不同加工方法对贯叶连翘中黄酮类成分的影响

目的:研究不同加工方法对贯叶连翘中5种主要黄酮类成分的影响及变化规律,以寻找适宜的干燥方法和条件。方法:贯叶连翘全草洗净泥土,分别经4、-20、-80℃储存48 h后阴干,直接阴干和晒干方法进行加工后,剪切后得到5组样本。采用超高液相色谱(UPLC-PDA)测定贯叶连翘中5种主要的黄酮类成分含量。将5种不同加工方法处理样品的数据标准化处理,以主成分分析法(PCA)综合评价贯叶连翘经不同加工方法处理后其中的黄酮类成分的含量变化规律,并对不同加工方法进行多元比较。结果:经UPLC分析,贯叶连翘5种黄酮类化合物均可在10 min内出峰,且在各自的线性范围内线性关系良好(r0.999 1),检出限范围为0.020~0.107μg·mL~(-1),定量限范围为0.133~0.667μg·m L-1,平均加样回收率为95.05%~102.47%,相对标准偏差(RSD)值为0.13%~1.99%。PCA结果显示,不同处理方法对贯叶连翘成分含量影响综合评分依次为:晒干-80℃-20℃阴干4℃。结论:建立的UPLC方法快捷、灵敏、准确,适用于5种主要黄酮类成分的同时测定。PCA结果说明,不同加工方法对贯叶连翘中黄酮类活性成分有一定影响,综合主要成分的变化规律,选择-20℃冷冻48 h后晾干作为优化的加工方法。     

运用知识管理方法构建中医医案信息共享平台

知识管理是指在组织中建构一个人文与技术兼备的知识系统,让组织中的信息与知识,透过获得、创造、分享、整合、记录、存取、更新等过程,达到知识不断创新的最终目的,并回馈到知识系统内,个人与组织的知识得以永不间断的     

中西医结合治疗外伤性瞳孔散大的临床观察

外伤性瞳孔散大是眼球钝挫伤的常见并发症，轻者影响视力，重者可继发青光眼。我院采用中西医结合的方法治疗外伤性瞳孔散大取得较好的临床疗效，现将结果报告如下。     

益气通脉汤联合常规西药治疗H型高血压病患者的疗效及对血清Hcy、AngⅡ水平的影响

目的 探究益气通脉汤联合常规西药治疗H型高血压病患者的疗效及对血清Hcy、AngⅡ水平的影响。方法 选取2019年6月—2020年6月于该院心血管内科就诊的H型高血压病患者81例为研究对象,随机分为观察组40例和对照组41例,对照组给予常规西药治疗,观察组给予益气通脉汤+西药治疗。比较两组治疗后临床疗效及不良反应,治疗前后中医证候积分、血压水平、肾素活性(PRA)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)、血浆血同型半胱氨酸(Hcy)、内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)水平。结果 治疗后,观察组总有效率(92.50%,37/40)大于对照组(75.61%,31/41),差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组头晕目眩、头空痛、倦怠懒言、乏力自汗各项中医症状积分均低于对照组(P<0.05);观察组SBP、DBP水平均低于对照组(P<0.05);观察组PRA、AngⅡ、ALD水平均低于对照组(P<0.05);观察组Hcy、ET-1水平均低于对照组,NO水平高于对照组(P<0.05)。结论 益气通脉汤联合常规西药可改善H型高血压病患者中医临床症状...     

抗转铁蛋白受体双价抗体的构建、表达及鉴定

目的：抗转铁蛋白受体（TfR）双价抗体（bsFv）构建、表达及其与细胞结合的活性鉴定。方法：以抗TfR的单链抗体（scFv）为模板，设计引物引入中问连接肽（G4S）及酶切位点AscI，通过PCR方法扩增两条scFv片段，将其连接并克隆至原核表达载体pAB1，转化大肠杆菌TG1，阳性菌经IPTG诱导表达，FCM检测bsFv与K562，HepG2肿瘤细胞结合的活性及特异性。结果：酶切鉴定及DNA测序证明该bsFv构建成功；SDS-PAGE、Westernblot鉴定表明表达蛋白分子量与bsFv理论值一致；FCM结果证明bsFv可与K562，HepG2肿瘤细胞特异性结合，且结合的阳性率较scFv有所提高。结论：成功构建了抗转TfR的bsFv，且能与K562，HepG2肿瘤细胞特异性结合。     

