基于网络药理学联合分子对接探析强精片治疗男性不育症的分子机制＊

目的 通过网络药理学及分子对接技术探析强精片治疗男性不育症的有效成分和潜在分子机制，并对不育症模型小鼠进行相关作用靶点的实验验证。方法 使用中药系统药理学分析平台（TCMSP）收集强精片的活性成分和潜在靶点，利用Genecard数据库筛选男性不育症的疾病靶点；然后将疾病靶点与药物预测靶点取交集，借助Cytoscape3.7.2软件构建交集靶点网络以及蛋白质-蛋白质相互作用网络，利用Bioconductor平台和R语言进行GO和KEGG富集分析。采用氯化镉注射造模不育症小鼠模型，采用HE染色、电镜观察睾丸结构，qPCR检测Pi3kcb、Akt1表达量，探讨强精片治疗不育症的潜在机制。并将药物活性成分与疾病靶点进行分子对接，探讨潜在作用成分及靶点机制。结果 共获得109个强精片活性成分及286个可用于后续分析的靶点，476个男性不育症靶点，映射得出69个药物-疾病共同靶点。GO分析提示主要与营养、抗氧化、对类固醇激素反应等生物过程及功能相关。KEGG通路分析提示主要与PI3K-Akt、TNF、内分泌抵抗等信号通路相关，PI3K-Akt是核心信号通路。强精片可以改善不育症模型小鼠睾丸结构，提高Pi3kcb、Akt1 mRNA表达。强精片中活性成分槲皮素、木犀草素、山奈酚、β-谷固醇、花生四烯酸与靶标蛋白MAPK1、AKT1、HSP90AA1、IL6、ESR1结合稳定。结论 本研究初步明确了强精片治疗男性不育症的主要靶标和通路，为后续深入研究提供一定参考。     

基于Toll样信号通路探讨强精片改善少弱精子症大鼠的作用机制

目的?探讨中药强精片（QJP）通过调控睾丸Toll样信号通路改善解脲支原体感染及环磷酰胺诱导两种少弱精子症大鼠模型生精功能的作用机制。方法?将40只雄性SD大鼠随机分为5组，正常对照组（NC组）、解脲支原体感染少弱精子症组（UU组）、环磷酰胺少弱精子症组（CTX组）、强精片干预解脲支原体感染少弱精子症组（UU+QJP组）、强精片干预环磷酰胺少弱精子症组（CTX+QJP组），每组8只。造模后NC、UU、CTX组给予生理盐水灌胃，UU+QJP组、CTX+QJP组给予强精片0.45 g/（kg·d）灌胃，均给药4周。记录大鼠一般状态、睾丸附睾湿重，测定精子数量；HE染色观察睾丸及附睾结构变化；测量血清性激素水平；免疫组织化学染色分析睾丸Toll 样受体4（TLR4）、髓样分化因子（MYD88）、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6（TRAF6）蛋白表达；RT-PCR测定TLR4、MYD88、TRAF6 mRNA表达。结果?与NC组比较，CTX、UU组的大鼠一般状态较差，HE染色显示生精细胞不同程度减少，免疫组化显示TLR4、MYD88表达增多，TRAF6表达减少，CTX+QJP组及UU+QJP组有所改善。与NC组比较，UU组、CTX组精子总数、A＋B级精子、A＋B＋C级精子、促黄体激素（LH）、睾酮（T） 水平、TRAF6 mRNA表达下降（P<0.05），卵泡刺激素（FSH）、雌二醇（E2）水平、TLR4、MyD88 mRNA表达增加（P<0.05）。与UU组和CTX组比较，UU+QJP组和CTX+QJP组精子密度、A＋B级精子、A＋B＋C级精子、LH、T水平、TRAF6 mRNA表达增加（P<0.05），FSH、E2水平、TLR4、MyD88 mRNA表达下降（P<0.05）。结论?强精片可改善解脲支原体感染以及环磷酰胺所致少弱精子症大鼠的精子水平，其机制可能与调控睾丸中Toll样信号通路的关键靶点TLR4、MYD88、TRAF6有关。     

