中药混乱品种鉴别研究——7. 蕲蛇及其混淆品鉴别之二

作者前已报道蕲蛇及其伪品滑鼠蛇的鉴别,又据报道有些省发现蕲蛇商品药材中混有烙铁头、山烙铁头两种蛇的干燥体。作者对这两种混淆品与蕲蛇在体表花纹、鳞片以及骨骼的形态与组织特征等方面进行了鉴别研究。     

江浙蝮蛇毒镇痛组分的中枢作用机制研究

 目的　探讨江浙蝮蛇毒镇痛C4组分的可能作用途径。方法　通过C4组分与阿托品、利血平、纳络酮药物的相互作用 ,探索其与乙酰胆碱受体、囊泡递质、阿片受体间可能的作用 ;通过脊髓化鼠实验、侧脑室给药和足跖定压实验揭示其中枢性作用 ;通过不同脑区的组织匀浆测定神经肽含量 ,考察C4组分对不同中枢部位的作用大小。结果C4组分不通过乙酰胆碱受体作用 ,而与阿片受体相关 ,它通过中枢起效 ,主要作用部位集中在丘脑、尾状核和红核等 ,对亮氨酸脑啡肽的含量有刺激增高作用。结论 C4组分与中枢亮氨酸脑啡肽关系密切。     

蕲蛇药材及其市售混淆品的Cyt b基因序列与分析

目的分析蕲蛇药材正品及其市场收集样品的Cyt b基因序列,为蕲蛇药材分子鉴别提供依据。方法利用Cyt b基因,对蕲蛇药材及其市场收集样品进行了序列测定和分析。结果蕲蛇药材存在着混杂现象;蕲蛇药材正品与其市售混淆品的Cyt b基因序列有着显著差异,该序列在蕲蛇种内差异率为0%~0.91%,与混淆品间的差异率为18.57%~23.78%。结论Cyt b基因序列是一种鉴别蕲蛇药材与其混淆品较好的分子遗传标记。     

尖吻蝮蛇毒中一种新类凝血酶的分离纯化

用阴离子交换色谱和凝胶过滤色谱技术,从尖吻蝮蛇毒中纯化得到一个具有凝血活性的组分.经Superdex 75 HR10/30预装柱检测,纯度达99.91%.SDS-PAGE显示为单一条带,还原、非还原条件下分子量分别为59.25k、52.58k.该组分的凝血酶比活为41.5u/mg,精氨酸酯酶比活为14.29u/mg,但不激活血浆凝血因子ⅩⅢ.EDTA不能抑制其凝血活性,而苯甲磺酰氟则产生不可逆抑制作用.结果表明该酶是一种新尖吻蝮蛇毒类凝血酶.     

持续封闭负压引流结合三棱针多点打孔对蝮蛇咬伤的治疗效果观察

目的：观察腹蛇咬伤后咬伤部位早期持续封闭负压引流（VSD）结合三棱针打孔法治疗的效果.方法：根据患者中毒时间、病情严重程度采用配伍设计,选取2012年7-8月份我院接诊手部腹蛇咬伤肿胀患者40例,随机分为A组（切开引流组,10例,在咬伤部位行＂＋＂字形切开至皮下层）、B组（切开引流＋VSD组,10例,伤口＂＋＂字形切开,然后行持续VSD）、C组（单纯三棱针打孔组,10例,在咬伤伤口周围用三棱针多点打孔20～30个）和D组（三棱针打孔＋VSD组,10例,在咬伤伤口周围用三棱针多点打孔20～30个,然后行持续VSD）.入院后同时给予抗腹蛇毒血清、抗感染及中医中药等治疗.观察患者患肢肿胀消退时间、伤口部位感染、脓肿、坏死发生率及住院时间.结果：①各组间患肢肿胀消退时间差异显著,D组明显低于A、B、C组[（2.1±1.5）d比（5.0±2.7）d,（3.4±1.7）d,（3.1±3.0）d;P〈0.05];②B、D组无一例出现伤口部位感染、脓肿形成及坏死,与A、C组（20%和40%）比较差异显著（P〈0.05）.③各组间伤口愈合时间及住院时间差异显著,D组均明显低于A、B、C组[（3.5±1.5）d比（7.5±2.5）d,（5.3±1.3）d,（4.7±1.3）d; P〈0.05].结论：腹蛇咬伤后咬伤部位早期三棱针打孔法结合持续VSD可显著缩短患者患肢肿胀消退时间及住院时间.     

