经典名方化肝煎物质基准特征图谱及多指标成分含量测定研究

目的建立经典名方化肝煎物质基准的UPLC特征图谱以及HPLC多指标含量测定方法,构建其质量控制体系。方法遵古籍并结合前期考察工艺,制备不同产地的18个批次化肝煎物质基准,采用UPLC法建立物质基准特征图谱,使用《中药色谱指纹图谱相似度评价软件》(2012版)计算相似度,并结合正交偏最小二乘判别分析,挖掘影响不同产地不同批次化肝煎物质基准质量的主要成分;将其中源自处方君药、臣药和佐药的3种指标性成分橙皮苷、芍药苷、牡丹皮作为化肝煎物质基准含测指标,建立其HPLC含量测定方法,并对18个批次样品进行含量测定。结果特征图谱相似度均≥0.989。标定了33个共有峰,对8个共有峰进行了化学成分指认,分别为没食子酸(4号峰)、栀子苷(10号峰)、芍药苷(13号峰)、橙皮苷(22号峰)、香蜂草苷(27号峰)、丹皮酚(29号峰)、甜橙黄酮(30号峰)、3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮(32号峰),找到9个影响批次间稳定性的指标性成分(峰31、20、11、13、22、33、21、29、1),最后遴选出芍药苷、橙皮苷、丹皮酚作为含测指标,其在化肝煎物质基准中的质量分数为芍药苷1.28%～1.95%、橙皮苷0.91%～1.02%、丹皮酚0.48%～0.57%。结论通过UPLC特征图谱及HPLC指标性成分含量测定初步建立了经典名方化肝煎物质基准的质量控制方法,此方法快速简单可行,重复性、稳定性良好,可为后续制剂的开发和质量控制提供理论依据。     

基于组方药味古今炮制工艺的经典名方桃红四物汤质量差异性研究

目的对比研究桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,TSD)组方药味分别为生品、药典"酒炙"和尊古"酒洗"时的质量差异性,辨识差异标志物。方法使用Eclipse Plus C18色谱柱(150 mm×3.0 mm,1.8μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,进行梯度洗脱,检测波长为230 nm,柱温30℃,体积流量0.3 mL/min,进样体积10μL,建立UPLC指纹图谱。采用中药指纹图谱相似度评价系统确定共有峰,进行相似度评价,运用层次聚类分析(hierarchical cluster analysis,HCA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)和偏最小二乘-判别分析(partial least square-discriminant analysis,PLS-DA)对不同组别的TSD进行质量评价,筛选出对TSD整体质量贡献较大的成分,并进行含量测定,评价组方药味不同炮制工艺对TSD质量的影响。结果选取了20个色谱峰作为指纹图谱共有峰,生品、药典"酒炙"和尊古"酒洗"组内相似度均大于0.996,组间相似度均小于0.980。通过与对照品比对,指认出5-羟甲基糠醛(3号峰)、没食子酸(4号峰)、绿原酸(7号峰)、羟基红花黄色素A(8号峰)、芍药内酯苷(9号峰)、芍药苷(10号峰)、阿魏酸(14号峰)、苯甲酸(17号峰)共8个成分。HCA、PCA和PLS-DA可明显将生品、药典"酒炙"和尊古"酒洗"分为3类,5-羟甲基糠醛、阿魏酸、羟基红黄色素A等成分可能是影响三者质量的差异标志物。含量测定显示,羟基红花黄色素A和阿魏酸在炮制后含量下降,5-羟甲基糠醛在炮制后升高,且相对于药典"酒炙",尊古"酒洗"后羟基红花黄色素A和阿魏酸含量增加,5-羟甲基糠醛含量降低。结论 TSD组方药味生品、药典"酒炙"以及尊古"酒洗"间存在质量差异,值得深入研究;为经典名方组方药味炮制研究提供依据。     

