pEGFP-ING4真核表达载体的构建及在人脐静脉内皮细胞中的表达

目的构建携带生长抑制因子4(ING4)基因的真核表达载体pEGFP-ING4并转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC),为进一步研究ING4对胶质瘤血管生成影响提供基础。方法提取人胎盘细胞中总RNA,RT-PCR扩增ING4并克隆至pEGFP-C2载体,酶切电泳鉴定出阳性克隆送测序,利用靶向转染试剂jetPEI-HUVEC转染HUVEC,通过免疫组化检测转染细胞中ING4的表达。结果 成功扩增ING4基因,基因全长747 bp。重组质粒pEGFP-ING4的酶切鉴定及测序结果均证明ING4基因成功克隆到真核表达载体中。酶切片段电泳结果表明:目的条带与ING4的开放读码框大小相符;测序结果和ING4的开放读码框比对相似性为100%。转染重组质粒后的HUVEC中ING4蛋白表达水平增强。结论本实验成功构建携带ING4基因的真核表达载体pEGFP-ING4,并可在HUVEC中获得ING4蛋白的增强表达。     

ING4蛋白对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨ING4(inhibitor of growth family4)蛋白对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响.方法 用PEI转染ING4蛋白过表达(pEGFP-C2/ING4转染组)及阴性对照载体(pEGFP-C2转染组)至人胶质瘤U251细胞,G418筛选后建立ING4蛋白稳定表达细胞株;RT-PCR、免疫...     

经小脑延髓裂入路显微手术治疗儿童第四脑室肿瘤

目的 探讨经小脑延髓裂(CMF)人路显微手术治疗儿童第四脑室肿瘤的方法,提高手术治疗效果.方法 对17例2～14岁原发第四脑室肿瘤患儿,采用枕下正中切口、横窦下颅骨开窗骨瓣成形及经小脑延髓裂入路显微切除肿瘤,其中广泛型CMF切开12例,外侧壁型切开3例,外侧隐窝切开2例;硬脑膜严密缝合或修补,骨瓣复位并固定.结果 肿瘤全切除15例,次全切除2例,病理结果髓母细胞瘤9例,室管膜瘤5例,星形细胞瘤3例,无围手术期死亡发生.术后15例患儿症状体征均明显改善或消失,无新发共济失调、震颤、肌张力降低及脑积水、小脑缄默综合征等并发症.复发2例,均为髓母细胞瘤,2年后死亡1例.结论 经小脑延髓裂人路能较好地显露儿童第四脑室肿瘤,可减少因切开小脑蚓部和向侧方牵拉损伤小脑所导致的并发症发生.     

颅骨骨膜减张修补硬脑膜在急性小脑幕切迹疝去骨瓣减压手术中的应用

目的分析比较急性小脑幕切迹疝去骨瓣减压手术中,颅骨骨膜瓣减张修补硬脑膜与常规缝合硬脑膜的临床疗效。方法回顾性统计分析2016年1月份~2017年6月份我院急性小脑幕切迹疝去骨瓣减压手术患者的预后,采用曼-惠特尼U检验(Mann-Whitney U test)分析颅骨骨膜瓣减张修补硬脑膜(观察组,n=26)与常规缝合硬脑膜(对照组,n=241)两组患者GOS的差异。结果两组组患者GOS比较,U检验发现硬脑膜减张缝合组(观察组)的GOS与对照组之间的差异具有统计学意义(P0.05)。结论硬脑膜减张缝合组的患者预后明显优于常规缝合组,并发症明显小于对照组。     

1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖靶向NFKB2的分子对接研究

目的:1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖是否可与NFKB2形成良好的分子对接,形成稳定的相互作用。方法:使用Auto Dock软件计算NFKB2与PGG的结合模式和亲和力。结果:PGG与受体NFKB2具有较好的对接,可形成稳定的相互作用,极性相互作用及氢键是主要的相互作用类型。结论:PGG很有可能通过NFKB2发挥作用,NFKB2很有可能是PGG的作用靶点。     

pEGFP-ING4抑制裸鼠皮下人U87移植瘤生长及肿瘤血管生成

目的 探讨pEGFP-ING4对裸鼠体内人U87细胞移植瘤生长及对肿瘤血管生成的影响.方法 将成功构建的18只人U87细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为pEGFP-ING4和pEGFP-C2转染组及PBS空白对照组3组,测量各组肿瘤的体积变化,荧光显微镜观察转染瘤体内绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达情况,免疫组织化学SABC法检测微血管密度(microvessel density,MVD).结果 荧光显微镜下pEGFP-ING4 组和pEGFP-C2组均观察到GFP表达,接种后第21d、28d、35d各组皮下肿瘤体积(mm3)为:PBS 组(201.8±19.3,418.9±26.4,622.1±51.3),pEGFP-C2 组(197.6±18.9,398.4±20.4,593.7±48.7),pEGFP-ING4 组(138.9±8.4,198.7±21.5,293.2±31.6),肿瘤接种后在同一时间点内,pEGFP-ING4 组肿瘤体积明显小于另外两组(P<0.05);MVD检测(个/mm2):PBS 组(15.83±0.98),pEGFP-C2 组(15.83±1.62),pEGFP-ING4 组(4.17±1.17),与另外两组比较,pEGFP-ING4 组MVD明显降低(P<0.01).结论 ING4基因能够明显抑制人U87细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,抑制胶质瘤血管的生成可能是其抗肿瘤的重要机理之一.     

以癫痫发作为首发症状的边缘系统病变的手术治疗

目的探讨边缘系统病变致顽固性癫痫手术治疗方法及效果。方法回顾性分析了我院自20081月份至2011年11月手术治疗的以癫痫发作为首发症状的边缘系统病变患者40例,经完善的术前评估、术中监测后,均行标准前颞叶切除＋病灶切除。结果术中病变全切30例,部分切除10例。35例术后随访6～36个月（平均22个月）,EngelⅠ级25例,1／级10例;5例失访。结论边缘系统病变可引起顽固性癫痫,手术切除病灶＋癫痫灶安全,对癫痫控制效果好。     

基于靶向转铁蛋白受体的荧光探针在原位胶质瘤动物模型的研究

目的 探究靶向转铁蛋白受体的荧光探针在原位胶质瘤动物模型上的应用价值.方法 将人胶质瘤细胞株U87转染表达荧光素酶的慢病毒H113,构建稳定表达荧光素酶的U87-MGH113稳定细胞株.在15只小鼠尾状核头部接种U87-MG H113细胞.接种3周后,腹腔注射荧光素酶底物,在小动物活体成像仪上采用荧光素酶专用检测通道检测确定成瘤.将确定成瘤的12只动物模型按随机数字表法随机分为PBS组、Cy5-CRT组、Cy5-CG7C组3组,尾静脉分别注射200μ10.1 mol/L的PBS、Cy5-CRT、Cy5-CG7C,注射24、36、48 h后在小动物活体成像仪上采用Cy5专用检测通道检测.结果 （1）成功构建了稳定表达荧光素酶的细胞株,并且证实单位时间内检测到的信号强度与细胞数量的多少成线性关系;（2）在成像效果最好的36 h时间段,3组的荧光信号强度分别为5.78±0.16（PBS组）、44.16 ±0.33（Cy5-CRT组）、5.34±0.17（Cy5-CG7C组）,Cy5-CRT组明显强于PBS组和Cy5-CG7C组,差异有统计学意义（P ＜0.005）.结论 Cy5-CRT光学探针在胶质瘤处聚集,与正常脑组织有很好的区分性,具有潜在的临床应用价值.