3′-甲氧基葛根素对大鼠脑缺血保护作用研究

目的:探讨中药葛根提取物3′-甲氧基葛根素(3′-methoxy-puerarin,3′-mo-pue)的脑保护作用,为扩大葛根的应用范围提供实验依据。方法:将动物随机分为假手术组、模型组、葛根素(puerarin,Pue)组和3′-mo-pue组,采用三氯化铁覆着大脑中动脉造成大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO);采用大鼠双侧颈总动脉结扎造成脑缺血再灌模型;观察不同剂量(0.1,0.2,0.4g.kg^-1)的3′-mo-pue对脑缺血的影响。结果:3′-mo-pue可不同程度的降低MCAO模型大鼠神经行为学评分、脑梗死范围和脑含水量;显著提高脑缺血再灌模型大鼠缺血区海马过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性和皮层CAT活性;降低脑缺血再灌模型大鼠缺血区海马过氧化脂质(LPO)和乳酸(LD)的含量。结论:3′-mo-pue具有脑保护作用,其机制可能与其抗氧化作用有关。     

电针对睾酮低下老年大鼠Keap1-Nrf2/ARE信号通路的影响

目的?观察电针对中老年男性部分雄激素缺乏综合征（PADAM）模型大鼠睾丸间质细胞（Leydig细胞）的作用，并探讨电针抗雄性生殖衰老的可能作用机制。方法?18只SD PADAM 大鼠随机分为老年组、药物组、电针组，每组6只，SD青年大鼠6只作为青年组。青年组和老年组给予0.9%氯化钠溶液[7 mg/（kg·3d）]腹部皮下注射。药物组予丙酸睾酮注射液[7 mg/（kg·3d）]腹部皮下注射。电针组取“肾俞”“关元”穴进行干预。治疗时间均为8周。观察治疗前后各组大鼠强迫游泳力竭时间，采用ELISA检测各组大鼠血清总睾酮（TT）和游离睾酮（FT）水平，采用免疫组化法检测Leydig细胞Keleh样环氧氯丙烷相关蛋白-1 （Keap1）蛋白表达，Western Blot检测大鼠睾丸Keap1、核因子E2相关因子2（Nrf2）、醌氧化还原酶1（NQO1）及超氧化物歧化酶（SOD）蛋白表达。结果?与青年组比较，老年组治疗前强迫游泳力竭时间、血清TT、FT水平及睾丸Nrf2、NQO1、SOD1蛋白表达降低（P<0.01），睾丸Keap1蛋白表达增加（P<0.01）。与老年组比较，电针组与药物组治疗后强迫游泳力竭时间、血清TT、FT及睾丸Nrf2、NQO1、SOD1蛋白表达升高（P<0.01），睾丸Keap1蛋白表达降低（P<0.01）。结论?电针可改善睾酮低下老年大鼠血清TT、FT含量，提高老年大鼠抗疲劳能力，其作用机制可能与调控Keap1-Nrf2/ARE信号通路，降低老年大鼠睾丸组织氧化应激损伤有关。     

中医体质分型及量表的应用与研究

中医体质学说自70年代确立以来,受到众多学者的广泛关注,现代医学技术的应用促进了体质学说的全面发展。笔者梳理了古人对中医体质分型的认识,介绍了现代体质分型方法,并对当前中医体质量表的应用现状进行述评,以期中医体质分型现状得到更为全面而深入地了解,促进体质分型标准更加完善,从而得到更为广泛的应用。     

HPLC法测定颈眩口服液中天麻素和芍药苷的含量

目的 利用高效液相色谱（HPLC）法,建立颈眩口服液中天麻素和芍药苷的含量测定方法。方法 采用Hypersil ODS2 C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱,流动相为乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱,天麻素与芍药苷的检测波长分别为220 nm和230 nm,柱温为室温。结果 天麻素在0.116～1.160 μg进样量范围内线性关系良好,平均加样回收率为101.11 %,RSD为2.51 %;芍药苷在0.05～1.00 μg进样量范围内线性关系良好,平均加样回收率为98.27 %,RSD为1.64 %。结论 该方法能简便、灵敏、准确的测定颈眩口服液中天麻素和芍药苷的含量,可用于该制剂的质量控制。     

