食用黄花菜中含秋水仙碱的质证研究

目的基于高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用(HPLC-DAD-Q/TOF MS)方法,通过测试大量样本获取相关数据,分析食用黄花菜中是否含有秋水仙碱。方法将不同来源黄花菜样品分部位(根、花葶、叶、花)处理,利用HPLC-DAD-Q/TOF MS对处理样进行秋水仙碱的检测。结果 156个食用黄花菜样本中均未检出秋水仙碱,而秋水仙球样本则被检出;另外,发现黄花菜样本液相色谱图中显示与秋水仙碱对照品保留时间非常接近处有一未知峰,对该未知峰的质谱图进行分析,初步显示其为多个化合物的共流出组分,其中主要离子质荷比为m/z 455.145 5(推测分子式C_(23)H_(22)N_2O_8)。结论食用黄花菜中不含秋水仙碱,传统认为鲜食黄花菜会导致腹泻是秋水仙碱引起的结论值得商榷。     

翻转课堂结合Mini-CEX在神经内科专业学位研究生培养中的应用

目的：探讨翻转课堂联合Mini-CEX在神经内科专业学位研究生临床能力培养中的应用。方法：选取2016年7月到2021年4月在我科就读的神经内科方向住院医师规范化培训学员及神经内科临床医学专业学位硕士研究生各16名,分为对照组和实验组。对照组采用传统神经内科规培方案培养,实验组采用翻转课堂结合Mini-CEX方案培养。以一年为培训周期,在培训结束时评价学员病史采集、体格检查、临床诊断、治疗方案、医德医风、医患交流、整体评价等7种临床能力。结果：在培训结束时,实验组学员除医德医风(p＞0.05)外,在上述其余6个方面等能力均优于对照组(p＜0.05)。结论：翻转课堂联合Mini-CEX的培训方法应用于神经内科专业学位研究生培养,提高了教学质量,增强了临床综合能力,值得推广于实践。     

大麻素WIN55,212-2对双环己酮草酰二腙诱导的脱髓鞘模型髓鞘修复作用的研究

目的 探讨大麻素WIN55,212-2对双环己酮草酰二腙(cuprizone,CPZ)诱导C57BL/6小鼠脱髓鞘模型的治疗作用.方法 取6周龄C57BL/6雄性小鼠,分为正常组、第2周WIN55,212-2给药组与DMSO对照组、第4周WIN55,212-2给药组及DMSO对照组,每组10只.正常组每天喂养普通饲料,CPZ模型持续喂养含有0.25％ CPZ的混合饲料,在第2周和第4周时进行WIN55,212-2注射,DMSO对照组则在相同条件下注射10％的DMSO,继续喂养CPZ混合饲料.于第3、5周末通过体质量变化观察整体状态;旋转棒实验观察小鼠运动功能,利用LFB和MBP免疫组化技术染色观察胼胝体区域髓鞘,GFAP染色观察星形胶质细胞.结果 与DMSO对照组相比,WIN55,212-2给药组模型体质量下降趋势明显减缓(P＜0.05);旋转棒实验中,WIN55,212-2给药组小鼠运动功能仍弱于正常小鼠,但是与DMSO对照组相比,WIN55,212-2给药组运动功能明显改善(P＜0.01);LFB染色结果显示DMSO对照组髓鞘脱失明显,WIN55,212-2给药组介于正常与DMSO对照组之间,MBP染色进一步证实了这一结果;GFAP免疫组化实验结果显示DMSO对照组CPZ模型小鼠胼胝体区域GFAP阳性细胞广泛表达,而经过WIN55,212-2治疗的小鼠GFAP表达量明显低于DMSO对照组(P＜0.05).结论 大麻素WIN55,212-2可通过降低髓鞘的脱失和星形胶质细胞的活化,对脱髓鞘病变具有一定缓解的作用.     

基于UHPLC-QTOF/MS的博落回花中生物碱类化学成分研究

目的:利用高通量、高灵敏和快速的UHPLC-QTOF/MS技术开展博落回花中的微量生物碱类成分的定性研究,阐明博落回花中生物碱类化学成分的类别和种类,为博落回植物的安全性提供科学依据。方法:采用UHPLC-QTOF/MS技术,借助数据挖掘方法发现和识别出博落回花中的微量生物碱类化学成分,对其高分辨一级和二级质谱数据进行解析,并与数据库进行比对,完成对微量生物碱类化学成分的结构推测和确认。结果:从博落回花中共鉴定了22个生物碱类化合物,主要化学成分为普洛托品类生物碱(原阿片碱、别隐品碱)和四氢原小檗碱类生物碱(N-甲基刺罂粟碱、N-甲基四氢小檗碱)。结论:该研究结果为博落回植物的更全面、客观的品质评价和安全性评价提供了充分的科学依据。     

