连翘脂素通过调控P2X7R/NF-κB/NLRP3炎性小体信号通路缓解LPS/ATP诱导的L02细胞炎症

目的 为研究连翘脂素（Phillygenin，PHI）对脂多糖（LPS）和腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）联合诱导L02细胞中的抗炎药效和对P2X7受体（P2X7R），NOD样蛋白结构域受体3（NLRP3）和核转录因子-κB（NF-κB）表达的影响。方法 本研究采用先给予100 μg·L^-1 LPS处理24 h后，再使用5 mmoL·L^-1 ATP 5 h建立L02细胞炎症模型。给药组在给予LPS处理的同时给予不同浓度PHI（100、50、25 mg·L^-1）培养6 h，随后换液，继续用LPS处理18 h，ATP处理5 h后，采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测L02细胞中白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）、P2X7R、NLRP3、胱天蛋白酶-1前体（pro-Caspase-1）、裂解胱天蛋白酶-1（cleaved Caspase-1）、NF-κB、NF-κB抑制蛋白α（IκBα） mRNA和蛋白表达。通过分子对接实验预测P2X7R与PHI能否结合，以及DCFH-DA活性氧（ROS）荧光探针检测细胞中ROS的累积。采用小干扰核糖核酸（siRNA）沉默P2X7R，并随后通过Real-time PCR检测IL-1β、IL-18、P2X7R、NLRP3、Caspase-1、NF-κB、IκBα mRNA表达情况。结果 Real-time PCR和Western blot分析显示，与空白组比较，模型组IL-1β、IL-18的表达均有所升高（P<0.05）；与模型组比较，给药组明显下调了IL-1β、IL-18 mRNA和蛋白的表达（P<0.05）。分子对接结果显示PHI与P2X7R有较好的结合作用。Real-time PCR和Western blot分析显示，与空白组比较，模型组P2X7R的表达明显上调（P<0.05）；与模型组比较，给药组下调了P2X7R mRNA和蛋白表达（P<0.05）。ROS荧光探针分析显示，与空白组比较，ROS的含量明显升高（P<0.05）；与模型组比较，给药组明显降低了ROS的积累（P<0.05）。Real-time PCR和Western blot分析显示，与空白组比较，模型组NLRP3炎性小体，NF-κB的表达明显升高（P<0.05）；与模型组比较，给药组明显降低NLRP3、cleaved-Caspase-1和上调NF-κB、IκBα mRNA及蛋白表达（P<0.05）。Real-time PCR分析显示，与模型组比较，siRNA沉默P2X7R后，IL-1β、IL-18、P2X7R、NLRP3、Caspase-1、NF-κB、IκBα mRNA表达明显降低（P<0.05），PHI具有同样的作用，二者合用后，基因表达进一步下降。结论 P2X7R为NF-κB/NLRP3信号通路的上游，PHI可能是通过下调P2X7R从而抑制NF-κB/NLRP3信号通路的表达从而缓解LPS/ATP诱导的L02细胞炎症，提示P2X7R可能是PHI发挥抗炎作用的靶标。     

何首乌吸收动力学研究进展

何首乌作为传统常用中药,被广泛应用于临床,在疾病治疗中发挥重要作用。临床上,何首乌饮片及制剂主要以口服为主,所含化学成分被吸收进入机体并与机体相互作用是其发挥药效的前提,因此,研究何首乌的吸收机制具有重要意义。本文通过查阅文献,对何首乌主要成分的吸收动力学研究进行综述,以期为评价何首乌的生物利用度、改善剂型、提高药效提供参考。     

给药剂量对附子总生物碱在大鼠体内药代动力学特征的影响

目的:考察不同剂量附子总生物碱在大鼠体内的药动学特征,并探讨剂量与药动学的关系。方法:将大鼠随机均分为低、中、高剂量组,分别按9.6,19.2,38.4 mg·kg-1灌胃附子总生物碱,在0,5,10,20,30,40,60,120,180,300,420,540,720,1 440 min共14个时间点眼眶内眦静脉取血,采用UHPLC-Q-TOF-MS测定不同时间点血浆中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和乌头原碱的血药浓度,绘制药-时曲线,计算药动学参数。结果:与低剂量组比较,中、高剂量组上述7种生物碱类成分的药峰浓度(Cmax)和药时曲线下面积AUC0-∞升高,大部分差异有统计学意义;表观分布容积/生物利用度(Vz/F),清除率(CL)/F,半衰期(t1/2)和达峰时间(Tmax)则大部分无明显变化。结论:剂量对附子总生物碱在大鼠体内的药动学特征有显著影响,从低剂量到高剂量的范围内,附子总生物碱的体内过程基本符合线性动力学特征。     

中药口服吸收屏障研究方法

中药的传统给药途径以口服为主,药物口服后的胃肠道吸收是药物发挥疗效的前提.药物的口服吸收屏障可大概分为化学屏障、物理屏障以及生化屏障三类.采用合理的研究方法,根据药物的自身特点研究药物的吸收屏障,从而提高药物的口服生物利用度,对研究药物体内吸收、分布、代谢、排泄等过程具有重要意义.文章对口服吸收模型进行了总结,并对其在中药研究中的应用进行分析,提示研究中药的口服吸收屏障不但可以为中药药效物质基础与质量标准研究提供科学依据,并且可以科学地阐述中药复方的配伍规律,从而为中医药现代化研究提供新的思路和方法.     

