乳腺癌细胞中PELP1基因表达与启动子区CpG岛甲基化相关性

目的建立针对PELP1基因启动子区CpG岛的甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,MSP)检测方法,分析乳腺癌细胞中PELP1基因表达与启动区CpG岛甲基化的相关性。方法设计针对PELP1基因启动子区的MSP引物组,以甲基化和非甲基化DNA为模板验证MSP引物的特异性,建立针对PELP1基因启动子区的MSP检测方法。以DNA甲基转移酶抑制剂5'-氮杂-脱氧胞苷磷酸(5'-Aza-d C)分别处理MCF-7乳腺癌细胞、MCF-10正常乳腺导管上皮细胞,采用MSP检测PELP1基因启动子区甲基化状态变化,采用Western blot检测蛋白表达。结果针对PELP1基因启动子区设计的MSP引物组特异性良好,甲基化特异性引物仅在甲基化DNA模板获得阳性扩增条带,非甲基化引物仅在非甲基化DNA模板获得阳性条带。MCF-7乳腺癌细胞中PELP1基因启动子区呈非甲基化状态,MCF-10正常乳腺导管上皮细胞中PELP1基因启动子区呈甲基化状态,MCF-10细胞中PELP1蛋白表达水平为MCF-7细胞的1/16(P0.05)。采用5'-Aza-dC去除MCF-10细胞PELP1基因启动子区甲基化后,PELP1蛋白表达水平上升了9.7倍(P0.05)。结论所建立的PELP1基因启动子区MSP检测方法特异性良好,去甲基化可能是导致乳腺癌细胞中PELP1基因过表达的重要机制。     

rhAng-1通过PKCα/MLC通路影响局灶性脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性

目的研究重组人血管生成素1(rhAng-1)对局灶性脑缺血再灌注大鼠血脑屏障内皮细胞骨架的影响。方法大鼠随机分8组:(1)假手术组;(2)缺血组;(3-5)生理盐水+缺血再灌注12h/48h/7d组;(6-8)Ang-1+缺血再灌注12h/48h/7d组。用伊文思兰渗透性实验检测血脑屏障通透性;Westernblot法检测微血管内皮细胞PKCα和p-MLC的表达。结果 Ang-1可明显降低局灶性脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性,可使脑微血管内皮细胞PKCα和p-MLC表达水平减少。结论 Ang-1降低血脑屏障通透性与降低PKCα/MLC通路表达相关。     

单硝酸异山梨酯对小鼠损伤血管修复的影响

目的研究单硝酸异山梨酯对小鼠损伤血管修复的影响。方法采用电刺激小鼠颈总动脉制备血管损伤模型,再应用伊文思蓝染色研究损伤血管内皮修复过程。通过测定血管收缩、内皮依赖性舒张和非内皮依赖性舒张来评估NO对损伤血管功能恢复的影响。结果经单硝酸异山梨酯预处理一周（7 d）和一个月（30 d）的损伤血管,跟生理盐水对照组相比,在内皮修复过程中没有显著性差异,同时血管平滑肌细胞没有显著性改变。经过单硝酸异山梨酯预处理的小鼠损伤血管的功能也没有改善。结论血管平滑肌的修复并不是再生,平滑肌的修复主要靠已有平滑肌细胞的迁移,短期应用单硝酸异山梨酯可一定程度上抑制损伤后血管内膜增厚和血管重构。     

抗心律失常药物对2-APB诱发大鼠心房异位活动的影响

目的 研究抗心律失常药物对2-APB诱发的大鼠心房异位活动的抑制作用。方法 通过连接多通道分析和获取数据的等长张力传感器测量2-APB诱发的异位活动。结果 2-APB剂量依赖性增加左心房的异位活动,浓度分别为 1、5、10、20、50 μmol·L-1。抗心律失常药物,奎尼丁(10 μmol·L-1),利多卡因(10 μmol·L-1),维拉帕米(5 μmol·L-1)抑制2-APB诱发的异位活动。2-APB诱发的异位活动能被无钙液和Na⁺/Ca²⁺交换抑制剂所阻断,如3′,4′-dichlorobenzamil hydrochloride (DHC)和Ni²⁺,而不能被非选择性阳离子通道阻断剂 Gd³⁺所阻断。结论 2-APB诱发的心房异位活动能被经典抗心律失常药物所抑制,如奎尼丁,利多卡因,维拉帕米和钠钙交换抑制剂。2-APB可用于筛选那些能够非选择性抑制钠通道,钙通道和钠钙交换体的抗心律失常药物。     