博落回和小果博落回不同部位中生物碱类成分的比较

目的:比较博落回属植物博落回和小果博落回不同部位中生物碱随生长期积累的动态量化规律,为博落回属资源品质评价和合理利用提供依据。方法:采用HPLC对不同药用部位中血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和别隐品碱的含量进行测定,并对数据进行比较分校。结果:在根、茎、叶和果实不同部位中,两种植物的果实中生物碱类化合物量均为最多;茎中积累生物碱的量最少;根中积累较多的原阿片碱;生物碱在叶中的积累具有显著的种属特异性;另外,小果博落回果实中别隐品碱的量远高于其他生物碱。结论:该研究为博落回属植物资源的综合利用提供了有力的科学依据,由于生物碱类成分在该属植物中的累积具有种属特异性,在植物资源利用方面需要综合考虑具体的药用部位及其生物量。     

少突胶质细胞前体细胞在双环己酮草酰二腙诱导的脱髓鞘模型中的变化特点

目的观察神经胶质细胞在双环己酮草酰二腙(cuprizone,CPZ)诱导的脱髓鞘模型中的变化特点,探讨其与髓鞘再生的内在联系。方法选8周龄C57BL/6雄性小鼠,分为正常组、急性脱髓鞘组及髓鞘再生组。正常组每天饲养正常鼠粮;模型组小鼠饲养含有0.2%CPZ的混合鼠粮,连续饲养6周;髓鞘再生组在连续喂养6周CPZ鼠粮后,换用正常鼠粮2周。实验过程中通过卢卡斯快蓝染色及透射电镜技术判断脑组织胼胝体区髓鞘脱失及恢复程度,通过免疫组化及免疫荧光技术检测脑内NG2,Olig2和GFAP的表达来评估少突胶质细胞前体细胞及星形胶质细胞的变化特点。结果与正常组相比,急性脱髓鞘组胼胝体髓鞘脱失明显,Olig2、GFAP表达明显升高(P<0.05),侧脑室旁外侧隔核(LSD)NG2升高水平较胼胝体区(CC)更为明显(P<0.05,P<0.01);髓鞘再生组髓鞘有所修复,Olig2、GFAP表达仍高于正常组,但较急性脱髓鞘组有一定程度降低(P<0.05)。结论髓鞘损伤期少突胶质细胞前体细胞不能有效迁移至受损部位,修复期Olig2表达降低,星形胶质细胞持续高水平表达可能是髓鞘修复障碍的影响因素。     

双环己酮草酰二腙诱导脱髓鞘模型小鼠情绪及神经递质的变化

目的 观察双环己酮草酰二腙(cuprizone,CPZ)诱导脱髓鞘模型小鼠情绪及神经递质的变化特点,探讨髓鞘脱失和再生过程中情绪变化的可能原因.方法 选36只C57BL/6雄性小鼠,分为3组,正常对照组予以正常饲料14周;慢性脱髓鞘组予以含0.2％ CPZ粉末的饲料14周;髓鞘修复组先用含0.2％ CPZ粉末的饲料12周,再换用正常饲料2周.采用LFB染色、免疫荧光及透射电镜技术观察胼胝体区髓鞘以及星形胶质细胞的变化情况;通过体质量、旷场、高架十字迷宫及悬尾实验检测小鼠行为学的变化;利用酶联免疫吸附法和高效液相色谱-电化学检测法(HPLC-ECD)测定血清肾上腺素、去甲肾上腺素、五羟色胺、多巴胺、二羟基苯乙酸和五羟基吲哚乙酸的浓度.结果 慢性脱髓鞘组和髓鞘修复组胼胝体区髓鞘明显脱失(P＜0.01),两组GFAP的表达明显升高(P＜0.01).慢性脱髓鞘组小鼠旷场实验总路程、中央路程及中央区活动时间均较其他2组明显减少(P＜0.05);在高架十字迷宫中,慢性脱髓鞘组小鼠开臂滞留时间百分比(OT％)和开臂进入次数百分比(OE％)较正常对照组减少(P＜0.05);慢性脱髓鞘组及髓鞘修复组小鼠在悬尾实验中的静止时间较正常对照组增加(P＜0.05).HPLC-ECD及ELISA测得慢性脱髓鞘组血清NE和5-HT的浓度与正常对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 CPZ诱导的脱髓鞘模型小鼠表现出焦虑、抑郁等行为变化,可能与脑组织的髓鞘脱失以及脱髓鞘环境下神经递质的含量变化有关.     

电转染技术结合初免后加强免疫策略增强结核杆菌核酸疫苗免疫原性的研究

目的研究电转染技术结合初免后加强免疫策略能否增强结核杆菌核酸疫苗的免疫原性。方法将编码结核杆菌的Ag85A和ESAT-6蛋白抗原的基因分别插入到质粒pVAX1载体中，构建成HG85和HG6两种核酸疫苗。每只BALB／c小鼠肌肉注射10μg核酸疫苗，同时于注射部位施加方型波电脉冲促进质粒DNA体内转染；进行3次初免，再用相应蛋白质抗原或卡介苗加强免疫。结果肌肉注射10μg核酸疫苗加电转染能诱导出与不用电转染接种100μg核酸疫苗相似或更强的抗体免疫应答。初免后采用相应蛋白加强后小鼠产生的免疫应答偏向于TH2型，血清特异性抗体的几何平均滴度比加强前提高5—76倍。而用卡介苗加强免疫，产生的免疫应答偏向TH1型。结论采用电转染技术结合蛋白质或卡介苗加强免疫策略，能显著增强结核杆菌核酸疫苗在动物体内的免疫原性。