趋化因子受体CCR3、CCR5和CXCR3与自然流产的相关性

目的探讨外周血、脾脏、胸腺趋化因子受体CCR3、CCR5、CXCR3与自然流产的关系。方法用双标记流式细胞分析技术检测自然流产模型组小鼠（CBA／J×DBA／2，n=14）、正常妊娠模型组小鼠（CBA／J×BALB／c，n=13）和正常非孕组小鼠（CBA／J，n=11）外周血、脾脏以及胸腺中CD4^＋T细胞CCR3、CCR5和CXCR3这三类趋化因子受体的表达。结果自然流产模型组外周血CD4^＋T细胞CCR3的表达率低于正常妊娠模型组（P〈0．01），CCR5和CXCR3高于正常妊娠模型组（P〈0．05，P〈0．01）；但三个指标与正常非孕组相比，差异均无统计学意义（P〉0．05）。自然流产模型组脾脏CD4^＋T细胞CCR3的表达率低于正常妊娠模型组（P〈0．01），高于正常非孕组（P〈0．05）；而CCR5和CXCR3高于正常妊娠模型组（P〈0．05），但与正常非孕组相比，差异无统计学意义（P〉0．05）。自然流产模型组胸腺CD4^＋T细胞CCR3的表达率低于正常妊娠模型组（P〈0．05），高于正常非孕组（P〈0．01）；而CXCR3的表达率高于正常妊娠模型组（P〈0．05），但与正常非孕组相比，差异无统计学意义（P〉0．05）；CCR5与其他两组相比，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CD4^＋T细胞上CCR3、CCR5和CXCR3的表达异常可能在自然流产的发病中起作用。     

胎盘细胞嗜酸性粒细胞趋化因子和T淋巴细胞激活上调性表达分泌因子S表达与自然流产的相关性

目的 探讨嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)、T淋巴细胞激活上调性表达分泌因子(RANTES)在正常妊娠免疫耐受及反复性自然流产中的作用.方法 构建正常妊娠小鼠模型CBA/J×BALB/c(正常妊娠组)和反复性自然流产小鼠模型CBA/J×DBA/2J(自然流产组);采用免疫组织化学方法检测胎盘细胞趋化因子Eotaxin、RANTES的表达;采用酶联免疫吸附试验(ELlSA)检测胎盘细胞培养上清液的白细胞介素(IL)-4,干扰素(IFN)-γ水平,分析胎盘细胞趋化因子Eotaxin、RANTES与细胞因子IL-4、IFN-γ水平的相关性.结果 自然流产组的胚胎丢失率为18.3%,显著高于正常妊娠组的3.6%(P<0.05).正常妊娠组的胎盘细胞Eotaxin的表达阳性率为53.6%.显著高于自然流产组的40.8%(P(0.05);而正常妊娠组的胎盘细胞RANTES的表达阳性率为44.3%,显著低于自然流产组的62.3%(P<0.05).正常妊娠组的IL-4水平为(1.33±0.43)ng/L,显著高于自然流产组的(0.78±0.41)ng/L(P=0.002);正常妊娠组的IFN-γ水平为(1.24±0.57)ng/L,显著低于自然流产组的(1.67±0.44)ng/L(P=0.038).自然流产组中,胎盘细胞Eotaxin的表达与IL-4水平呈正相关(r=0.752,P=0.003),RANTES的表达与]FN-γ水平亦呈正相关(r=0.658,P=0.014);正常妊娠组中,RANTES的表达与IFN-γ水平呈正相关(r=0.649,P=0.012),IL-4水平随Eotaxin表达阳性率的上升而显示出增加趋势.结论 Eotaxin、RANTES在妊娠免疫耐受形成和自然流产的发病机制中可能发挥重要作用.     