三七总皂苷对慢性肾衰竭大鼠AngⅡ/AT1R/ERK1/2 信号通路的 影响

目的研究三七总皂苷（PNS）对腺嘌呤诱导的慢性肾衰竭（CRF）大鼠AngⅡ/AT1R/ERK1/2 信号通路的影 响,探讨其延缓慢性肾衰竭进展的作用机制。方法将65 只雄性SD 大鼠随机分为正常组10 只、造模组 55 只,正常组常规饲养,造模组采用250 mg·kg-1·d-1 腺嘌呤混悬液连续灌胃28 d 复制CRF 大鼠模型。将造模 成功大鼠随机分为模型组、贝那普利组（10 mg·kg-1）及PNS 低、中、高（40、80、160 mg·kg-1）剂量组,灌胃给 药,每日1 次,连续28 d。检测大鼠24 h 尿蛋白（24 h U-pro）及血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）的含量;采用 HE 染色法观察肾组织病理形态,Masson 染色法观察肾间质纤维化程度;采用ELISA 法检测血清及肾组织匀浆 中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、血清中胱抑素C（Cys-C）的含量;采用Western Blot 法分析肾组织中血管紧张素Ⅱ受 体Ⅰ型（AT1R）、细胞外调节激酶（ERK1/2）、磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）蛋白表达情况;Real-time PCR 法检测 肾组织中AngⅡ、AT1R、结缔组织生长因子（CTGF）mRNA 的表达;免疫组化法检测肾组织中AT1R 蛋白的表 达。结果与正常组比较,模型组大鼠的24 h U-pro、Scr、BUN、Cys-C 水平显著升高（P < 0.01）,血清、肾 组织匀浆中的AngⅡ含量明显增加（P < 0.01）,肾组织中的AngⅡ、AT1R、CTGF mRNA 表达均明显上调（P < 0.01）,AT1R、p-ERK1/2 蛋白表达均明显上调（P < 0.01）。与模型组比较,给药组大鼠的Scr、BUN、24 h U-pro 及Cys-C 水平均明显降低（P < 0.05,P < 0.01）,血清、肾组织中的AngⅡ含量均明显降低（P < 0.05,P < 0.01）,肾组织中的AngⅡ、AT1R、CTGF mRNA 表达均明显下调（P < 0.05,P < 0.01）,AT1R、p-ERK1/2 蛋 白表达均明显下调（P < 0.05,P < 0.01）。结论三七总皂苷可改善CRF 模型大鼠的肾功能和肾脏的病理学改 变,其机制可能与调控Ang Ⅱ/AT1R/ERK1/2 信号通路有关。     

原发性痛经患者关元穴艾灸前后的静息态功能磁共振研究

目的：采用静息态功能磁共振成像（Resting state functional magnetic resonance imaging,rsfMRI）技术采集原发性痛经患者脑血氧水平依赖（Blood oxygenation level-dependent,BOLD）信号,并采用低频振幅（Amplitude of low-frequency fluctuation,ALFF）数据分析方法研究原发性痛经患者艾灸关元穴前后的脑功能活动,从脑代谢活动强度的角度探讨艾灸关元穴可以有效治疗原发性痛经的中枢镇痛机制。方法：20例原发性痛经患者分别在艾灸关元穴前及艾灸关元穴5 min后进行rsfMRI扫描,采用ALFF算法进行数据处理,进行艾灸前后配对t检验,比较艾灸前后ALFF值改变情况。结果：关元穴艾灸后 ALFF信号显著活跃的脑区为：右侧扣带回、左侧岛叶、左侧楔前叶、右侧中央后回、左侧钩回、左侧颞上回、颞中回、左侧中央前回、左侧额中回、右侧额下回（P<0.05,校正后）;显著抑制的脑区为：左侧枕叶、右侧额上回、左侧额内侧回、左侧额中回、右侧小脑后叶山坡、右侧颞上回（P<0.05,校正后）。结论：运用rsfMRI ALFF算法可以对艾灸关元穴引起的脑活动改变情况进行研究。艾灸关元穴引起了多个与疼痛相关脑区的功能变化,为临床上艾灸关元穴可以有效治疗原发性痛经的中枢镇痛机制提供了可能的影像学依据。     