经典名方桃红四物汤化学指纹图谱及9种成分含量测定研究

目的建立15批桃红四物汤汤剂化学指纹图谱及多指标成分含量测定方法,为桃红四物汤经典名方的质量控制及评价提供参考。方法采用Thermo Hypersil Gold C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0m L/min,柱温30℃,检测波长225nm;建立HPLC指纹图谱,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012A版)进行相似度分析,结合聚类分析评价15批样品的化学信息差异。进一步通过HPLC多成分波长切换法,测定样品中9种指标成分的含量,采用SIMCA 14.1软件进行偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA),以寻找样品间的质量差异成分。结果建立了15个批次桃红四物汤汤剂HPLC指纹图谱,相似度均0.96,并确认35个共有锋,指认出没食子酸、绿原酸、苦杏仁苷、芍药内酯苷、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、苯甲酰芍药苷、藁本内酯10个色谱峰(分别对应2、8、9、13～16、25、31、32号色谱峰)。含量测定显示,没食子酸、5-羟甲基糠醛、绿原酸、芍药内酯苷、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、洋川芎内酯Ⅰ 9种成分线性关系良好(r≥0.999 6),含量测定结果分别为187.5～344.4、6.2～154.8、413.2～459.2、507.5～923.5、873.8～1 202.0、2 122.3～2 782.9、59.2～121.3、6.4～26.9、38.9～79.6μg/g,其中以芍药苷、羟基红花黄色素A、芍药内酯苷等成分含量较高;更进一步将15批不同产地的样品分为3类。通过PLS-DA分析含量测定结果,发现芍药苷、芍药内酯苷、羟基红花黄色素A和5-羟甲基糠醛是影响不同批次桃红四物汤汤剂质量贡献较大的4种成分。结论 HPLC指纹图谱结合多指标成分含量测定方法适用于桃红四物汤复方制剂的质量控制与评价。     

基于网络药理学和分子对接探究经典名方桃红四物汤异病同治作用机制

目的以经典名方桃红四物汤养血、活血、逐瘀功效为核心,通过构建"成分-靶点-通路-疾病"作用网络探讨其临床异病同治的作用机制。方法利用生物科学与网络药理学平台、蛋白数据库和String数据库收集桃红四物汤化学成分及其相关靶点数据,建立"成分-靶点"作用网络;基于筛选得到的靶点,对桃红四物汤治疗的疾病进行关联分析,建立"靶点-疾病"网络;进而开展基因本体论(gene ontology,GO)和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析桃红四物汤治疗疾病的关键通路;同时将筛选得到的关键有效成分和核心靶点进行分子对接验证,综合探讨桃红四物汤在临床上异病同治的复杂作用网络。结果从桃红四物汤中筛选出40个活性化合物,其中32个成分涉及221个相关靶点、286种相关疾病。其中阿魏酸、山柰酚、槲皮素、丹皮酚、芍药苷、藁本内酯、咖啡酸能匹配到较多靶点。预测到桃红四物汤可治疗疾病主要包括3大类,分别为癌症相关疾病(乳腺癌、前列腺癌等)、心血管疾病(高血压、心肌梗死、心脏衰竭)、神经系统疾病;核心靶点蛋白涉及RAC-α丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶、血清白蛋白、白细胞介素17、血管内皮生长因子A、转录因子AP-1等;KEGG信号涉及促进肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤增生、免疫调节、血液循环系统调节、内分泌调节等多种生物过程的165条通路。结论构建了桃红四物汤"成分-靶点-通路-疾病"之间的关联,一定程度上揭示桃红四物汤多成分、多靶点的复杂作用机制,为经典名方桃红四物汤的临床广泛应用提供理论基础。     

四物汤中多糖水提工艺的优化研究

目的:优选四物汤中多糖的水提工艺。方法:采用正交试验设计,以加水量、煎煮时间、煎煮次数为考察因素,以紫外分光光度法测定多糖含量为评价指标,确定四物汤多糖的最佳提取工艺。结果:四物汤多糖的最佳提取工艺为A1B2C3,即加入8倍量水,回流提取1 h,提取3次。结论:优选的提取工艺稳定可靠,可用于四物汤多糖的提取。     

