干预CD86协同刺激信号在诱导母胎界面Th2型免疫偏倚中的作用

目的 :探讨干预CD86协同刺激信号在诱导母胎界面局部形成Th2型免疫偏倚中的作用。方法 :将正常妊娠模型 (CBA×BALB/c)和自然流产模型 (CBA×DBA/ 2 )CBA孕鼠均分为两组 ,于孕第 4、6、8天 ,对照组腹腔注射大鼠IgG ,实验组腹腔注射大鼠抗小鼠CD86mAb ;孕第 9天 ,ELISA测定母胎界面组织培养上清中Th1型 (IFN γ、TNF α) /Th2型(IL 4、IL 10 )细胞因子表达水平 ,并计算IL 4 /IFN γ、IL 10 /IFN γ比值 ;孕第 12天比较两种模型各组的胚胎吸收率。结果 :正常妊娠模型中 ,干预CD86协同刺激信号对母胎界面原有的Th2型免疫偏离及妊娠预后均无显著影响。自然流产模型中 ,干预CD86协同刺激信号能够诱导母胎界面局部形成Th2型免疫偏倚并显著改善其妊娠预后。结论 :于孕早期 ,干预CD86协同刺激信号能够改善母胎界面局部细胞因子微环境 ,形成维持正常妊娠所需的Th2型免疫偏倚 ,诱导母胎免疫耐受     

协同刺激分子CD86在母-胎免疫调节中的作用

目的　探讨协同刺激分子CD86在母 胎免疫调节中的作用。方法　建立自然流产模型(CBA×DBA/ 2 )及正常妊娠模型 (CBA×BALB/c)。两种模型分别再分为 3个组 :(1)以大鼠的IgG为对照的对照组 ;(2 )于妊娠第 4、6、8、10天 ,分别给CBA孕鼠腹腔注射大鼠抗小鼠CD86单克隆抗体的多次干预组 ;(3)仅于妊娠第 4天 ,给CBA孕鼠单次腹腔注射抗CD86单克隆抗体的单次干预组。每次腹腔注射的抗体剂量均为 10 0 μg。于妊娠第 14天计算各组胚胎吸收率。 结果　 (1)自然流产模型与正常妊娠模型的对照组胚胎吸收率分别为 2 7 78%和 8 42 %。 (2 )于妊娠第 4、6、8、10天腹腔注射抗CD86单克隆抗体后 ,自然流产模型的多次干预组胚胎吸收率下降至 9 6 8% (P <0 0 5 ) ;而正常妊娠模型的多次干预组胚胎吸收率上升至 13 5 4% (P >0 0 5 )。 (3)妊娠第 4天单次腹腔注射抗CD86单克隆抗体 ,自然流产模型单次干预组的胚胎吸收率下降至 7 14% (P <0 0 0 1) ;而正常妊娠模型单次干预组的胚胎吸收率上升至 11 39% (P >0 0 5 )。结论　妊娠早期 ,尤其在胚胎对母体的致敏阶段 (着床期 ) ,阻断母 胎界面的CD86协同刺激信号 ,将诱导母体对胚胎的免疫耐受 ,从而减少胚胎吸收 ,提高妊娠成功率     

干预CD86协同刺激信号对母胎界面Th1/Th2型细胞因子转录调控及妊娠结局的影响

目的探讨干预CD86协同刺激信号对母胎界面Th1/Th2型细胞因子转录调控及妊娠结局的影响。方法:将正常妊娠模型(CBA/J×BALB/c)和自然流产模型(CBA/J×DBA/2J)CBA孕鼠均分为两组:对照组(各10只)于孕d 4、d 6、d 8腹腔注射大鼠IgG;干预组(各10只)于孕d 4、d 6、d 8腹腔注射大鼠抗小鼠CD86 mAb。孕d 9竞争性半定量RT-PCR测定各组母胎界面组织中Th1型(IL-12、IFN-γ)/Th2型(IL-4、IL-10)细胞因子转录水平;孕d 12比较两种模型各组的胚胎吸收率。结果:正常妊娠模型中,干预CD86协同刺激信号对母胎界面Th1/Th2型细胞因子转录水平及妊娠预后均无显著影响(P>0.05)。自然流产模型中,干预CD86协同刺激信号能够升调节母胎界面局部Th2型而降调节Th1型细胞因子转录水平,并显著改善其妊娠预后(P<0.05)。结论:于孕早期干预CD86协同刺激信号能够调控母胎界面局部Th1/Th2型细胞因子转录,形成维持正常妊娠所需的Th2型免疫偏倚,诱导母胎免疫耐受。     

环孢素A作用于人滋养层细胞差异表达的功能基因

 目的探讨环孢素A(cyclosporin A,CsA)作用于人滋养层细胞差异表达的功能基因。方法应用抑制性消减杂交筛选1.0μmol·L^-1 CsA作用于JAR细胞系前后差异表达的功能基因,经RT-PCR及蛋白质印迹进一步验证CsA作用前后原代分离的人早孕期滋养层细胞及JAR细胞株titin表达的变化。结果CsA作用于人JAR细胞系前后出现6个具有差异表达的基因,其中1个为已知基因titin,2个为功能未知的mRNA,3个为位于16号染色体上的EST。RT-PCR显示,CsA作用于人滋养层细胞24 h后出现titin mRNA的表达,72 h达高峰,并呈现明显的剂量依赖性,1.0μmol·L^-1 CsA作用最明显。蛋白质印迹显示,CsA可诱导titin的表达。结论CsA可能通过诱导滋养层细胞titin的高表达,改变其生物学行为,从而有利于胚胎着床及早期发育。     

