肝癌差异表达基因EEG1的克隆和鉴定

目的:筛选和克隆肝癌和正常肝组织差异表达的基因片段,以探讨肝癌的发病机制.方法:应用mRNA差异显示技术(mRNA-DD),比较肝癌及正常肝组织基因表达的差异,对获得的差异基因片段进行克隆、测序,测序结果提交GenBank数据库中进行同源性分析,并对其中一条有明显差异的基因用半定量RT-PCR分析该基因在正常肝组织及肝癌组织中的表达情况.结果:凝胶扫描显示在500-600 bp处有一条差异片段,差异条带经酶切图谱分析证实重组质粒是目的克隆,将片段测序结果与GenBank数据库进行同源性比较发现该片段与已知基因EEG1高度同源(99%).RT-PCR结果显示在肝癌组织中EEG1 mRNA的表达水平明显低于正常肝癌组织(P=0.001).结论:EEG1基因在肝癌组织中的表达明显低于正常肝组织,提示EEG1基因的表达下调可能与肝癌的发病有关.     

7例睾丸恶性淋巴瘤临床分析

目的:探讨睾丸恶性淋巴瘤的临床、病理表现和治疗效果。方法:回顾性分析7例睾丸恶性淋巴瘤患者的临床资料。结果:无痛性睾丸肿块,病理类型均为非何杰金淋巴瘤,全部患者均行根治性睾丸切除,术后3例行化疗和放疗,4例单纯化疗,2例3年内死亡。结论:对睾丸恶性淋巴瘤患者采用积极综合治疗,可以提高生存率。     

EGCG对肝纤维化大鼠TGF-β1和CTGF表达的影响

目的:研究表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)的抗肝纤维化作用及其机制.方法:运用腹腔注射CCl4构建大鼠肝纤维化模型,观察EGCG对大鼠肝纤维化的影响.运用HE染色、Massion三色染色检测肝纤维化的变化;生化检测血清丙氨酸转移酶(ALT)及天冬氨酸转移酶(AST);同时检测肝组织的羟脯氨酸、还原型谷胱甘肽(GSH)和硫代巴比妥酸反应底物(TBARS)含量.免疫组织化学法观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;分别运用RT-PCR和Western blot法检测转化生长因子β1(TGF-β1)及结缔组织生长因子(CTGF)mRNA和蛋白质表达.结果:EGCG对CCl4诱导的大鼠肝纤维化程度具有显著的抑制作用.EGcG对肝细胞具有显著的保护作用,与纤维化模型组比较,EGCG干预组血清ALT、AST水平降低(138.4±45.8vs 234.6±63.2,96.4±20.5 vs 186.2±36.6,均P<0.05).EGCG显著抑制肝组织α-SMA的表达.EGCG通过抑制TBARS的形成和提高GSH含量,显著改善CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝脏的氧化状态.同时EGCG显著抑制肝组织TGF-β1及CTGF的mRNA和蛋白质的表达(均P<0.05).结论:EGCG能够显著抑制肝纤维化的进展,其机制与EGCG改善大鼠肝脏的氧化状态及抑制TGF-β1和CTGF的表达有关.     

降钙素基因相关肽/细胞外调节激酶信号通路对人MG-63细胞增殖的实验研究

目的 研究外源性降钙素基因相关肽(CGRP)对人MG-63细胞增殖的影响及其可能涉及的信号通路.方法 采用甲基噻唑基四唑(MTT)法和细胞计数法观察对比不同浓度外源性CGRP及其受体拮抗剂CGRP8-37与细胞外调解激酶(ERK)抑制剂PD98059对体外培养的人MG-63细胞增殖的影响.根据不同分组将体外培养的人MG-63细胞用CGRP、CGRP8-37及PD98059作用24 h后,通过免疫细胞化学方法观察细胞骨保护蛋白(OPG)、护骨素配体(RANKL)、ERK表达强度的变化.结果 不同浓度CGRP均可促进MG-63细胞的增殖,促进作用随浓度增高而增强,CGRP8-37、PD98059可减弱此作用,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).CGRP呈剂量依赖性的上调成骨细胞OPG和ERK的表达,同时下调RANKL的表达,CGRP-37和PD98059可减弱此作用,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 CGRP可通过ERK信号通路改变OPG/RANKL的比值来调控成骨细胞增殖.

Abstract：

Objective To explore the effect of calcitonin gene-related peptide (CGRP) on proliferation and differentiation of MG-63 cells through extracellular signal-regulated kinase (ERK) pathway in vitro. Methods To study the effects of ERK inhibitor PD98059 and CGRP inhibitor CGRP8-37, 2 groups of MG-63 cells were treated with PD98059 and CGRP8-37 for one hour prior to serum treatment. The other 4 groups were cultured with serum of different doses (high, middle, low and blank). Proliferation and apoptosis of MG-63 cells were observed by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) method and cell-counting.Expressions of osteoprotegerin (OPG), receptor activator of nuclear factor kappaβ ligand (RANKL) and ERK were observed through immunocytochemical and image analysis. Results MTT showed that CGRP promoted proliferation of MG-63 cells and expressions of OPG and ERK but not expression of RANKL The effect was dose-dependent, and significantly inhibited by either CGRP 8-37 or PD98059 (P <0.05) . Conclusion CGRP can stimulate proliferation of MG-63 cells via CGRP receptor and ERK pathway to regulate the ratio of OPG/RANKL.     