基于特征图谱与5种成分含量的经典名方桃红四物汤量值传递分析

目的 探索桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,TSD)药材-饮片-水煎液-基准样品的全过程质量传递规律,为其经典名方制剂质量控制研究提供基础。方法 制备15批TSD水煎液、基准样品,建立水煎液、基准样品超高效液相色谱(ultraperformanceliquidchromatography,UPLC)特征图谱,并采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法测定5种指标性成分的含量,计算各成分在药材-饮片-水煎液-基准样品传递过程中的转移率。结果 15批TSD水煎液和基准样品的特征图谱,相似度均>0.9,共归属20个共有峰,经与对照品比对指认出11个色谱峰,分别为没食子酸、地黄苷D、苦杏仁苷、绿原酸、芍药苷、羟基红花黄色素A、阿魏酸、毛蕊花糖苷、槲皮素、苯甲酰芍药苷、藁本内酯。5种成分在水煎液、基准样品中的质量分数分别为地黄苷D0.26~0.46、0.11~0.30mg/g,阿魏酸0.33~0.51、0.09~0.18mg/g,芍药苷1.07~2.43、0.48~1.49mg/g,苦杏仁苷1.66~2.31、0.60~1.58mg/g,羟基红花黄色素A0.98、0.26~0.44mg/g。药材至饮片、饮片至水煎液、水煎液至基准样品的平均转移率分别为地黄苷D101.50%、55.44%、64.11%;阿魏酸94.31%(当归药材至饮片)、93.91%(川芎药材至饮片)、37.24%、35.61%;芍药苷111.55%、72.80%、63.48%;苦杏仁苷117.34%、91.78%、64.60%;羟基红花黄色素A93.64%、60.23%、34.19%。结论 采用UPLC特征图谱结合5种成分的HPLC含量测定,分析TSD药材-饮片-水煎液-基准样品的量值传递规律,为TSD经典名方制剂开发和质量控制提供科学基础。     

美洲大蠊口腔贴膜剂的制备及其抗口腔溃疡作用考察

目的:基于美洲大蠊抗溃疡作用制备美洲大蠊口腔贴膜剂(PAOF)并考察其药效学作用。方法:以黏附时间、黏附力和溶解时间作为综合评分指标,筛选以美洲大蠊提取物冻干粉为原料的口腔贴膜剂最佳处方,并对制得的PAOF进行性能评价及载药量测定。通过20%冰乙酸灼烧建立家兔口腔溃疡模型,苏木素-伊红(HE)染色和增殖细胞核抗原(PCNA)染色后光镜下观察各组家兔口腔溃疡组织病理学改变,通过生化检测及酶联免疫吸附试验(ELISA)测定超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),白细胞介素(IL)-2,IL-6,碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,对PAOF抗口腔溃疡作用进行评价。结果:以聚乙烯醇17-88 4.0 g,羟丙基纤维素0.3 g,卡波姆934P 0.15 g为成膜材料,分别于25,20,10 m L水中溶胀,充分溶胀后混合3种基质,加入美洲大蠊提取物冻干粉1.0 g和甘油0.6 m L,制得的PAOF黏附时间(152±2)min,溶解时间(173±3)min,黏附力(184±3)N,膨胀度20%,每片载药量2.09 mg(以甘氨酸计)。药效学结果显示,与模型组相比,PAOF高剂量组和醋酸地塞米松粘贴片组口腔黏膜溃疡组织中SOD活性显著升高(P0.01),MDA含量水平显著降低(P0.01);PAOF高、中剂量组和醋酸地塞米松粘贴片组IL-2水平显著升高(P0.05),IL-6水平显著降低(P0.05,P0.01);PAOF高、中剂量组和醋酸地塞米松粘贴片组TNF-α水平显著降低(P0.05),b FGF水平显著升高(P0.05,P0.01);模型组家兔口腔黏膜破坏,出现水肿现象;给药组家兔口腔溃疡面有不同程度的组织修复,无水肿现象,提示PAOF可促进家兔口腔溃疡的愈合。结论:优选的美洲大蠊口腔贴膜剂制备工艺简单、可操作性强,且对家兔口腔溃疡具有较为显著的疗效。     

