血液血管细胞生成素对胎儿骨髓造血和内皮干细胞作用的研究

目的研究人血液血管细胞生成素(hemangiopoietin,HAPO)对胎儿骨髓细胞的作用,探讨其生物学特性。方法采用细胞液体培养、半固体培养、MTT方法、免疫荧光标记流式细胞仪测定、免疫组化、显微镜观察照相等方法。结果在液体培养3周的胎儿骨髓单个核细胞中,HAPO组中出现了大量小而圆的早期造血细胞,其中CD34+细胞含量比对照组高20%,对照组CD34+细胞为1.25×105个,而HAPO组CD34+细胞为3.93×106个。取胎儿骨髓悬浮造血细胞进行半固体培养,对照组不能形成CFU-GEMM,而HAPO组形成CFU-GEMM数达到(11.0±2.6)个;HAPO也协同SCF、IL-3、GM-SCF等生长因子促进集落形成,CFU总数是对照组2.6倍,CFU-GEMM数HAPO组是对照组2.1倍。MTT方法发现,HAPO对胎儿骨髓基质细胞也有促增殖作用,HAPO可使基质细胞增长21%;液体培养的胎儿骨髓基质细胞中,有内皮特异性标志的细胞均增高;在甲基纤维素半固体培养中HAPO使胎儿骨髓内皮细胞的集落数增高,并出现条索状排列的集落,有促进血管形成的趋势。进一步证明HAPO可直接促进CD34+KDR+细胞的增殖。结论HAPO对骨髓造血和血管内皮干细胞均有刺激增殖作用。     

抗肿瘤的PF4及相关肽基因重组腺病毒的构建

利用细菌内同源重组法构建含PF4(血小板第四因子)全长1-70及PF4的小肽17-70基因的重组腺病毒。方法:将连有MCP-1信号肽的PF4全长及其C末端的改构体PF4-17-70两个基因片段克隆至腺病毒穿梭质粒pAdshuttle-CMV中,形成转移质粒pAdshuttle/PF4(1-70)和pAdshuttle/PF4(17-70),将之酶切线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,抽提并鉴定含目的基因的重组体质粒,而后用磷酸钙共沉淀方法转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒AdPF4(1-70)和AdPF4(17-70)。采用PCR方法对重组体腺病毒进行鉴定,扩增并纯化病毒,用TCID50方法测病毒滴度,利用带有CMV-LacZ的对照重组腺病毒(Ad-LacZ)对感染效率进行监测。结果:利用电穿孔法分别将质粒pAdshuttle/PF4(1-70),pAdshuttle/PF4(17-70)与质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183获得70%以上的阳性重组体细菌克隆。PCR检测结果表明重组腺病毒已含有目的基因,滴度为1×1010pfu/ml。结论:利用细菌内同源重组法可以简便、快捷地构建含PF4(1-70)、PF4(17-70)cDNA的腺病毒载体,为两者在肿瘤基因治疗中的应用奠定了基础。     

干扰FGF4表达可抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭能力

目的 探索干扰成纤维细胞生长因子4(fibroblast growth factor 4,FGF4)表达对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响.方法 培养5株OSCC细胞株并检测FGF4 DNA拷贝数及mRNA的表达变化;转染siRNA干扰FGF4表达并进行验证;干扰FGF4表达后,采用CCK-8检测OSCC细胞株HSC-3、H314细胞增殖能力的变化,采用Transwell方法检测细胞迁移及侵袭能力的变化.结果 同对照组相比,干扰FGF4表达后,HSC-3、H314细胞增殖能力明显下降(P<0.05).在HSC-3中,FGF4 siRNA-002组及siRNA-003组迁移细胞数分别下降了64.52％、66.81％;在H314细胞系中,FGF4 siRNA-002组及siRNA-003组迁移细胞数下降了66.81％、82.01％.同对照组相比,在HSC-3中,FGF4 siRNA-002组及siRNA-003侵袭细胞数分别下降了52.34％、49.89％.在H314中,FGF4 siRNA-002组及siRNA-003侵袭细胞数分别下降了75.3％、90.63％.结论 在OSCC细胞中,干扰FGF4表达可抑制OSCC细胞的增殖、迁移及侵袭能力.     

慢病毒载体感染人口腔黏膜成纤维细胞稳定表达绿色荧光蛋白的研究

目的：确立慢病毒载体高效感染人口腔黏膜成纤维细胞的感染条件,为进一步应用基因工程技术研究人口腔黏膜成纤维细胞奠定基础。方法：采用组织块法培养原代人口腔黏膜成纤维细胞,免疫组化SP法鉴定细胞类型,将携带绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体以不同感染复数（multiplicity of infection,MOI）感染纯化细胞,并设置不同感染条件,感染4 d后于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况。结果：成功分离纯化得到人口腔黏膜成纤维细胞,当慢病毒感染复数为30,polybrene浓度为8μg/mL,并加入感染增强液时,可达到较高的感染效率,满足后续实验需要。结论：慢病毒载体可高效感染人口腔黏膜成纤维细胞,携带的绿色荧光蛋白基因可在成纤维细胞内稳定表达。     