抗人转铁蛋白受体单克隆抗体体外抗瘤效应研究

目的:探讨抗人转铁蛋白受体(TfR)单克隆抗体(mAb)体外抗瘤效应.方法:采用CFSE染色、PI-Annexin Ⅴ染色和PI染色,通过流式细胞术分析抗人TfR mAb对高表达的人肝癌细胞系HepG2和人乳腺癌细胞系MCF-7增殖、凋亡和周期的影响;通过MTT法检测抗人TfR mAb联合化疗药物对HepG2和MCF-7细胞增殖的抑制作用.结果:抗人TfR mAb能抑制HepG2和MCF-7细胞的增殖,并诱导其凋亡和S期阻滞;与化疗药物联用可增强其对肿瘤细胞增殖的抑制作用.结论:抗人TfR mAb具有良好的体外抗瘤效应.     

掌叶大黄发根及愈伤组织、悬浮细胞中蒽醌类成分的比较研究

目的：比较Ｒｉ质粒转化的掌叶大黄发根与愈伤组织、悬浮细胞以及掌叶大黄生药中游离蒽醌成分的含量。方法：用发根农杆菌Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ９４０２野生型菌株感染掌叶大黄外植体以诱导发根，建立发根离体培养系，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ鉴定发根；分别诱导掌叶大黄愈伤组织和悬浮细胞；用高效液相色谱法测定发根、愈伤组织、悬浮培养细胞以及掌叶大黄生药中芦荟大黄素等游离蒽醌化合物的质量含量。结果：从子叶柄上诱导出了发根，并建立了培养体系；Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果证明Ｒｉ质粒ＴＤＮＡ转移并整合到植物细胞基因组中；用叶片作外植体诱导出了愈伤组织；悬浮培养细胞用叶片、叶柄外植体诱导的愈伤经液体培养获得；掌叶大黄发根中各种游离蒽醌化合物含量普遍高于愈伤组织，但低于生药和悬浮培养细胞。结论：用掌叶大黄发根培养物生产蒽醌化合物是一条值得探索的新途径。     

肝癌细胞特异性结合双价抗体的构建表达与鉴定

目的 构建和表达与肝癌细胞特异结合的双价单链抗体（bivalent single-chain Fv，BsFv），并鉴定该双价抗体的生物活性。方法 以与肝癌细胞特异结合的单链抗体（scFv）为模板，设计引物引入中间连接肽（G4s）及酶切位点AscI，通过聚合酶链反应（PCR）方法扩增出两个scFv片段，将其连入原核表达载体pAB1；构建的表达载体转化大肠埃希菌TG1，挑取单克隆细菌进行扩增，提取质粒酶切、测序鉴定。阳性菌经IPTG诱导表达，表达产物经SDS-PAGE，Western blot鉴定，间接免疫荧光流式细胞术（FACS）测定与肝癌细胞特异结合的特性。结果 经酶切鉴定以及DNA测序结果表明该BsFv构建成功，SDS．PAGE、Western blot鉴定表明表达蛋白相对分子量与BsFv理论值一致，且表达产物同亲本scFv比较，与肝癌细胞特异结合活性增强。结论 BsFv构建成功，BsFv较scFv具有明显优势，为其用于临床肿瘤的诊断和治疗奠定了基础。     

顺铂联合土贝母皂苷甲对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用研究

目的:探讨土贝母皂苷甲与顺铂单独及联合应用对人宫颈癌Hela细胞的抑制作用,以期对临床上药物治疗宫颈癌提供新的思路和理论依据.方法:采用MTT法检测单用土贝母皂苷甲、DDP及两药联合时对HeLa细胞的生长抑制率.用流式细胞仪测定细胞周期变化.结果:土贝母皂苷甲组(20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml)、顺铂组(10μmol/L)及联合组(40μg/ml土贝母皂苷甲+10μmol/L顺铂)宫颈癌Hela细胞株均有不同程度的生长抑制作用;土贝母皂苷甲组随着药物浓度增加,作用时间延长,对Hela细胞的生长抑制率逐渐升高;土贝母皂苷甲与顺铂联合用药较单一用药对Hela细胞的生长抑制率增高,具有浓度―时间依赖性.流式细胞仪分析结果显示:土贝母皂苷甲组、顺铂组及联合组作用于宫颈癌Hela细胞株24小时,可阻滞细胞周期于G2/M期.结论:土贝母皂苷甲对宫颈癌HeLa细胞株具有生长抑制作用,且呈剂量和时间依赖性,其与顺铂联合应用具有协同作用,联合应用可减少顺铂用药剂量;土贝母皂苷甲与顺铂单独及联合作用于宫颈癌Hela细胞株24h可阻滞细胞周期于G2/M期.