连翘挥发油自微乳的制备及解热作用

目的研究连翘挥发油自微乳处方组成和比例,并考察其解热药效。方法通过溶解性实验、因素考察和伪三相图绘制,以自乳化时间、乳化效果、乳滴粒径、多分散系数、稳定性为指标确定最佳处方;建立酵母致热大鼠模型,考察其和挥发油在体内解热药效。结果连翘挥发油自微乳的处方组成为连翘挥发油-油酸乙酯-吐温20-乙醇(25∶10∶81∶9),制得外观澄清透明的淡黄色油状液体,粒径为(37.41±0.014)nm,多分散系数0.211±0.018,电位(-7.05±0.53)mV,乳化时间32 s。解热药效结果显示,连翘挥发油自微乳能够有效抑制发热模型大鼠体温上升,降低模型大鼠体温。结论连翘挥发油自微乳制备简单,增加了药物在水中溶解度,有利于胃肠道吸收,提高了挥发油解热药效,为连翘挥发油新剂型的开发与利用奠定基础。     

基于AMPK信号通路的大黄素治疗非酒精性脂肪肝病研究进展

大黄素是一种常见的中药化合物单体,具有抗炎、抑菌、抗氧化和降脂等功效。现代研究发现,大黄素可激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号分子,调节相关通路转录因子和生物功能。非酒精性脂肪肝病在我国作为一种发病率极高的慢性肝脏疾病,随着肥胖症和代谢综合征在全球的流行,非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的发生发展与代谢相关信号分子AMPK的表达息息相关。AMPK是一种糖脂代谢的关键酶,可通过调节体内的能量代谢参与到NAFLD向非酒精性脂肪性肝炎(NASH)发展的不同阶段进行治疗。近年来诸多研究认为AMPK信号分子的激活与大黄素的功能实现有关,AMPK下游信号分子影响的脂质合成、脂肪酸氧化、胰岛素敏感性和线粒体功能修复相关转录因子等生物效应间可相互作用,这些与AMPK激活有关的详细作用机制可为大黄素对NAFLD的治疗提供新思路。本文主要通过采用文献检索、综合分析的方法总结大量相关研究成果综述大黄素通过AMPK相关信号传导通路参与NAFLD各个阶段治疗机制的研究进展,为大黄素对NAFLD治疗作用及机制的进一步研究奠定基础探索方向。     

斑马鱼模型筛选何首乌肝毒性的物质基础

目的:用斑马鱼模型探索何首乌肝毒性物质基础,为何首乌肝毒性作用机制研究提供一定的理论依据。方法:将对实验前期所筛选出来的大黄素、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-葡萄糖苷、芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷(质量浓度分别为0. 000 73,0. 002 22,0. 015 05,0. 002 36,0. 198 95,0. 072 73 g·L~(-1))这6种何首乌中的化学成分,继续使用肝脏荧光转基因斑马鱼为动物模型,对受精后72 h的幼鱼连续给药3 d。分别测定给药后1,2,3 d的斑马鱼体内丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),谷胱甘肽(GSH)的活力和总胆红素(TBIL)的含量,分别对其进行切片分析,观察斑马鱼肝脏组织病理学改变。结果:大黄素、大黄酸、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-葡萄糖苷对斑马鱼体内ALT,AST,GSH的活力和TBIL的含量无明显影响,其斑马鱼肝组织显示正常;芦荟大黄素能显著降低斑马鱼体内ALT,AST,GSH的活力(P 0. 01),显著升高TBIL含量(P 0. 01);芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷能显著降低斑马鱼体内ALT,GSH的活力(P 0. 01),明显升高TBIL含量(P 0. 05,P 0. 01),对斑马鱼体内AST的活力无明显影响,同时此二者的斑马鱼肝组织均出现大片片状坏死,肝组织细胞发生明显形态改变,肝细胞排列不规则等。结论:何首乌中的芦荟大黄素和芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷可对斑马鱼肝脏产生毒性作用,提示芦荟大黄素和芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷可能是何首乌的肝毒性物质基础。     

基于毒效整合分析的附子药动学、药效学研究

中药成分复杂,大多数中药药效的发挥需要在经胃肠道吸收进入到体内与靶点相互作用后发生。而中药的品种、炮制、剂量、配伍等因素均会影响到药物的体内过程。研究中药在体内动态变化过程对于其毒效研究至关重要。课题组将药动学应用于中药减毒增效研究中,并探索了中药药动学/药效学整合分析的思路与方法。     

双黄连口服制剂中连翘有效成分的吸收调控

目的 研究双黄连口服制剂中连翘有效成分的吸收调控.方法采用HPLC法测定大鼠在体实验中连翘苷和连翘酯苷的含量,采用大鼠在体肠实验方法分别进行了整方和拆方的研究.结果连翘苷几乎无吸收.绿原酸能显著改善连翘酯苷在大鼠体内的吸收速度和程度.结论双黄连制剂中,金银花能显著改善连翘酯苷的吸收,提示中药组方的合理性.