人sCD40L-Ig重组腺病毒载体的构建、表达及功能检测

目的:构建含有分泌型人胞外区CD40L融合蛋白(sCD40L-Ig)基因的重组腺病毒载体,确定其表达和功能学意义。方法:通过PCR获得人源IgGFc和sCD40L基因并予以连接,将其插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,构建重组质粒pAdTrack-sCD40L-Ig。将其与pAdEasy-1-BJ5183菌行同源重组后,用293细胞包装,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)和Western blot分析等方法鉴定重组腺病毒,并进行双向混合淋巴细胞反应(MLR)以确定其功能。结果:所构建的sCD40L-Ig基因的重组腺病毒,经酶切和PCR鉴定正确。原代腺病毒的滴度达到2.69×1011pfu/L,并有相对分子质量(Mr)为61×103的目的蛋白表达。MLR显示,重组腺病毒对淋巴细胞的增殖有抑制作用。结论:成功地构建了含有sCD40L-Ig基因的重组腺病毒,并对MLR有抑制作用。     

NF-κB哑铃形诱骗剂ODN对骨髓瘤细胞生长及IL-6表达的抑制作用

目的设计合成靶向NF-κB的哑铃形诱骗剂ODN,分析靶向NF-κB的哑铃形诱骗剂对NF-κB转录活性、多发性骨髓瘤细胞8266的生长及其分泌的IL-6的抑制效应。方法采用电泳迁移率变动分析(EMSA)体外检测诱骗剂ODN对NF-κB转录活性的抑制效应。将8266细胞随机分为传代培养的8266细胞组;诱骗剂ODN处理组及脂质体处理组。通过阳离子脂质体以2mg/L、4mg/L、8mg/L不同剂量诱骗剂ODN转染8266细胞。转染后8、12、18h,ELISA法检测8266细胞培养上清中IL-6的表达。用MTT比色检查诱骗剂ODN对IL-6刺激的8266细胞生长的影响。结果硫代磷酸的诱骗剂ODN在体外能有效地抑制NF-κB与其顺式元件的结合;2mg/L、4mg/L、8mg/L等不同浓度的脂质体-ODN复合物对8266细胞表达IL-6的抑制程度不同。脂质体-ODN复合物对8266细胞的生长及IL-6的活性均有抑制作用。结论靶向NF-κB的诱骗剂ODN在体外可抑制NF-κB的转录活性,从而抑制8266细胞的生长,降低瘤细胞中IL-6的表达。     

重组hCGPx腺病毒对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧再复氧损伤的保护作用

目的:研究重组腺病毒介导的人胞质型谷胱甘肽过氧化物酶(hCGPx)转染对人肾小管上皮细胞缺氧再复氧损伤的保护作用。方法:将含hCGPXcDNA的质粒pGEM-T-hCG-Px和重组腺病毒穿梭质粒pACCMV-pLpA重组,构建pACC-MV-hCGPx穿梭质粒后,与包装质粒pJM17共转染293细胞,构建重组腺病毒AdCMV-hCGPx。以重组腺病毒载体AdCMV-hCGPx转染体外培养的人肾小管上皮细胞株HK-2,以转染空载体的HK-2细胞为对照组,检测转染细胞中CGPx的表达水平。将HK-2细胞经缺氧再复氧损伤处理后,分别检测细胞的存活率、凋亡率及死亡率。结果:各转染组细胞中CGPx的表达率显著高于对照组(P<0.01)。经缺氧再复氧损伤处理后,AdCMV-hCGPx转染组细胞的存活率较对照组明显增强,死亡细胞明显减少,细胞凋亡明显受到抑制。结论:重组腺病毒介导的hCGPx转染人肾小管上皮细胞可保护缺氧再复氧引起的损伤。     

多因素作用对肾移植效果的影响

目的：探讨肾移植术后早期排斥反应、肾功能延迟恢复的高危因素及其机理。方法：分析167例次肾移植患者的年龄、性别、透析时间、移植史、输血次数、孕次、冷缺血时间、热缺血时间、HLA体液致敏及HLA错配数与术后早期排斥反应、肾功能延迟恢复发生的关系。结果：多因分析提示致敏与肾移植术后肾功能延迟恢复的发生相关,致敏及HLA错配数与早期排斥反应相关。结论：致敏及HLA错配影响是肾移植效果的主要危险因素。     