自然流产母胎界面嗜酸粒细胞趋化因子、T淋巴细胞激活上调性表达分泌因子S及其受体的表达

目的探讨嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)/CCR3、T淋巴细胞激活上调性表达分泌因子S(RANTES)/CCR5在正常妊娠免疫耐受及自然流产中的作用。方法采集20例自然流产患者(AP组)和20例正常早孕妇女(NP组)的蜕膜和绒毛组织;采用免疫组织化学方法检测蜕膜和绒毛组织Eotaxin/CCR3、RANTES/CCR5的表达,并进行线性相关分析。结果 NP组蜕膜、绒毛组织Eotaxin的表达阳性率分别为75%和80%,显著高于AP组的35%和30%(P=0.011,P=0.001);NP组阳性表达强度亦显著高于AP组(P=0.003,P=0.002)。NP组蜕膜、绒毛组织RANTES的表达阳性率分别为40%和45%,显著低于AP组的80%和85%(P=0.01,P=0.008),NP组阳性表达强度亦显著低于AP组(P=0.002,P=0.002)。两组蜕膜、绒毛组织CCR5的表达阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);但AP组阳性表达强度显著高于NP组(P=0.018,P=0.029)。两组CCR3的表达阳性率及阳性表达强度比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。在NP组中,蜕膜、绒毛RANTE...     

人重组Oct3/4真核表达载体构建及在卵巢癌细胞中的表达研究

目的 构建人Oct3/4真核表达载体并转染人卵巢癌细胞株(SKOV3),观察Oct3/4在SKOV3稳定细胞株中的表达.方法 采用RT-PCR技术扩增获得目的 基因Oct3/4 cDNA产物,利用pcDNA3.1载体质粒构建人重组Oct3/4真核表达载体pcDNA3.1-Oct3/4,酶切及DNA测序鉴定.利用脂质体Lipofectamine 2000介导重组质粒转染SKOV3,以空载体转染细胞和未转染细胞作为转染对照组和阴性对照组.经G418(neomycin)筛选获得SKOV3稳定转染细胞株,Western blotting分析检测细胞Oct3/4蛋白的相对表达水平.结果 PCR扩增产物经12 g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定目的 基因条带大小约1 000 bp,与理论预期值一致.构建完成人重组Oct3/4真核表达载体pcDNA3.1-Oct3/4,DNA测序结果与GenBank数据库进行比对序列一致.Western blotting检测显示,转染pcDNA3.1-Oct3/4组稳定转染细胞中Oct3/4蛋白相对表达量(10.225±0.987)显著高于转染对照组(1.713±0.896)和阴性对照组(校正值为1)(P＜0.01).结论 成功构建人重组0ct3/4真核表达载体并转染SKOV3,稳定转染细胞株中Oct3/4蛋白呈稳定过量表达.实验为进一步研究Oct3/4基因在卵巢癌发生、发展及耐药机制中的作用奠定了基础.     

人重组Oct3／4真核表达载体构建及在卵巢癌细胞中的表达研究

目的 构建人Oct3/4真核表达载体并转染人卵巢癌细胞株（SKOV3）,观察Oct3/4在SKOV3稳定细胞株中的表达.方法 采用RT-PCR技术扩增获得目的 基因Oct3/4 cDNA产物,利用pcDNA3.1载体质粒构建人重组Oct3/4真核表达载体pcDNA3.1-Oct3/4,酶切及DNA测序鉴定.利用脂质体Lipofectamine 2000介导重组质粒转染SKOV3,以空载体转染细胞和未转染细胞作为转染对照组和阴性对照组.经G418（neomycin）筛选获得SKOV3稳定转染细胞株,Western blotting分析检测细胞Oct3/4蛋白的相对表达水平.结果 PCR扩增产物经12 g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定目的 基因条带大小约1 000 bp,与理论预期值一致.构建完成人重组Oct3/4真核表达载体pcDNA3.1-Oct3/4,DNA测序结果与GenBank数据库进行比对序列一致.Western blotting检测显示,转染pcDNA3.1-Oct3/4组稳定转染细胞中Oct3/4蛋白相对表达量（10.225±0.987）显著高于转染对照组（1.713±0.896）和阴性对照组（校正值为1）（P＜0.01）.结论 成功构建人重组0ct3/4真核表达载体并转染SKOV3,稳定转染细胞株中Oct3/4蛋白呈稳定过量表达.实验为进一步研究Oct3/4基因在卵巢癌发生、发展及耐药机制中的作用奠定了基础.     