皂角刺中黄酮类成分及其抗肿瘤活性研究

目的研究皂角刺Gleditsiae Spina中黄酮类化学成分及其抗肿瘤活性。方法采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱及半制备HPLC等方法对皂角刺中黄酮类化学成分进行分离纯化,并根据理化性质和波谱学数据分析鉴定化合物结构;采用SRB法测定化合物7~16对人乳腺癌细胞MCF-7的细胞毒活性。结果从皂角刺醋酸乙酯部位中分离得到16个黄酮类化合物,分别鉴定为tricin(1)、甘草素(2)、7,4′-二羟基-5,3′-二甲氧基黄酮醇(3)、鹰嘴豆醇(4)、7,3′,5′-三羟基二氢黄酮(5)、7,4′-二羟基黄酮醇(6)、双氢山柰素(7)、紫铆查耳酮(8)、(2S)-5,7,3′,5′-四羟基二氢黄酮(9)、7,3′,5′-三羟基-5-甲氧基黄酮醇(10)、槲皮素(11)、黄颜木素(12)、fisetin(13)、leucorobinetinidin(14)、thevetiaflavon(15)、异牡荆素(16);其中化合物8对MCF-7细胞的IC50值为28.53μmol/L。结论化合物1~6、8~10、14、15为首次从该属植物中分离得到,化合物8对MCF-7细胞具有明显细胞毒活性。     

基于公共数据库分析CDC20在膀胱癌中的表达及预后意义

目的:基于Oncomine、Gene expression omnibus (GEO)、String和The Human Protein Atlas等多个公共数据库,探讨细胞分裂周期蛋白20(CDC20)的表达与膀胱癌患者临床病理特征和预后的关系;进一步预测CDC20影响膀胱癌发生、发展的可能通路.方法:利用Oncomine数据库对CDC20差异表达分析,分析GEO数据库中膀胱癌基因表达谱资料及其对应的临床信息,探究其与CDC20表达水平的相关性.采用基因集富集分析(GSEA)探究CDC20调控膀胱癌细胞的生物学通路.通过String数据库建立CDC20共表达网络,并利用HPA数据库观察CDC20在膀胱癌中的表达水平.结果:CDC20在膀胱癌组织中的表达高于癌旁组织;CDC20表达水平与膀胱癌患者的性别、年龄、疾病分级和进展等相关(P＜0.05);CDC20诊断膀胱癌的ROC曲线下面积为0.796,生存分析显示CDC20高表达组患者的总生存期(Log-rank=10.362,P＜0.05)和肿瘤特异性生存期(Log-rank=11.826,P＜ 0.05)明显差于低表达组;GSEA分析表明CDC20高表达样本富集在与精子发生、E2F信号通路、G2M检查点等相关生物学通路;HPA数据库显示,膀胱癌组织中CDC20显著高表达.结论:CDC20与膀胱癌临床病理特征和预后有密切相关性,可能为膀胱癌诊断和治疗提供新思路.     

AccQ法测定功能性饮料中游离氨基酸类营养强化剂

目的:建立同时测定功能性饮料中牛磺酸和赖氨酸的定量测定方法.方法:采用改进的AccQ法定量.结果:牛磺酸和赖氨酸方法最低检出限分别为0.05μmol/ml和0.03 μmol/ml,其在0.10~2.50μmol/ml范围内呈线性关系,相关系数均大于0.9996,RSD均小于5%,回收率为94.1%~102.6%之间.结论:本法灵敏度高,操作简单,稳定性和重复性好,作为功能性饮料中牛磺酸和赖氨酸的同时定量方法切实可行.     

睾丸扭转26例临床分析

目的:探讨睾丸扭转的诊断与治疗方法,提高睾丸扭转的治疗水平。方法:对26例睾丸扭转的临床资料进行总结,26例平均年龄21岁,左侧19例占73%,发病至确诊时间为1h～15d,10h以上者占94%。结果:26例术前彩色多普勒血流动态显象(CDFI)应视为诊断疾病的首选检查方法。经手术探查,9例行手术复位,固定,睾丸获救。14例因睾丸坏死予以切除。结论:Doppler超声检查可灵敏检测出血流,是一种快速、简便、无损害和可重复的检查方法。睾丸扭转一经诊断即应及时手术探查,将发病时间与术中观察睾丸质地及色泽结合考虑睾丸的取舍、复位或切除坏死睾丸及预防性固定。