法和激光法在取卵后行极体活检,后行胞浆内单精子注射(introcytoplasmic sperm injection,ICSI)。同时将活检取出的极体进行FISH分析,于取卵后第3天移植经FISH检查正常的卵发育而来的胚胎。另外一个周期先用激光法实行了极体活检,由于FISH检查均无信号,后又用激光法对胚胎行卵裂球活检。结果:共活检胚胎145枚,其中109枚用机械法,36枚用激光法。活检后胚胎的继续发育率分别为72.48%和83.33%,囊胚形成率为33.94%和44.44%,临床妊娠率为38.46%和16.67%,着床率为21.43%和8.33%,两种方法无显著差异。对27枚卵行极体活检,其中12枚用机械法,15枚用激光法。活检后2PN受精率分别为58.33%和46.66%,继续发育率为66.67%和60.00%,亦无显著差异。对活检出的极体进行FISH分析,用机械法活检的极体信号阳性率为90.00%,显著高于激光法的28.57%。结论:用机械法和激光法行极体或卵裂球活检对胚胎发育的影响差异无统计学意义。但使用机械法活检卵裂球能获得较高的临床妊娠率和着床率。极体活检时能获得较高的受精率和继续发育率,故推荐使用机械法进行活检。     

海带多糖的脱蛋白研究

海带多糖是海带中重要的生物活性成分,不仅具有抗肿瘤、降血糖、降血脂、提高免疫力的特殊医疗保健功能,而且在抗病毒、抗菌、抗疲劳方面起了重要的作用[1-3].由于我国海带资源非常丰富,海带多糖的研究受到人们的普遍关注.多糖的提取方法很多,但在提取过程中都有蛋白质伴随产生,所以除去蛋白质是多糖提取纯化的一个关键步骤.     

反相高效液相色谱法测定水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物

目的：利用反相高效液相色谱研究水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物隐性孔雀石绿、隐性结晶紫的同时测定。方法：用PbO2-硅藻土柱为柱后氧化柱，用不同比例的乙腈-乙酸铵缓冲溶液-冰醋酸体系分析，确定58＋14＋28的乙腈-乙酸铵缓冲溶液-冰醋酸体系为最佳流动相。结果：孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫、隐性结晶紫的加标回收率分别为84．6％，85．8％，89．8％，88．5％，相对标准偏差分别为5．0％，4．7％，4．3％，4．6％，检测限均小于2μg/kg。结论：该方法简单、可靠，结果令人满意。