MASPIN在卵巢癌SKOV3细胞中表达调控机理的研究

目的 构建并瞬时转染P63和MASPIN报告基因质粒,检测转染前后MASPIN启动子活性的改变,初步探讨在卵巢癌中P63对MASPIN表达的调控作用.方法 构建MASPIN报告基因质粒,并与P63质粒(TAP63、△NP63)共转染卵巢癌SKOV3细胞,荧光素酶测定转染后MASPIN启动子活性的变化情况;P63质粒体外瞬时转染卵巢癌SKOV3细胞,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测转染后MASPIN mRNA表达水平的变化.结果 成功构建MASPIN报告基因质粒,并与P63质粒(TAP63、△NP63)共转染SKOV3细胞,荧光素酶报告基因法检测发现TAP63转染组MASPIN启动子活性高于空载体组和△NP63组(P＜0.05),而后两组之间差异无统计学意义(P＞0.05);P63质粒(TAP63、△NP63)瞬时转染SKOV3细胞,RT-PCR方法检测发现,TAP63转染组MASPIN mRNA表达高于未转染组、空载体组和△NP63组(P＜0.05),而后3组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TAP63能增强MASPIN启动子转录活性及MASPIN mRNA的表达,MASPIN可能是TAP63一个新的分子作用靶点.     

5-Fu与TRAIL联用抗结肠癌细胞株HT-29效应的实验研究

目的 观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与5-氟尿嘧啶(5-Fu)联用对结肠癌细胞株HT-29体外生长增殖、凋亡的影响,评价其联用效果.方法 体外培养HT-29细胞,采用磺基罗丹明B(SRB)法测定细胞的存活率,Webb系数法判断联用是否具协同作用,流式细胞FITC-Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡.结果 结肠癌细胞株HT-29对TRAIL不敏感(IC50＞10 μg·mL-1),对5-Fu敏感(IC50＜10 μg·mL-1);0.1、1、10 μg·mL-1 TRAIL分别与0.05、0.1、0.5 μg·mL-1 5-Fu联用48 h,除0.1 μg·mL-1 TRAIL与0.5 μg·mL-1 5-Fu联用组外,其余联用组细胞存活率均明显低于TRAIL单用组或5-Fu单用组水平;0.1 μ·mL-1 TRAIL及0.5 μg·mL-1 5-Fu单用或联用时,HT-29细胞凋亡率分别为8.6%、18.1%和30.8%.结论 5-Fu 与TRAIL联用具有协同的细胞毒和细胞凋亡作用.     

丝氨酸蛋白酶抑制剂在卵巢癌发展和血管生成中的作用机制研究

目的研究丝氨酸蛋白酶抑制剂(mammary serpin,MASPIN)在卵巢癌的发展和血管生成中的作用。方法采用免疫组化LsAB法对31例正常卵巢组织、35例上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)标本进行MASPIN、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达检测,分析它们与卵巢癌临床病理特点的关系;MASPIN真核表达质粒体外转染卵巢癌SKOV3细胞,用细胞免疫化学及半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测转染后卵巢癌细胞中VEGF的蛋白质和mRNA表达变化。结果 MASPIN、VEGF在卵巢癌中的表达与正常卵巢组织相比明显上调(P<0.05);MASPIN蛋白表达与非浆液性卵巢癌、低临床分期、无腹水形成差异有统计学意义((P<0.05);VEGF蛋白表达与卵巢癌腹水形成差异有统计学意义(P<0.05);卵巢癌中MASPIN蛋白表达与VEGF呈负相关(r=-0.738,P<0.05);细胞免疫组化及半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法均证实转染MASPIN cDNA的SKOV3细胞中VEGF的表达明显弱于转染空载体组和未转染组(P<0.05),而后两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MASPIN在卵巢癌的发展过程中可能仍发挥着肿瘤抑制基因的作用。MASPIN能从蛋白质和mRNA水平下调卵巢癌中VEGF的表达,并可能通过这一机制抑制卵巢癌血管生成。     

MASPIN、HPA在卵巢癌血管生成中的作用

[目的]研究丝氨酸蛋白酶抑制剂(MASPIN)、乙酰肝素酶(HPA)在卵巢癌的表达和血管生成的作用.[方法]采用免疫组化法对31例正常卵巢组织、35例上皮性卵巢癌标本进行MASPIN、HPA表达检测,CD34抗体标记血管内皮细胞计数微血管密度(MVD).MASPIN真核表达质粒体外转染卵巢癌SKOV3细胞,用细胞免疫化学及半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测转染后卵巢癌细胞中HPA蛋白和HPA mRNA表达变化.[结果]MASPIN在正常卵巢生发上皮细胞和卵巢癌细胞的阳性表达率分别为16.1％(5/31)和57.1％(20/35)(P＜0.05).HPA蛋白在正常卵巢生发上皮细胞未见表达,在卵巢癌细胞的阳性表达率为85.7％(30/35)(P＜0.05);MVD在卵巢癌中增高(P＜0.05).MASPIN蛋白表达与卵巢癌病理类型、临床分期和腹水相关(P＜0.05).HPA蛋白表达与卵巢癌淋巴结转移和腹水相关(P＜0.05).细胞免疫组化及RT-PCR方法均证实转染MASPIN cDNA的SKOV3细胞中HPA表达在各组间差异无统计学意义(P＞0.05).[结论] MASPIN在卵巢癌的发展过程中可能发挥着肿瘤抑制作用,并具有抑制血管生成作用.HPA表达与卵巢癌的恶性生物学行为密切相关.