大鼠抗小鼠CD80/CD86单克隆抗体的制备与鉴定

众所周知 ,在Ｔ细胞活化时 ,以单克隆抗体 (ｍＡｂ )阻断协同共刺激分子ＣＤ80 (Ｂ7 1) /ＣＤ86 (Ｂ7 2 )刺激信号 ,可诱导相应Ｔ细胞产生抗原特异性的免疫无反应 (ａｎｅｒｇｙ)或免疫耐受[1] 。对协同刺激信号的干预为移植免疫学、肿瘤和自身免疫性疾病的免疫治疗开辟了新途径。本文介绍制备与鉴定抗ＣＤ80ｍＡｂ和抗ＣＤ86ｍＡｂ的方法 ,以利于协同刺激分子的基础及应用研究。1　材料和方法1 1　材料　细胞系Ｐ815、转染小鼠ＣＤ80ｃＤＮＡ的ＣＤ80 Ｐ815、转染小鼠ＣＤ86ｃＤＮＡ的ＣＤ86 Ｐ815 ,及分别产生大鼠抗小鼠ＣＤ80ｍＡｂ (…     

一种人精子膜蛋白的基因定位及其抗体对小鼠体外受精的影响

人精子膜蛋白 YWK II胞外区一段 1 6肽 YAL 1 98抗体 ,经小鼠体外受精实验 ,表明有明显的抑制作用 ,受精率约下降 2 0 .8% ,并且发现 YAL 1 98抗体主要抑制小鼠精子穿入透明带。运用荧光原位杂交技术 (FISH) ,将 YWK II基因定位在人第 1 1号染色体 ,q2 4～ 2 5区。     

原始生殖细胞和胚胎生殖细胞发育多能性

精卵结合是动物藉以繁衍后代维持种族延续的基本方式,受精卵经过不断的分裂、分化产生内中外三个胚层以及支持胚胎发育的胚外组织,最终形成完整的个体。个体所有组成细胞均来源于受精卵且具有相同的基因型,因而受精卵作为整个发育程序（ｐｒｏｇｒａｍ）的起点其发育潜能（ｐｏｔｅｎｃｙ）为全能性（ｔｏｔｉｐｏｔｅｎｃｙ）。随着发育程序的推进,基因差次表达积累到一定程度导致分化细胞形成,在此过程中,发育潜能由全能、多能而至限能,最后发育全能性或多能性仅局限于少数细胞群,即不同类型的干细胞。有趣的是,具发育全能性的受…     

体外CIK细胞的细胞因子表达谱研究的初步探讨

目的：探讨CIK细胞的细胞因子表达谱。方法：Ficoll分层液分离人外周血得到非粘附性淋巴细胞，体外经IFN-γ、IL-1β、IL-2及抗CD3单抗诱导分化成CIK细胞。流式细胞术鉴定细胞表型，RT-PCR定性和半定量检测细胞因子的表达。结果：CD3^＋CD56^＋细胞百分率均可达50％以上，增殖活性随培养时间的延长而上升，最高集中在14-21天。该诱导条件下获得的CIK细胞不表达IFN-ω、IFN-κ和IFN-λ，其他IFN成员多集中在10-20天高表达，初期和末期都较低；IL家族多数成员在6—10（或20）天时稳定表达，后略有下调；TNT-β和TRAIL各时期组成性表达，表达水平变化很小或几乎不变。TNF-α第20天时高表达。TGF-β1。则集中在后期表达，个体差异小。结论：在体外CIK细胞能广泛表达多种类型的细胞因子。     

大鼠睾丸GABA_A受体b3t拼接变异体在CHO细胞中的异源表达

目的:研究大鼠睾丸GABAA受体b 3t拼接变异体特有5端的特性以及可能的细胞内定位作用。方法:将b 3t拼接变异体的全长cDNA克隆到真核表达载体pEGFP-N1和pEGFP-C1中,用磷酸钙共沉淀方法转染CHO细胞,表达后用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察分析,并用ConA-Texas-Red标记转染后的细胞,进一步研究其在胞内的定位分布情况。结果:大鼠睾丸GABAA受体b 3t拼接变异体在CHO细胞中表达时呈现两种表达类型,但均不能定位到细胞膜上,而大鼠脑b 3亚基能定位分布到细胞膜上。ConA标记的结果显示b 3t拼接变异体滞留在内质网上。结论:大鼠睾丸GABAA受体b 3t拼接变异体N端的25 aa序列中可能存在内质网滞留信号。     

干预CD86协同刺激信号诱导母-胎界面Th2型免疫偏离及其对妊娠预后的影响

目的探讨干预CD86协同刺激信号在母-胎界面Th1/Th2型细胞因子表达调控及诱导母-胎免疫耐受中的作用.方法将正常妊娠模型CBA×BALB/C和自然流产模型CBA×DBA/2的CBA孕鼠均分为3组对照组于孕第4、6、8、10天腹腔注射大鼠IgG;A组于孕第4、6、8、10天腹腔注射大鼠抗小鼠CD86mAb;B组仅于孕第4天(着床期)腹腔注射大鼠抗小鼠CD86mAb.孕第9天,竞争性半定量RT-PCR测定各组母-胎界面Th1/Th2型细胞因子转录水平;孕第9、14天ELISA测定母-胎界面组织培养上清IL-4/IFN-γ比值;孕第14天比较两种模型各组的胚胎吸收率R.结果正常妊娠模型中,干预CD86协同刺激信号对母胎界面原有Th2型免疫偏离及妊娠预后均无显著影响.自然流产模型中,干预CD86协同刺激信号能够诱导母胎界面局部形成Th2型免疫偏离并显著改善其妊娠预后.结论于孕早期干预CD86协同刺激信号能够恢复母-胎界面局部Th1型/Th2型细胞因子表达的生理平衡,形成维持正常妊娠所需的Th2型免疫偏离,诱导母-胎免疫耐受.