左归丸对大鼠卵巢血管生成与胎盘生长因子、肝细胞生长因子及其受体关系的影响

目的?观察左归丸对初老大鼠卵巢中胎盘生长因子（PLGF）及酪氨酸激酶受体（Flt-1）和肝细胞生长因子（HGF）及间质上皮细胞转化因子（c-Met）受体表达的影响。方法?初老大鼠40只按随机数字表法分为模型组、结合雌激素组、左归丸11、33 g/kg剂量组，每组10只，另取10只4月龄大鼠作为正常对照组。正常对照组以蒸馏水20 g/kg灌胃；结合雌激素组灌胃65 μg/kg结合雌激素混悬液；左归丸11、33 g/kg组分别灌胃左归丸浸膏11、33 g/kg，1次/天，连续20天；观察大鼠生殖器官形态学变化，计算卵巢、子宫、阴道脏器指数，采用免疫组化法及Western Blot法检测大鼠卵巢 PLGF、Flt-1、HGF、c-Met 蛋白表达水平，原位杂交技术检测PLGF、Flt-1、HGF、c-Met mRNA表达水平，ELISA 法检测雌二醇（E2）、孕激素（P）、促卵泡生成激素（FSH）水平。结果?与正常对照组比较，模型组大鼠生长卵泡数、黄体数、血管数更少，闭锁卵泡数多，卵巢、子宫、阴道指数及E2、P含量明显降低，FSH含量明显升高，大鼠卵巢PLGF、Flt-1、HGF、c-Met蛋白及mRNA水平显著降低（P<0.01)；与模型组比较，左归丸11、33 g/kg组及结合雌激素组的生长卵泡数、黄体数、血管数增多，闭锁卵泡数明显减少，卵巢指数、子宫指数、阴道指数及E2、P水平明显升高，FSH水平明显降低，PLGF、Flt-1、HGF、c-Met蛋白及mRNA水平显著升高（P<0.05，P<0.01）；与结合雌激素组比较，左归丸33 g/kg组E2、P升高（P<0.05 ），左归丸11、33 g/kg组中生长卵泡数、黄体数、血管数更少，闭锁卵泡数更多，卵巢、子宫、阴道指数，FSH水平，PLGF、Flt-1、HGF、c-Met蛋白及mRNA水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；与左归丸11 g/kg组比较，左归丸33 g/kg组生长卵泡数、黄体数、血管数增多，锁卵泡数减少，卵巢、子宫、阴道指数及E2、P水平均有所上升，FSH水平下降，PLGF、Flt-1、HGF、c-Met蛋白及mRNA水平升高（P<0.05，P<0.01）。结论?左归丸可能通过上调 PLGF、Flt-1、HGF、c-Met 蛋白及mRNA水平，促进初老大鼠卵巢血管生成，进而改善大鼠卵巢功能，且高剂量优于低剂量。     

芪精益肾汤对糖尿病肾病大鼠Nrf2/HO-1信号通路的作用及机制研究

目的?探讨芪精益肾汤（QJYSD）是否通过调节核转录因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶-1（HO-1）信号通路减轻糖尿病肾病（DN）大鼠氧化应激损伤，从而发挥保护肾功能、延缓肾纤维化进程的作用。方法?采用高脂饮食联合小剂量一次性注射链脲佐菌素的方法制备糖尿病大鼠模型。实验分为正常对照组、模型组、QJYSD低、中、高剂量组[5.76、11.52、23.04 g/（kg·d）]和缬沙坦组[30 mg/（kg·d）]，每组8只。灌胃12周后，记录各组大鼠一般情况，测空腹血糖（FBG），并收集尿液、血液以及肾组织进行24h尿总蛋白（24h UPro）、糖化血清蛋白（GSP）、血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）、组织病理学（HE染色、Masson染色）、氧化应激损伤指标[超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量]的检测；采用Western Blot法检测肾组织Nrf2、HO-1、FN等蛋白表达水平，免疫组化法检测FN蛋白沉积。结果?与正常对照组比较，模型组大鼠体重减轻，饮食量以及饮水量增多（P<0.01）；肾脏指数（RI）、24 h UPro、FBG、GSP、SCr、BUN水平升高（P<0.01）；肾组织中肾小球体积增大、系膜区增生，肾间质炎性细胞浸润，胶原容积比升高（P<0.01）；血清MDA含量显著升高，SOD活性显著降低（P<0.01）；肾组织中总Nrf2、HO-1、细胞核Nrf2、FN蛋白表达水平升高，且FN蛋白沉积显著增加（P<0.01）。与模型组比较，QJYSD各剂量组与缬沙坦组大鼠饮食量以及饮水量减少（P<0.05，P<0.01）；RI、24h UPro、FBG、GSP、SCr、BUN水平一定程度下降（P<0.05，P<0.01）；肾组织中系膜区增生程度以及炎性细胞浸润减少，胶原容积比下降（P<0.05，P<0.01）；血清MDA含量减少、SOD活性增加（P<0.05，P<0.01）；肾组织中总Nrf2、HO-1、细胞核Nrf2、FN蛋白表达水平下降（P<0.05，P<0.01），且FN蛋白沉积减少（P<0.05，P<0.01）。与缬沙坦组比较，QJYSD高剂量组DN大鼠FBG、GSP水平降低（P<0.05），对肾组织HO-1、细胞核Nrf2水平降低，FN水平上升（P<0.05）。结论?QJYSD可以通过促进DN大鼠肾组织Nrf2/HO-1信号通路活化，增强机体抗氧化应激能力，从而减轻肾损伤，改善肾组织结构及功能，延缓肾纤维化进程。