Lin28B/let-7d环路调控成纤维细胞功能参与肺纤维化发生

目的研究Lin28B/let-7d环路诱导肺成纤维细胞增殖、分化的作用及分子机制,为临床肺纤维化的治疗提供新的策略。方法气管注射博来霉素(bleomycin,BLM)造成小鼠肺纤维化模型;血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)纤维性变;qRT-PCR检测组织及细胞中Lin28B、collagen 1α1、collagen 3α1变化;Western blot检测Lin28B蛋白表达;MTT、Edu染色和免疫荧光实验分别检测细胞活力、增殖及成纤维细胞向肌成纤维细胞的转变。结果 Lin28B在肺纤维化小鼠和细胞中表达明显升高。Lin28B可诱导MRC-5细胞胶原合成增加,而过表达let-7d则减轻Lin28B的这一作用。进一步研究发现,Lin28B可诱导成纤维细胞增殖,并促进成纤维细胞向肌成纤维细胞转变,这一作用是通过抑制let-7d来实现的。结论 Lin-28B通过抑制let-7d进而促进成纤维细胞增殖、分化,最终增加成纤维细胞胶原合成,诱发肺纤维化的发生,Lin28B可能作为肺纤维化的治疗新靶点。     

阿托品对大鼠蓝斑核痛反应神经元电活动的影响

目的 研究侧脑室注射乙酰胆碱(ACh)对正常大鼠蓝斑核(LC)痛反应神经元放电的影响.方法 以电脉冲刺激坐骨神经作为伤害性刺激,用玻璃微电极引导LC中痛反应神经元的电变化.结果 ①侧脑室注入ACh能使大鼠LC中痛兴奋神经元(PEN)痛诱发放电频率增加、潜伏期缩短;痛抑制神经元(PIN)痛诱发放电频率减少、完全抑制时程延长;②侧脑室注入ACh 的M受体拮抗剂阿托品能够阻断ACh的上述效应.结论 ①外源性ACh可使正常大鼠LC中痛反应神经元对伤害性刺激的反应增强,表现为致痛效应;② ACh的这种致痛作用主要是通过M受体介导的.该结果揭示,ACh和LC在痛觉调制中具有非常重要的作用.     

STEAP3在脑缺血再灌注损伤沙鼠中的表达及意义

目的 探讨前列腺六跨膜上皮抗原3(STEAP3)在脑缺血再灌注(I/R)损伤沙鼠中的表达及意义。方法 将48只沙鼠随机分为假手术组(Sham组)、I/R模型组(I/R组)、I/R模型+STEAP3 siRNA组(siRNA组)和I/R模型+scramble siRNA组(Control组)，每组12只。进行沙鼠神经功能评分。Nissl染色观察海马CA1区神经元。Fe²⁺试剂盒检测海马组织Fe²⁺水平。Western blotting检测海马组织中STEAP3、H2AX、4-HNE、GPX4蛋白的表达。应用丙二醛(MDA)试剂盒检测海马组织中MDA含量。结果 I/R组沙鼠神经功能学评分、STEAP3、H2AX、4-HNE蛋白及MDA和Fe²⁺水平明显高于Sham组(P <0.05)，而神经元数量和GPX4蛋白表达明显低于Sham组(P <0.01)；与I/R组比较，siRNA组沙鼠神经功能学评分、STEAP3、H2AX、4-HNE蛋白及MDA和Fe²⁺水平明显降低(P <0.05)，...