肾脏移植免疫抑制剂的临床应用现状

在不应用免疫抑制剂的情况下 ,移植脏器无疑要经历进行性免疫排斥反应 ,功能丧失。在过去的 40年 ,免疫抑制治疗有很大的发展 ,使实质脏器移植成为一常规临床治疗方法。肾、心、肺、肝和胰腺移植取得了良好的短期效果 ,目前多数中心移植肾 1年存活率达 80 %～ 90 % ,其他脏器的短期存活率也接近此值。短期生存率的提高主要是对急性排斥反应较好进行防治的结果。相比之下 ,移植脏器的长期存活仍是一个主要问题。晚期移植脏器的功能丧失主要是由慢性排斥所致。慢性排斥是一种有待进一步阐明的临床病理现象 ,由免疫反应介导 ,但目前免疫抑制治…     

高危尿毒症患者肾移植术后早期全血环孢素A浓度的监测？…

目的 探讨不同高危患者术后应用ＣｓＡ免疫抑制治疗的特点,摸索高危患者肾移植术后的早期临床监测与处理。方法 应用荧光偏振免疫法（ＦＰＩＡ）对３０例高危尿毒症患者肾移植术后早期的全血环孢素Ａ（ＣｓＡ）浓度进行动态监测。结果 高危尿毒症患者肾移植术后早期的全血ＣｓＡ浓度明显高于对照组,术后早期急性排斥反应的发生率低,但是容易发生ＣｓＡ的肝脏及胰腺的毒副作用。结论 早期动态监测全血ＣｓＡ浓度有助于预防和减     

护肾固精方预防大鼠同种慢性移植物肾病的研究

目的:探讨护肾固精方对慢性移植物肾病的影响.方法:以Fisher大鼠作供者,Lewis大鼠作受者进行同种肾移植.移植后治疗组大鼠隔日给予护肾固精方饲喂.移植后16周作肾功能、移植肾组织学检测,测定肾组织中转化生长因子mRNA的表达.结果:与对照组比较,移植后治疗组24h尿蛋白持续保持较低的水平(P＜0.01),血清肌酐水平较低(P＜0.01),肌酐清除率高(P＜0.01);移植肾肾小球硬化程度轻(P＜0.01),Banff评分低(P＜0.01);转化生长因子β1(TGF-β1)的mRNA表达减少(P＜0.01).结论:护肾固精方对移植肾功能有保护作用,其机制与影响TGFβ1在移植肾的表达有密切关系.     

肾移植中群体反应性抗体检测及高群体反应性抗体的临床对策

目的:研究群体反应性抗体在肾移植中的意义及对高群体反应性抗体受者的临床处理。方法:监测544例次肾移植受者的群体反应性抗体(PRA),并对PRA值≥40%的14例患者行血浆置换。结果:肾移植受者中,PRA阳性116例(21.3%),其中PRA≥40%26例;PPA阳性组排斥反应发生率(25.0%)高于PRA阴性组(4.9%),术后PRA水平升高组排斥反应发生率高于PRA无变化组,血浆置换组与未行血浆置换组排斥反应发生率无差异。结论:PRA的水平是评价受者致敏状态的一个敏感指标,对其动态监测有助于筛选合适供者和预测排斥反应的发生;血浆置换法处理高致敏状态,效果不佳。     

他克莫司对肾移植受者外周血NK和NKT细胞比例的影响及临床意义

他克莫司(Tacrolimus)是一种强效免疫抑制剂,现已广泛应用于肾脏、肝脏及心脏移植,有效减低了排异反应的发生,提高了移植受者的存活率.但是他克莫司个体药代动力学差异大,不同个体对其血药浓度的敏感性及耐受性有差异,故单纯依靠血药浓度监测不能有效反映移植受者的免疫状态.因此如何了解移植受者的免疫状态,指导免疫抑制剂的个体化应用,在免疫抑制不足及免疫过度之间寻找平衡,成为困扰移植医生的问题.NK细胞(natrural killer cell)是天然免疫系统的主要效应细胞.