强精片对睾丸支持细胞Toll样受体信号通路的作用北大核心CSCD

目的探讨强精片对睾丸支持细胞(SC)Toll样受体(TLRs)信号通路的作用。方法制备解脲支原体(UU)感染SC模型,分为模型组(空白血清)、强精片组(强精片含药血清)、TAK242组(TLR4抑制剂TAK242),另设正常SC采用空白血清培养为空白组。采用RT-q PCR和Western Blot分别检测TLR4、胞内下游分子髓样分化因子(My D88)、肿瘤坏死因子受体相关因6(TRAF6)、核因子κB(NF-κB)的mRNA和蛋白表达水平,免疫荧光技术检测NF-κB的核转位情况。结果与空白组比较,模型组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κB mRNA和蛋白表达、p NF-κB蛋白表达以及NF-κB核转位比例增加(P<0.05)。与模型组比较,强精片组TLR4、TRAF6 mRNA及蛋白表达降低,MyD88、NF-κB、p NF-κB蛋白表达及NF-κB核转位比例降低(P<0.05);TAK242组MyD88、TRAF6 mRNA及蛋白表达、NF-κB及pNF-κB蛋白表达及NF-κB核转位比例降低(P<0.05)。与TAK242组比较,强精片组TRAF6 mRNA表达升高,pNF-κB蛋白表达及NF-κB核转位比例降低(P<0.05)。结论强精片可抑制TLR4/MyD88/TRAF6/NF-κB信号通路,作用与TLR4抑制剂TAK242相近。     

强精片对不育模型SD大鼠细胞凋亡通路Fas/FasL的影响

目的:观察强精片对不育模型SD大鼠精液质量及Fas/Fas L通路的影响。方法:70只雄性SD大鼠随机分为空白组20只与雷公藤多甙片(GTW)灌胃造模组50只,灌胃3周后两组各取10只进行模型验证。证明模型成功后,将40只模型组大鼠,随机分为模型组、强精片低、中、高剂量组(剂量分别为GTW 20 mg/(kg·d)、GTW 20 mg/(kg·d)+强精片58 mg/(kg·d)、GTW 20 mg/(kg·d)+强精片105 mg/(kg·d)、GTW 20 mg/(kg·d)+强精片233 mg/(kg·d)),灌胃4周后取血处死,检测精液质量及睾丸组织Fas L凋亡因子表达。结果:模型组大鼠精子浓度[(10.94±3.58)×10~6/ml]、活力[(9.31±5.79)%]、活率[(24.03±6.93)%]降低明显,与空白组[(71.99±9.72)×10~6/ml]比较差异显著(P0.01);强精片各组在用药4周后精子浓度、活力、活率均有提高,其中强精片高[(59.66±4.53)×10~6/ml、(35.45±5.21)%、(61.97±9.75)%]、中剂量组[(40.89±4.90×10~6/ml、(24.41±4.79)%、(60.06±10.62)%]与模型组间存在极显著差异(P0.05或P0.01),并降低模型大鼠睾丸内凋亡因子Fas L表达(P0.05或P0.01)。结论:雷公藤多甙可能通过上调Fas/Fas L信号通路,诱导生精细胞凋亡,导致精子浓度、活力、活动率等指标降低,造成不育。而中药强精片可能通过降低睾丸内Fas L凋亡因子表达,提高大鼠生殖功能。     

强精片对生精功能障碍大鼠模型Cdyl、G9a、HDAC1表达的影响

目的观察强精片对生精功能障碍模型大鼠精子质量及Cdyl、G9a、HDAC1表达的影响。方法50只健康雄性SD大鼠随机分为空白组,模型组,强精片低、中、高剂量组,每组10只,模型组采用环磷酰胺50mg/kg腹腔注射5天,空白组给予等量生理盐水注射。自第6天起,强精片低、中、高剂量组分别给予强精片0.17、0.33、0.67g/(mL·100g)灌胃,空白组及模型组给予1%羧甲基纤维素钠溶液灌胃,连续干预3周。3周后,将大鼠取血处死,分离睾丸、附睾。检测精液质量,观察睾丸组织结构,免疫组化检测大鼠睾丸组织Cdyl、G9a、HDAC1蛋白表达,RT-PCR检测大鼠睾丸组织Cdyl、G9a、HDAC1 mRNA表达。结果与空白组比较,模型组精子密度、活力、活率以及Cdyl、G9a蛋白和mRNA表达降低(P0.01),HDAC1蛋白及mRNA表达升高(P0.01)。与模型组比较,强精片低、中、高剂量组精子密度、活力、活率以及Cdyl蛋白表达升高(P0.05,P0.01);强精片中、高剂量组G9a蛋白和Cdyl、G9amRNA表达升高(P0.05),HDAC1蛋白及mRNA表达降低(P0.05)。结论强精片可通过上调Cdyl、G9a表达,下调HDAC1表达,改善生精功能障碍大鼠模型的精子质量。