蕲蛇毒检验肝硬化凝血功能的评价

中国蕲蛇毒有类凝血酶功能,可用于检查异常纤维蛋白原。本文报告了68例肝硬化的蕲蛇毒时间,其异常率为91.2％,远较凝血酶时间的异常率为高。提示蕲蛇毒时间为一种较好的检查肝硬化的新方法。     

长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的分离纯化方法研究

目的:研究长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的简单分离纯化方法。方法:采用DEAE-Sephadex A-25及Sephadex G-25层析的方法,比较二者对长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶简单分离纯化的效果。结果:从长白山白眉蝮蛇蛇毒中分离出类凝血酶,SDS-PAGE电泳显示为一条带,分子量大约为35.5kDa,达到电泳纯。理化性质研究表明,此类凝血酶具有体外凝血活性,体外凝血酶比活力为12.57IU.mg-1,用N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐测得该酶的精氨酸酯酶比活力为137.65IU.mg-1。用蛋白酶抑制剂和乙二胺四乙酸对该酶进行抑制实验,结果表明该酶属于丝氨酸蛋白酶,而不是金属蛋白酶。结论:本方法可用于长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的分离纯化。     

Hemorrhagic activity and mechanism of FⅡa′a fibrinolytic enzyme from Agkistrodon acutus venom

AIM: To study the local hemorrhagic activity of a fibrinolytic enzyme (FⅡa) from Agkistrodon acutus venom and its mechanism. METHODS: The local hemorrhagic activity was determined by subcutaneous injection on the back of mouse. The effects of FⅡa on factor X, prothrombin, gelatin, and collagen were visualized by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Platelet aggregation assays were performed in rat platelet-rich plasma (PRP). Human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) were cultured and passaged in complete M 199 medium. Cell viability and nuclear morphology change were determined by fluorescein diacetate (FDA) staining and Hoechst 33258 staining, respectively. RESULTS: The minimum hemorrhagic dose (MHD) of FⅡa was 89 μg.In vitro, FⅡa (0.25 g/L) degraded factor X, prothrombin, collagen, and gelatin, and dose-dependently (0.25, 0.50,0.75, and 1.00 g/L) inhibited the platelet aggregation induced by ADP in rat PRP. When HUVEC in culture treated with FⅡa, HUVEC showed detachment in a dose-dependent manner, but no apoptosis sign was observed.CONCLUSION: FⅡa had local hemorrhagic activity, and the mechanism was related to the degradation of factor X,prothrombin, gelatin, and collagen, the inhibition of ADP-induced platelet aggregation, and inducement of HUVEC detachment.     

蝮蛇毒蛋白C激活物对败血症大鼠心脏血流动力学的作用研究

目的:研究蝮蛇毒蛋白C激活物(PCA)组分对败血症大鼠心脏血流动力学的影响。方法:取SD雄性大鼠24只随机分成对照组、PCA组、LPS组和LPS+PCA组四组,对照组尾静脉注射生理盐水,PCA组尾静脉注射蝮蛇毒蛋白C激活物,LPS组腹腔注射LPS(10 mg/kg,4 h)的方法建立败血症休克的实验动物模型,在建立败血症的实验动物模型的基础上,尾静脉注射PCA(0.4 mg/kg)为LPS+PCA组,每只大鼠均于药后30 min时运用Medlab生物信号采集处理系统记录平均动脉压(MAP)和左心室功能指标,并测定心肌中乳酸脱氢酶(LDH)活性、诱导性一氧化氮合酶(i NOS)活性及心肌病理切片。结果:PCA能明显减轻LPS诱导的心功能受损,并抑制心肌LDH的释放和i NOS活性的升高(P<0.05)。结论:PCA对败血症大鼠心脏血流动力学有明显的改善作用,其机制可能与通过保护血管内皮功能,改善微循环,稳定心肌酶活性和膜相结构等途径有关。