HPLC-MS/MS法测定犬体内盐酸苯环壬酯的血药浓度及其药动学研究

目的:测定犬体内盐酸苯环壬酯的血药浓度,计算药动学参数。方法:取Beagle犬6只,分别ig盐酸苯环壬酯片2 mg和4mg,于给药前5 min和给药后0.17、0.25、0.5、0.75、1.0、1.25、1.5、2、3、4、6、8、10、12、14、16、18、24、36 h时各取血2 ml,采用高效液相色谱-质谱联用法,以盐酸戊乙奎醚为内标,测定盐酸苯环壬酯的血药浓度;2周后交叉给药,同法测定。利用DAS2.0软件计算药动学参数。结果:盐酸苯环壬酯检测质量浓度的线性范围为0.1~15 ng/ml(r=0.999 6),定量限为0.1 ng/ml,方法回收率为97.30%~103.20%,提取回收率为52.30%~60.11%,RSD均小于11%(n=5);低、高剂量的药动学参数t1/2α分别为(0.678±0.525)、(0.405±0.465)h,tmax分别为(1.042±0.401)、(0.900±0.418)h,cmax分别为(14.063±6.29)、(31.580±9.673)mg/L,AUC0-36 h分别为(48.186±14.776)、(79.269±34.649)mg·h/L。结论:本法操作简单、灵敏度高、专属性强,可用于盐酸苯环壬酯在犬体内的药动学研究。     

附子炮制品水煎液对比格犬心脏急性毒性研究

目的:比较附子不同炮制品(刨附片、炮天雄、黑顺片)对比格犬的心脏急性毒性的影响。方法:比格犬16只,随机分为空白对照组、刨附片组、炮天雄组、黑顺片组,按照4g生药/kg灌胃比格犬浓缩液,检测灌胃前和灌胃后1h,1d、3d、7d和14d后比格犬体重、体温变化和心电图心率变化,并测定血液中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)的含量。结果:给药后1h内黑顺片组犬出现呕吐,其余组未观察到症状;给药后14d内比格犬体重、体温正常,给药组乳酸脱氢酶和肌酸激酶同工酶含量,心电图心率与空白组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:刨附片,炮天雄,黑顺片水煎液按照4g生药/kg给犬灌胃,没有明显心脏毒性。     

比格犬慢性冬眠心肌模型的制备

目的制备可供实验使用的比格犬慢性冬眠心肌模型。方法选取16只健康成年比格犬,分为A组(冬眠心肌组,8只)和B组(假手术组,8只)。A组采用开胸丝线结扎法造成左前降支狭窄(75%),术后每日保持室外活动4 h,靶血管供血区域慢性缺血,制备慢性冬眠心肌模型。B组将丝线穿过前降支下方,但不结扎,其余同A组。两组均于术后3个月终止实验。采用超声心动图多巴酚丁胺负荷试验观察A组左心室壁运动,采用超声心动图观测两组收缩期室壁增厚率(WT%)、左心射血分数(LVEF)等指标。结果 A组左心室壁运动异常,WT%、LVEF减低。结论开胸丝线结扎,术后辅以规律室外运动的方法制备犬冬眠心肌模型,模型制备方法简单,成功率高,对实验人员技术要求低,实验安全无射线,是一种简单可行的冬眠心肌模型的制备方法。     

犬咬伤后的处理与临床护理研究

目的 探究犬咬伤后的处理与临床护理。方法 选取本院2017年2月—2018年10月收治的犬咬伤患者98例,其中49例接受常规处理,为对照组;另外49例在常规处理的基础上,给予临床护理干预,为观察组。统计2组临床效果、住院时间、护理满意度以及生活质量。结果 观察组住院时间少于对照组,其临床有效率、护理满意率和生活质量均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 对犬咬伤患者给予常规处理措施后,针对其症状和病情发展,开展相应的临床护理措施,能够有效减少住院时间,提高临床效果、护理满意度和生活质量,在临床上值得进一步推广。     

槲皮素通过影响吲哚胺-2,3-双加氧酶活性抑制HeLa细胞增殖的研究

目的研究槲皮素抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖的机制。方法采用CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期的变化;运用紫外可见分光光度计测定OD₄₈₀值,反映色氨酸代谢及犬尿氨酸的生成情况;qPCR法检测IDO1的mRNA表达;表达、纯化IDO1蛋白并进行体外酶活性反应,用高效液相色谱法检测色氨酸和犬尿氨酸的含量变化。结果槲皮素抑制HeLa细胞的增殖,引起G0/G1细胞周期阻滞;槲皮素抑制色氨酸的代谢;槲皮素能够明显抑制IDO1的体外酶催化活性,但不影响IDO1的表达;外源性添加色氨酸的代谢产物犬尿氨酸可以逆转槲皮素引起的细胞增殖抑制。结论槲皮素可能通过抑制IDO1的酶催化活性,影响细胞色氨酸的代谢,这可能是槲皮素发挥其抗宫颈癌HeLa细胞增殖作用的机制之一。     

LC-MS/MS法测定小鼠肿瘤中犬尿氨酸和色氨酸的含量

目的 建立同时测定ICR小鼠Lewis皮下移植肿瘤组织中犬尿氨酸和色氨酸的检测方法。方法 以稳定同位素标记的氨基酸为内标,肿瘤组织匀浆后再以甲醇蛋白沉淀后取上清液进行液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）分析,色谱柱为C₁₈分析柱(2.1 mm×100 mm,3.5 µm),流动相为甲醇-水(均含0.1%甲酸)。正离子模式,采用多反应监测(MRM)进行测定。结果 浓度范围在100~25 000 nmol·L^-1内线性关系良好,精密度、准确性、特异性和稳定性,结果均符合接受标准。结论 该法可准确测定小鼠肿瘤组织中犬尿氨酸和色氨酸的含量。     

血管内皮细胞生长因子、胰岛素样生长因子-1在下颌骨牵张成骨与骨缺损中的表达和意义

目的研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)和胰岛素样生长因子(IGF)-1在牵张成骨和骨缺损修复中的表达和意义。方法28只犬随机分为牵引组和直接延长组各12只及正常对照组4只,在牵张第6天,固定2周、固定8周时两组分别处死4只动物,取牵张区新骨组织用免疫组化染色方法观察比较VEGF、IGF-1的表达。结果下颌骨牵张组和直接延长组VEGF、IGF-1均呈高水平表达,牵张6 d和牵张2周时,牵张组VEGF的表达较直接延长组增高(P<0.05),而IGF-1的表达则在牵张固定2周时牵张组较直接延长组增高(P<0.05),两者随着固定时间的延长,表达逐渐下降。结论VEGF、IGF-1可能共同参与促进下颌骨牵张成骨新骨的形成。