AngⅡ-ROS-PKC/Nrf2/HO-1通路调控LX-2细胞增殖的机制研究

[目的]研究血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)对体外培养的LX-2细胞增殖的影响,并探讨蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)/核因子相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)/血红素氧化酶(hemeoxygenase-1,HO-1)通路在其中的作用。[方法]采用MTT法检测不同浓度AngⅡ作用不同时间对LX-2细胞增殖的影响,流式细胞术检测AngⅡ刺激后不同时间点LX-2细胞的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)表达水平,Western blot技术检测PKC、Nrf2、HO-1蛋白表达水平。[结果]与正常组比较,当AngⅡ浓度为10-5mol·L-1时,LX-2细胞增殖有统计学差异(P0.01)。与正常组比较,以10-5mol·L-1的AngⅡ刺激LX-2细胞0.5、24h时,细胞增殖有统计学差异(P0.05),ROS表达显著增加(P0.05)。Western blot提示,与正常组比较,10-5mol·L-1的AngⅡ刺激LX-2细胞2、24h后,PKC蛋白表达显著增加(P0.05,P0.01);刺激细胞2、12、24h后,Nrf2蛋白表达显著增加(P0.05,P0.01,P0.001);刺激细胞24h后,HO-1蛋白表达显著增加(P0.05)。[结论]AngⅡ刺激LX-2细胞后,早期即可产生ROS,促进细胞增殖,并迅速激活PKC,进而诱导Nrf2从复合物解离并移位入核,激发HO-1的表达,启动了细胞自身潜在的抗氧化作用。     

鳖甲煎丸对AngⅡ-ROS诱导下HSC-LX2细胞中PKC-Pyk2/SRC通路的影响

[目的]探讨鳖甲煎丸含药血清对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱生的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)作用下HSC-LX2细胞中蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)-富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(proline-rich tyrosine kinase 2,Pyk2)/SRC通路的影响。[方法]以人源肝星状细胞HSC-LX2为研究对象,以AngⅡ诱导产生ROS,再以鳖甲煎丸含药血清进行干预,以MTT法检测HSC-LX2细胞的增殖情况,荧光探针DCFH-DA检测细胞内ROS含量,Western blot检测PKC、Pyk2、SRC蛋白表达情况。[结果] MTT结果显示,与AngⅡ组比较,5%鳖甲煎丸含药血清培养24h后,鳖甲煎丸高、中剂量组显著抑制HSC-LX2细胞增殖(P0.05,P0.01);培养48h后,鳖甲煎丸高、中、低剂量组均能显著抑制HSC-LX2细胞增殖(P0.05,P0.05,P0.01);培养72h后,中剂量组有显著抑制效果(P0.01)。此外,除了15%中剂量鳖甲煎丸含药血清培养48h后有显著抑制效果(P0.05),其余各组、各时间段均无明显抑制作用,差异无统计学意义(P0.05)。荧光探针DCFH-DA结果显示,与空白对照组比较,AngⅡ组ROS产生明显增多,经鳖甲煎丸含药血清高、中剂量组干预后,ROS均不同程度减少。Western blot显示,鳖甲煎丸含药血清干预后,PKC(P0.001,P0.001,P0.001)、Pyk2(P0.05,P0.001,P0.001)、SRC(P0.001,P0.001,P0.01)蛋白表达均受到显著抑制。[结论] HSC-LX2细胞经AngⅡ刺激后可以产生ROS,且细胞增殖明显,此过程与PKC、Pyk2、SRC蛋白的激活有关。鳖甲煎丸可通过减少ROS的产生来阻止HSC-LX2细胞的增殖,其机制与抑制PKC、Pyk2、SRC蛋白的表达有关。     

合欢皮-白蒺藜药对对AngⅡ-ROS诱导下HSC-LX2细胞增殖及PKC/Nrf2/HO-1通路的影响

[目的]探讨合欢皮-白蒺藜含药血清对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导产生的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)作用下人源性肝星状细胞HSC-LX2的增殖及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)/核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)/血红素氧化酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)通路的影响。[方法]以HSC-LX2细胞为研究对象,先以AngⅡ诱导产生ROS,再以合欢皮-白蒺藜含药血清进行干预,MTT法检测HSC-LX2细胞的增殖情况,Western blot和Real-time PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、PKC、Nrf2、HO-1蛋白以及m RNA表达情况。[结果]MTT结果显示,与AngⅡ组比较,合欢皮-白蒺藜药对高、中、低剂量组均显著抑制HSC-LX2细胞增殖(均P<0.05)。Western blot结果显示,与AngⅡ组比较,合欢皮-白蒺藜药对高、中、低剂量组α-SMA蛋白表达减少(均P<0.001),低剂量组PKC蛋白表达减少(P<0.05),高、中剂量组Nrf2蛋白表达减少(P<0.001,P<0.01),高、中剂量组HO-1蛋白表达减少(P<0.001,P<0.001)。Real-time PCR结果显示,与AngⅡ组比较,合欢皮-白蒺藜药对高、中、低剂量组α-SMA mRNA表达减少(P<0.01,P<0.001,P<0.001),PKC mRNA表达减少(均P<0.001),Nrf2 mRNA表达减少(P<0.001,P<0.001,P<0.05),高、中剂量组HO-1 mRNA表达减少(均P<0.001)。[结论]HSC-LX2细胞经AngⅡ刺激后增殖活化明显,且α-SMA表达升高,此过程与PKC、Nrf2、HO-1蛋白的激活有关。合欢皮-白蒺藜可通过抑制HSC-LX2细胞增殖来阻止肝纤维化,其机制与抑制PKC、Nrf2、HO-1的表达有关。