生长抑素联合早期肠内营养治疗对重症胰腺炎患者炎症反应及肠道功能的影响

目的探讨生长抑素联合早期肠内营养治疗对重症胰腺炎（SAP）患者炎症反应及肠道功能的影响。方法选取台州市中心医院2016年1月至2020年12月收治的SAP患者102例,按随机数字表法分为观察组（生长抑素联合早期肠内营养治疗）和对照组（仅生长抑素治疗）,每组51例。比较两组患者治疗前、治疗7d后急性生理与慢性健康（APACHE）Ⅱ评分、血清炎症因子水平变化以及肠道功能指标、疗效等。结果治疗前两组患者APACHEⅡ评分及血清TNF-α、IL-2、IL-6水平比较,差异均无统计学意义（均P＞0.05）。治疗后两组患者APACHEⅡ评分及血清TNF-α、IL-6水平均明显降低（均P＜0.05）,IL-2水平明显升高（P＜0.05）,观察组APACHEⅡ评分及血清TNF-α、IL-6水平均明显低于对照组（均P＜0.05）,IL-2水平明显高于对照组（P＜0.05）。观察组患者腹痛、肠鸣音恢复正常时间及腹胀缓解时间均明显短于对照组（均P＜0.05）,总有效率明显高于对照组（P＜0.05）。结论生长抑素联合早期肠内营养治疗能明显减轻SAP患者的炎症反应,改善其肠道功能,且疗效良好。     

人促血液血管细胞生成素的高效表达和快速纯化

目的 构建人促血液血管细胞生成素（HAPO）的表达载体，获得纯化的HAPO蛋白并研究其生物学功能。方法 通过PCR方法扩增人HAPO基因，克隆于不同的原核表达载体，ITPG诱导融合蛋白表达。NTA层析柱纯化融合蛋白，再经肠激酶裂解融合蛋白，阳离子交换层析纯化，得到纯化的重组蛋白。用培养的MO7e和ECV-304细胞检测蛋白活性。结果 HAPO可在pET32C中，获得稳定高效的可溶性表达。在Ecoli BL21（DE3）中，HAPO表达量可占菌体总蛋白的10％左右。重组蛋白80％是以可溶性蛋白形式存在。NTA层析柱纯化得到的HAPO融合蛋白，再经肠激酶裂解，阳离子交换层析纯化，得到90％以上纯度的重组HAPO蛋白，并且具有良好的生物学活性。结论 得到具有90％以上纯度的重组HAPO蛋白，而且，对MO7e和ECV-304细胞具有促增殖的作用。我们获得了纯化的人重组HAPO蛋白，为进一步研究其功能及临床应用打下基础。     

竞争风险模型在2型糖尿病治疗临床试验中的应用

目的探讨竞争风险模型在2型糖尿病治疗临床试验中的应用。方法从北京、上海等地15家三级甲等医院募集未用过任何降糖药物的2型糖尿病患者,将符合入组标准的400例患者按照1∶1的比例随机分为消渴丸组和格列本脲组。患者按照既定方案服药,试验持续48周,每4周随访一次。在达到预先设定最大剂量(消渴丸服用剂量达到30粒/d或格列本脲服用剂量达到3片/d)后连续2次随访空腹血糖均大于7.0mmol/L的患者终止试验。终止试验的患者记为竞争事件。使用竞争风险模型估计两组血糖控制率、使用Gray检验比较两组血糖控制率、使用竞争风险回归模型探索血糖控制率的影响因素。结果共有368例患者纳入分析(两组均有184例)。消渴丸组共有77例患者血糖控制成功,62例患者发生竞争事件。格列本脲组共有78例患者血糖控制成功,61例患者发生竞争事件。消渴丸组血糖控制率为44.76%,其95%置信区间为(37.05%,52.15%);格列本脲组血糖控制率为45.91%,其95%置信区间为(38.00%,53.45%);经Gray检验,两组血糖控制率的差异没有统计学意义(P=0.8105);血糖控制率的影响因素为空腹血糖,相对危险度为0.806。结论在有竞争风险存在的研究中应该使用竞争风险模型;竞争风险模型估计得到的消渴丸组和格列本脲组的血糖控制率差异没有统计学意义。     

黏液丝与尿蛋白检测的相关性及其意义

黏液丝是尿液中的常见成分,通常认为与尿道的长期炎症刺激以及泌尿系感染有关,也有报道认为其能干扰UF-50对管型的分析。因对其认识较少,部分临床医生以及检验人员均未对其临床意义予以重视，我们在临床工作中发现其与尿蛋白的干化学检测存在一定的相关性，尤其在干化学检测尿蛋白结果为微量的情况下，现报告如下，     

重症监护室护理管理体会

<正>随着急救医学的发展,重症监护室(ICU)的建立已成为医院设施完全的主要标志。只有科学的管理日趋完善,才能保证ICU护理工作得以顺利进行[1]。现将本人一些ICU护理管理体会报告如下。