基于Box-Behnken设计-响应面法与质量综合评价优化经典名方桃红四物汤煎煮工艺

目的 遵古优化和科学评价桃红四物汤（Taohong Siwu Decoction,TSD）的煎煮工艺,为其经典名方中药复方制剂研究奠定基础。方法 以指纹图谱概貌结合多指标定量为综合评价,采用Box-Behnken设计-响应面设计对加水量、浸泡时间、煎煮时间、煎煮次数进行优化。指纹图谱研究采用SunFire-C₁₈色谱柱（150 mm×3.0 mm,3.5 μm）,流动相为乙腈-0.5%磷酸水溶液,体积流量为0.2 mL/min,柱温为25℃,检测波长为230 nm;建立HPLC指纹图谱,对色谱信息进行主成分分析,进一步建立UPLC多波长检测方法测定6个关键质控成分含量,计算各样品综合得分,通过响应面法进行工艺优化。结果 建立了29个试验号TSD UPLC指纹图谱,选择16个共有峰,指认出地黄苷D、苦杏仁苷、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、藁本内酯共6个成分。主成分分析提取出4个主成分,综合得分结果显示15号工艺为最佳工艺。含量测定显示,地黄苷D、苦杏仁苷、芍药苷、阿魏酸、藁本内酯、羟基红花黄色素A 6种成分线性关系良好,综合得分结果显示,15号工艺为最佳工艺。进一步根据回归模型拟合,得到最优工艺为加水量9.90倍、浸泡时间0.58 h、煎煮时间1.19 h、煎煮次数1.60次,最终确定TSD煎煮工艺为加10倍量水,浸泡0.5 h,煎煮2次,每次1 h。结论 指纹图谱质量概貌结合关键质控成分可作为TSD制备工艺的质量评控方法,得出的最佳煎煮工艺稳定可行,可用于经典名方TSD复方制剂进一步研究开发。     

经典名方身痛逐瘀汤物质基准UPLC指纹图谱建立及其5种成分含量测定

采用Waters Sun Fire C18色谱柱(3.0 mm× 150 mm,3.5μm),以乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量0.4 mL·min-1,采用多波长切换法,柱温35℃,对18批身痛逐瘀汤物质基准样品进样分析.建立了经典名方身痛逐瘀汤物质基准UPLC指纹图谱,共标定了16个共有峰,使用...     

基于HPLC指纹图谱和化学模式识别的经典名方桃红四物汤制备过程质量评价研究

目的基于中药复方化学成分群整体指纹信息,考察桃红四物汤(TSD)汤剂制备过程中化学成分的变化,并分析其影响质量的波动成分和主要贡献成分,为其质量评控提供参考。方法按照经典名方物质基准制备工艺,制备TSD一次煎煮(A组)、二次煎煮(B组)、冷冻干燥(C组)3个制备过程样品,建立18批药材3组样品的HPLC指纹图谱,采用中药指纹图谱相似度评价系统进行数据处理,SPSS 20.0进行系统聚类分析(HCA)和主成分分析(PCA),SIMCA 14.1软件进行偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA),分析3组样品中化学指纹信息的动态变化。结果选取17个色谱峰作为指纹图谱共有峰,3个组别各18批样品相似度分别均大于0.900;共指认出没食子酸、5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、苦杏仁苷、咖啡酸、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、洋川芎内酯A、藁本内酯共10个成分;HCA、PLS-DA将54批样品分为2类,A组样品一类,B、C组样品一类;PLS-DA分析筛选出6个差异性色谱峰;根据PCA综合模型计算,综合评分结果为B组>C组>A组,TSD煎煮2次较为合理,冷冻干燥能较好保留煎液中的成分,色谱峰16(藁本内酯)、1(没食子酸)、13、12(阿魏酸)、7(苦杏仁苷)、15(洋川芎内酯A)是影响样品质量的标志性差异物质。结论通过HPLC指纹图谱和化学模式识别够较好地辨识制备过程中影响TSD质量的标志性成分,为经典名方制备工艺评价和质量标志物辨识思路提供了参考。