人肝癌特异性EB病毒载体—p^EBAF介导hGM—CSF基因的转移及表达

目的：探索人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（hGM-CSF)基因在肝癌细胞中特异性表达的新途径。方法：构建p^EBAF/hGM-CSF基因克隆,用脂质体转染法将它分别导入分泌甲胎蛋白（AFP）的肝癌细胞株HepG2和不分泌APF的细胞株SMMC7721,构建两围基因的细胞克隆HepG2/hGM-CSF,SMMC7721/hGM-CSF,用MTT比色法测定细胞上清中hGM-CSF活性。结果：HepG2/hGM-CSF细胞上清hGM-CSF活性平均为46．5ng/ml/10^6/24h,SMMC7721细胞上清中无明显hGM-CSF活性。结：载体p^EBAF介导的hGM-CSF基因能在分泌AFP的肝细胞中获得特异性表达。     

阳离子脂质体介导的虫荧光素酶基因表达

目的 研究阳离子脂质体Lipofectin介导虫荧光素酶基因在不同细胞株中的表达。方法 质粒pDR2luc在大肠杆菌DH5a中扩增后用碱裂解法提取,并经Sepharose 2B凝胶过滤柱层析,通过凝胶电泳及紫外分光光度计分析纯度、定量,以Lipofectin分别转染人肝癌细胞株HepG2、SMMC7721、人肾癌细胞株GRC及非洲绿猴肾细胞COS7,然后以液体闪烁计数仪单光子计数法测定荧光素酶活性。结果 荧光素酶活性在4种细胞株中均有表达,且均有显著性差异(均P<0.05)。结论 阳离子脂质体Lipofectin可用于多种真核细胞基因转染。     

223例健康育龄妇女阴道内乳酸杆菌菌群的鉴定

目的检测健康育龄妇女阴道内乳酸杆菌的主要菌群种类及其产生过氧化氢的能力。方法采集223例健康育龄妇女阴道侧壁的分泌物，经过乳酸杆菌选择性培养基（Rogosa）与肉汤培养基（MRS）分离培养后，提取细菌染色体DNA，PCR扩增细菌的16SrRNA基因，测定16SrRNA核苷酸序列，然后与基因库（GenBank）中的数据进行比对，确定细菌的种类。并对乳酸杆菌产生过氧化氢的情况进行分析。结果从223例健康育龄妇女阴道中分离到8种乳酸杆菌种属，较常见的种属为卷曲乳杆菌（53．7％），詹氏乳杆菌（27．9％）与格氏乳杆菌（10．3％）。其他少见的细菌类型包括阴道乳杆菌（2．2％），L．coleohominis（1．5％），约氏乳杆菌（1．5％），嗜酸乳杆菌（1．5％）及发酵乳杆菌（1．5％）；大多数乳酸杆菌均能产生过氧化氢，其中卷曲乳杆菌和詹氏乳杆菌产生过氧化氢的能力较强。结论卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌和格氏乳杆菌是健康育龄妇女阴道内乳酸杆菌的主要种属。卷曲乳杆菌和詹氏乳杆菌有较强的产生过氧化氢的能力。     

A型流感病毒M2蛋白疫苗的研究进展

流感是由流感病毒引起的一种呼吸道传染病.目前应用的流感疫苗主要是针对流感病毒的膜蛋白HA和NA,但HA和NA存在抗原漂移和抗原转变问题,需要不断改换制备疫苗用的毒株.解决办法之一是研制一种"通用型"流感疫苗.M2蛋白是流感病毒第三种跨膜蛋白,具有离子通道作用,而且其基因序列高度保守.用M2蛋白或M2蛋白胞外区免疫小鼠可以有效保护小鼠免受致死性病毒攻击.因此,M2蛋白被认为是一种潜在的具有交叉保护性抗原,可用于开发通用型甲型流感疫苗.     

人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子在重组痘苗病毒中的 …

目的 观察人ＧＭ－ＣＳＦ（粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子）对重组痘苗病毒免疫效果的影响。方法 大鼠体内观察。结果 从核酸和蛋白水平均证实重组痘苗病毒ＲＶＪＳＢ１１７５Ｄ／ＧＭ－ＣＳＦ可同时表达ＧＭ－ＣＳＦ及ＨＳＶ－１ｇＤ（单纯疱疹病毒ｇＤ糖蛋白），但ＲＶＪＳＢ１１７５Ｄ／ＧＭ－ＣＳＦ免疫大鼠产生的抗－ＨＳＶ１ｇＤ特异性抗体水平与ＲＶＪＳＢ１１７５Ｄ组相比无显著性差异。结论 人ＧＭ－ＣＳＦ在大鼠体内对     

人血管内皮生长因子受体Ｆlt—1胞外区２—３loop在Ｐichia.pastoris酵母中的

目的：研究人Ｆlt-1胸外区２－３loopcDNA在Ｐichia,pastoris醇母中的表达,获得高效表达的具有生物学活性的重组Ｆlt-1（２－３）,方法：采用ＰＣＲ扩增Ｆlt-1(2-3)基因,经ＤＮＡ序列分析后,插入含ＡＯＸ１启动子和α分泌信号肽序列的Ｐichia.pastoris酵母表达载体中,构建重组质粒pPIC9K/Flt-1(2-3),转化酵母宿主菌ＧＳ１１５,筛选Ｈis^ Mut^s表型转化子,摇瓶培养,１％甲醇诱导表达,表达产物经ＣＭ－ＳepharoseFF阳离子交换层析和Ｓephacry1S-10０分子筛层筛析纯化后,测定其生物学活性。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示,表达产物以可溶性分子形式存在于上清中,诱导４d的表达量达上清总蛋白的６0%以上。ＥＬＩＳＡ及Ｗesternblot实验表明,表达产物具有良好的抗原性和特异性,经ＣＭ－ＳepharoseFF阳离子交换层析和ＳephacrylS-100 分子筛层析纯化后,Ｆlt-1(2－３）纯度达到９０％以上,生物学活性检测证实其具有结合hVEGF165的能力和抑hVEGF165对ＨＵＶＥＣ的促增残功能。结论：获得了具有生物学活性的可深性重组Ｆlt-1 受体胞外区２－３loop小片段,为进一步的动物和临床应用打下了基础。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体在肾癌中的分布及其意义

目的：研究肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（TRAIL）受体在肾癌组织中的分布及其意义。方法：采用RT－PCR及NorthernBlot的方法检测TRAIL受体在肾癌组织及正常肾组织,肾癌细胞系GRC－I和正常肾小管细胞系HK－2中的表达。结果：死亡受体DR4、DT4在肾癌组织及正常肾组织、肾癌细胞系GRC－I和正常肾小管细胞系HK－2中强表达;假受体DcR-1在正常肾组织和正常肾小管细胞系HK－2中强表达;假受体DcR-2未见表达。结论TRAIL基因在肾癌肿瘤细胞的凋亡机制中可能发挥重要的作用。