联合CK5和CK20免疫染色分析鉴别膀胱癌亚型

目的:探讨联合CK5和CK20的表达与膀胱癌临床病理特征及预后的关系,从而鉴别膀胱癌亚型。方法:收集2012年1月～2018年9月于我院泌尿外科行膀胱癌根治术的患者149例,制备了包含149例膀胱癌组织及62例癌旁组织的组织芯片,采用免疫组化方法检测CK5、CK20及CD44的表达,采用χ~2检验比较各分子的表达与临床病理特征的关系,采用Spearman分析进行分子表达的相关性分析,采用Kaplan-Meier生存分析及多因素Cox回归模型进行预后分析。结果:联合CK5和CK20表达形成CK5~+CK20~+、CK5~+CK20~-、CK5~-CK20~+及CK5~-CK20~-4个亚型;①针对所有膀胱癌患者:149例膀胱癌组织中85例CK5~+(57.0%),82例CK20~+(55.0%)及96例CD44~+(64.4%);62例癌旁组织中56例CK5~+(90.3%),32例CK20~+(51.6%)及36例CD44~+(58.1%);癌与癌旁中CK5表达差异有统计学意义(P0.001),而CK20和CD44差异无统计学意义(分别为P=0.650和P=0.384);CK5与CK20的表达呈负相关(r=-0.294,P0.001),CK5与CD44的表达呈正相关(r=0.488,P0.001);Kaplan-Meier结果表明CK5~-CK20~+亚型的无进展生存期(progression-free survival,PFS)、肿瘤特异性生存期(cancer-specific survival,CSS)、总生存期(overall survival,OS)均差于其他3种亚型;多因素Cox分析结果表明病理分期、淋巴结阳性、CK5~-CK20~+亚型是影响预后的独立危险因素;②针对化疗膀胱癌患者:4个亚型与临床病理特征及预后均无统计学意义。结论:联合CK5与CK20的表达可鉴别膀胱癌亚型,其中CK5~-CK20~+亚型预后最差;亚型与化疗耐药的关系仍需进一步扩大样本进行分析。     

一侧下颌角受力对双侧关节盘及髁突软骨的影响

目的:利用三维有限元分析法,从生物力学角度探讨一侧下颌角受力瞬间双侧颞下颌关节(TMJ)关节盘及髁突软骨的相应变化及其与临床实际的关系。方法:建立下颌骨和TMJ共5个不同开口度(闭口位及1、2、3、4cm开口位)的三维有限元数字模型;于左侧下颌角下缘向上,施以与眶耳平面垂直的1000N压力。获取受力后双侧关节盘和髁突软骨产生的平均主应力的分布及其峰值大小。结果:(1)闭口位时,双侧关节盘和髁突软骨的平均主应力(EQV应力)峰值明显较小;(2)在不同开口位,关节盘EQV应力峰值多位于后带,髁突软骨则多位于前斜面;(3)关节盘EQV应力峰值始终是左侧大于右侧,而髁突软骨在闭口位及1、4cm开口位时左侧EQV应力峰值大于右侧,2、3cm开口位时则是右侧大于左侧;(4)双侧关节盘和髁突软骨的EQV应力峰值出现的部位基本对称。结论:(1)本组模型较精确地反映了实物,并且实验结果与临床实际相接近,解决了以往实验中遇到的一些问题,为TMJ的生物力学研究提供了新的途径。(2)稳定的咬合关系可以明显减小TMJ的间接损伤。(3)关节盘后带病变及髁突器质性病变可能由下颌骨一次性暴力创伤后造成的TMJ间接损伤引起;受力侧关节盘比对侧更易受损伤,而双侧髁突软骨都有受到严重损伤的可能。     

置信区间法用于线性药代动力学特征评价

目前有多种评价线性药代动力学的方法,需要对线性动力学特征评价方法标准化、规范化。置信区间法综合考虑统计学知识与临床实践经验,将变异纳入考察范围,更符合药代动力学研究的要求。本文推荐用置信区间法评价药物线性动力学特征,有助于今后线性评价的标准化。     

DNA聚合酶Y家族在跨损伤复制中的作用

普通的DNA聚合酶可以对正常的DNA完成复制,但是当DNA发生损伤,损伤位置就会成为DNA复制的阻滞点,普通的DNA聚合酶就无法完成基因组的复制。为了应对这种情况,生物体内还拥有另一类DNA聚合酶:聚合酶Y家族,又被称为跨损伤复制(TLS)聚合酶,它们的主要功能就是跨越损伤位点,完成基因组复制,解救濒死细胞。本文主要对Y家族聚合酶的结构特点、功能效应、作用机制等方面做一综述。     

慢性乙型肝炎恩替卡韦治疗过程中病毒动力学特点分析

Objective To analyze the viral dynamics and clinical significance during the antiviral treatment by a mathematical model.Methods Six chronic hepatitis B patients were evaluated with a kinetic model(Neumann model)during dose of 0.5 mg/d oral entecavir.Blood samples were drawn for HBV DNA measurement at week 0,2,4,12,24.Non-linear modeling was used to fit individual patient data.Results The median effectiveness in blocking viral production was 99.970%(n=6).The median half-life of viral turn-over was 1.6 d(n=6).The median half-life of infected hepatocytes was 21.3 d(n=5).Compared with the other patients,the c(virions are cleared at a rate)、ε(effectiveness)、δ(infected cell are lost at a rate)value of one patient(eg.6)were all lower and the half-life of virus and infected cells were higher,and eg.6 developed viral break-through after 38 weeks of follow-up.Conclusions Viral load decay showed a biphasic pattern during entecavir therapy which can be described with a mathematical model.The model relates processes of viral infection and replication as well as drug efficacy to model parameters.It indicates the prediction of bio-mathematical model during antiviral treatment.     

