人端粒酶RNA的cDNA探针制备及其对胃粘膜细胞端粒酶RNA表达的检测

目的 建立人端粒酶RNA表达的检测方法。方法 制备人端粒酶RNA，(human telomeraseRNA，hTR)的cDNA探针，分别应用RNA斑点杂交与端粒重复序列扩增法(TRAP)分析检测不同胃粘膜的端粒酶RNA的表达与端粒酶活性。结果 人端粒酶RNA的cDNA探针制备成功。18例活检胃癌组织及45例手术胃癌组织RNA斑点杂交检测的阳性率均为l00％，相应TRAP分析的阳性率分别为88．89％、86．67％，低于RNA斑点杂交(P＜0．05)。同时RNA斑点杂交结果提示在非癌胃组织中随着肠化程度增高人端粒酶RNA表达也增强。结论 RNA斑点杂交检测人端粒酶RNA，具有高度的敏感性和特异性，弥补了TRAP分析敏感性不足的缺点。     

地高辛标记核酸探针技术在家兔视网膜C－sis原癌基因检测中的应用

用ＡＧＰＣ法抽提幼年家兔视网膜总ＲＮＡ，并应用了地高辛标记核酸探针的方法。经斑点杂交显示幼年家兔视网膜出现Ｃ—ｓｉｓ原癌基因表达。对实验方法以及Ｃ－ｓｉｓ原癌基因表达的意义进行了探讨。认为此方法快速、灵敏，检测Ｃ－ｓｉｓ原癌基因表达对深入研究视网膜生长发育及肿瘤等病变有一定意义。     

地高辛标记核酸探针技术在家兔视网膜C—sis原癌基因检测中的应用

用ＡＧＰＣ法抽提幼年家兔视网膜总ＲＮＡ，并应用了地高辛标记核酸探针的方法，经斑点杂交显示幼年家兔视网膜出现Ｃ－ｓｉｓ原癌基因表达，对实验方法以及Ｃ－ｓｉｓ原癌基因表达的意义进行了探讨。认为此方法快速、灵敏，检测Ｃ－ｓｉｓ原癌基因表达对深入研究视网膜生长发育及肿瘤等病变有一定意义。     

肿瘤血管抑制肽alphastatin重组腺伴随病毒的制备

目的构建并产生肿瘤血管抑制肽alphastatin(Al)重组腺伴随病毒(rAAV)载体。方法将目的基因alphastatin插入载体质粒pSSHG-巨细胞病毒(CMV)的EcoRI和BamHI位点,构建重组质粒pSSHG-CMV/NT4-Al。用腺病毒辅助质粒pFG140代替野生型腺病毒,包装质粒pAAV/Ad及已构建的重组腺伴随病毒载体质粒,使用三质粒共转染法转染293细胞,包装得到腺伴随病毒(AAV)-Al。采用氯仿抽提、聚乙二醇沉淀回收纯化,斑点杂交方法测定重组病毒滴度。结果重组病毒rAAV-Al滴度约为2×1012颗粒/ml。结论成功制备了重组病毒rAAV-Al,提供了一种生产足量安全的rAAV-Al简单易行的方法,为肿瘤的基因治疗实验奠定了基础。     

地高辛标记人乳头状瘤病毒DNA探针的制备及其应用

本文将含ＨＰＶ重组质粒的大肠杆菌活化，扩增，提取，酶切回收，获得纯化的７．９ｋｂＨＰＶ ＤＮＡ片段，通过随机引物标记法制成Ｄｉｇ－ＨＰＶＤＮＡ探针。用此探针进行斑点杂交，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转印杂交检测女性生殖器活检组织标本中的ＨＰＶＤＮＡ，并检测其敏感生，特异性及重复性。１３３例活检组织标本中，经病理切诊断为尖锐湿疣的标本，其ＨＰＶ６ｂ和ＨＰＶ１１检出率为８０．６５％，非尖锐湿疣为６．９３％。试验证     

脑红蛋白及其在神经疾病中的作用

脑红蛋白（Ngb）是近期发现的一种携氧球蛋白，是继血红蛋白（Hb）和肌红蛋白（Mb）之后的第三种携氧球蛋白，主要存在于人和脊椎动物脑内。斑点杂交法研究证实Ngbm RNA和Ngb在脑内高表达，但在不同的脑区分布不同，并且在不同部位的表达程度与该区域对氧的敏感性呈负相关。Ngb的发现为研究神经保护提供了新的思路。现对近年来Ngb研究的最新进展作一简要介绍，并探讨其在神经疾病发病机制中可能的作用。     

荧光定量多聚酶链反应检测HBV-DNA

目的　探讨荧光定量多聚酶链反应 (FluorescencequantitativePCR ,FQ PCR)检测HBV DNA的可行性及优缺点。方法　采用FQ PCR、斑点杂交分别检测由ELISA定性的 2 0 3份血清样品 (大三阳、小三阳、乙肝疫苗免疫者、健康人 )。结果　FQ PCR和斑点杂交阳性检出率分别是 96 4 9%、2 8 2 4 % (大三阳 ) ,85 96 %、5 88% (小三阳 ) ,P <0 0 5 ;斑点杂交阴性血清FQ PCR定量高达4 7× 10 5COPY/ml。结论　FQ PCR检测HBV DNA灵敏、可靠 ,优于斑点杂交法     

光生物素DNA探针的制备及其检测恶性疟原虫DNA的研究

本研究使用光生物素(PHOTOPROBE~(TM) Biotin)标记恶性疟原虫(P.f.)全基因组DNA,含P.f.cDNA片段的重组质粒DNA(C7)及克隆的P.f.cDNA片段(P9-25)等作为探针,并以斑点杂交试验检测靶DNA。实验结果显示,光生物素标记法简单、快速和安全;标记的探针活性较高,于-20℃贮存10个月无明显降低。用生物素化的P.f.全基因组DNA及C7探针分别可检出低至125pg和250pg的纯化的P.f.DNA。