OX40L基因多态性与复发性流产相关性的研究

目的通过检测OX40L基因rs1234315、rs2205960、rs17568、rs2298212位点多态性基因频率,探讨这些位点与复发性自然流产之间的关系。方法采用EILSA方法检测65例复发性自然流产患者以及75例正常妊娠患者外周血血清IL-10、IL-2细胞因子;采用直接测序法检测上述患者OX40L基因rs1234315、rs2205960、rs17568、rs2298212等位点多态性。结果复发性自然流产组患者血清中IL-2水平(83.82±50.29pg/m L)显著高于正常妊娠组(66.42±30.64pg/m L)(P0.05);复发性自然流产组患者血清中IL-10(18.86±12.63pg/m L)显著低于正常妊娠组(24.96±9.42pg/m L)(P0.05)。两组OX40L基因rs1234315、rs2205960、rs17568多态性位点的基因型和等位基因频率均无统计学差异(P0.05):复发性自然流产组rs2298212基因A/A基因型频率显示高于正常妊娠组(P0.05),两组G/G基因型与G/A基因型无显著差异(P0.05)。结论 OX40L基因SNPrs2298212基因A/A基因型可能是复发性自然流产危险因素,需要进一步研究证实。     

复发性流产病因学研究进展

复发性流产（recurrent spontaneous abortion, RSA）一般指与同一配偶发生连续３次或３次以上的自然流产。近年来许多学者提出将连续发生2次的自然流产者纳入RSA的范畴,原因是连续发生2次自然流产后,再次妊娠的流产率可高达50%以上,要引起足够的重视。RSA的病因复杂,目前已知的病因有染色体异常、生殖道解剖异常、内分泌失调、感染性疾病因素、血栓前状态、自身免疫因素等。除此之外,临床上仍有至少40%以上的患者病因不明。由于RSA的病因复杂,造成了RSA的难治性,是目前基础与临床研究的难点与热点。     

趋化因子及其受体在妊娠免疫耐受中的作用

妊娠免疫耐受是正常妊娠时母体形成的一种特殊类型的外周免疫耐受,保护作为半同种移植物的胎儿不被母体免疫系统排斥而成功妊娠。趋化因子及其受体参与免疫细胞的活化和游走等过程,在诱导免疫耐受中发挥重要作用。文章就趋化因子及其受体在妊娠免疫耐受中的作用进行了综述。     

趋化因子及其受体在妊娠免疫耐受中的作用

妊娠免疫耐受是正常妊娠时母体形成的一种特殊类型的外周免疫耐受,保护作为半同种移植物的胎儿不被母体免疫系统排斥而成功妊娠.趋化因子及其受体参与免疫细胞的活化和游走等过程,在诱导免疫耐受中发挥重要作用.文章就趋化因子及其受体在妊娠免疫耐受中的作用进行了综述.     

补体过度激活与自身免疫型复发性流产的关系

目的建立自身免疫型复发性流产(RSA)小鼠模型,探讨补体在自身免疫型RSA发病机制中的作用。方法采用子宫注射人β2GP-1免疫Balb/c小鼠(子宫β2GP-1注射组,n=15);分别以子宫无关蛋白注射组(n=6)、子宫佐剂注射组(n=13)、子宫生理盐水(NS)注射组(n=10)及正常未孕组(n=10)、正常妊娠组(n=15)作为对照。比较各组小鼠胚胎丢失率、胎盘平均质量、外周血补体C3浓度及胎盘组织衰变加速因子(DAF)的质量浓度。结果子宫β2GP-1注射组小鼠胚胎丢失率显著高于正常妊娠组和各子宫注射对照组(P<0.05),胎盘平均质量显著低于正常妊娠组和各子宫注射对照组(P<0.05),外周血补体C3水平和胎盘组织DAF的质量浓度显著低于正常妊娠组和各子宫注射对照组(P<0.05)。结论通过子宫注射人β2GP-1的方法可诱导建立符合自身免疫型RSA临床特征的小鼠模型,补体系统过度激活可能是自身免疫型RSA的发病机制之一。