慢性乙型肝炎恩替卡韦治疗过程中病毒动力学特点分析

Objective To analyze the viral dynamics and clinical significance during the antiviral treatment by a mathematical model.Methods Six chronic hepatitis B patients were evaluated with a kinetic model(Neumann model)during dose of 0.5 mg/d oral entecavir.Blood samples were drawn for HBV DNA measurement at week 0,2,4,12,24.Non-linear modeling was used to fit individual patient data.Results The median effectiveness in blocking viral production was 99.970%(n=6).The median half-life of viral turn-over was 1.6 d(n=6).The median half-life of infected hepatocytes was 21.3 d(n=5).Compared with the other patients,the c(virions are cleared at a rate)、ε(effectiveness)、δ(infected cell are lost at a rate)value of one patient(eg.6)were all lower and the half-life of virus and infected cells were higher,and eg.6 developed viral break-through after 38 weeks of follow-up.Conclusions Viral load decay showed a biphasic pattern during entecavir therapy which can be described with a mathematical model.The model relates processes of viral infection and replication as well as drug efficacy to model parameters.It indicates the prediction of bio-mathematical model during antiviral treatment.     

评价HPPH对细胞色素P450酶体外代谢活性的影响

目的:评价HPPH在体外对大鼠及人肝微粒CYP450酶的6种亚型酶活性的影响,预测使用HPPH可能出现的药物相互作用。方法:将注射用HPPH与CYP450酶的6种亚型的特异性探针底物非那西汀(CYP1A2)、甲苯磺丁脲(CYP2C9)、S-美芬妥因(CYP2C19)、右美沙芬(CYP2D6)、氯唑沙宗(CYP2E1)、咪达唑仑(CYP3A4)和睾酮(CYP3A4)与大鼠及人肝微粒进行孵育反应,采用HPLC-MS/MS法测定对应的7种代谢产物(对乙酰氨基酚、羟基甲苯磺丁脲、4-羟基美芬妥因、O-去甲基右美沙芬、6-羟基氯唑沙宗、1′-羟基咪达唑仑、6β-羟基睾酮)的浓度。结果:在本实验条件下,HPPH浓度为1.00~50.00μmol·L-1时,未发现其对大鼠的CYP1A2、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4产生抑制作用。在本实验条件下,HPPH浓度为0.50~10.00μmol·L-1时,未发现其对人CYP1A2产生抑制作用;但对人CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1均存在抑制作用;对人CYP3A4,对底物咪达唑仑存在抑制作用,对底物睾酮未发现抑制作用。结论:HPPH对CYP450酶的抑制作用存在种属差异,在人体内HPPH与CYP450酶作用有待体内实验进一步证明。     

醋酸环丙孕酮／炔雌醇复方片剂在人体的药代动力学

目的建立人血浆中醋酸环丙孕酮的HPLC—ESI—MS测定方法和丹酰氯衍生化血浆中炔雌醇的HPLC—APCI—MS测定方法,测定女性志愿者口服复方醋酸环丙孕酮片1片后的药代动力学参数,并对受试制剂和参比制剂的生物等效性进行评价。方法血浆样品中的炔雌醇以乙酸乙酯提取后,与丹酰氯发生衍生化反应,进行HPLC—APCI—MS分析,流动相为10mmol·L-1乙酸铵缓冲液（1％甲酸）-甲醇（3：97）。检测离子分别为m／z530．3（炔雌醇的丹酰氯衍生物）、m／z404．3（内标,对羟基联苯的丹酰氯衍生物1。结果在10．43～625．8Pg·ml-1范同内炔雌醇的丹酰氯衍生物与内标的丹酰氯衍生物峰面积比值与浓度呈良好的线性关系,最低定量限为10．43pg·ml-1结论本实验建立的分析方法灵敏、准确、简便,且统计学结果表明两种制剂生物等效。     

着色性干皮病C组基因蛋白缺失对膀胱癌细胞自噬的影响

目的 探讨膀胱癌细胞中着色性干皮病C组基因(xeroderma pigmentosum group C,XPC)蛋白缺失对自噬的影响.方法 利用shRNA策略,建立稳定干扰XPC的膀胱癌T24细胞模型,蛋白印迹技术检测干扰XPC后自噬表征蛋白LC3Ⅱ的表达,瞬时转染GFP-LC3,荧光显微镜观察细胞荧光聚集情况,CCK-8法检测细胞的增殖状况,免疫印迹技术检测自噬及凋亡相关蛋白的表达.结果 成功建立干扰XPC的膀胱癌T24细胞模型;干扰XPC后,膀胱癌T24细胞自噬小体的形成[(1.53±0.81)％ vs(3.30 ±0.70)％,P＜0.05]明显减少,顺铂作用下膀胱癌T24细胞自噬小体的形成[(2.19±0.37)％ vs(3.20 ±0.29)％,P＜0.05]明显减少;顺铂促进XPC缺失后的膀胱癌T24细胞自噬;XPC缺失后的自噬为非保护性自噬.结论 XPC蛋白参与调控膀胱癌T24细胞的自噬.