小鼠隐睾模型研究进展

隐睾症是指睾丸下降异常,使睾丸不能降至阴囊而停留在腹膜后、腹股沟管或阴囊入口处.隐睾的发病率为1.6% ～ 9.0%,先天隐睾患儿发病率则为0.9% ～ 1.8%,近年来的研究发现隐睾的患病率呈增高的趋势[1].     

改良消化富集法提高精原干细胞富集效率的实验研究

目的 建立一种改良的小鼠精原干细胞消化富集方法,为精原干细胞体外长期培养和移植奠定基础.方法 收集120个出生4～d BALB/c新生小鼠的睾丸,平均分为对照组和实验组,分别采用传统的两步消化法(对照组)和改良消化法(实验组)分离消化获得细胞悬液,并种植到铺有明胶的培养皿中,于种植后1h、5h、24h通过差速贴壁法去除体细胞,获得富集的精原干细胞.以Thy-1作为精原干细胞的表面标志,分别在3次差速贴壁前、后采用流式细胞仪检测Thy-1阳性细胞的比例,比较两组精原干细胞的富集效率.结果 实验组和对照组消化所获得的细胞数分别为(3.4±0.5)×105/睾丸和(3.6±0.3)×105/睾丸,无统计学差异(P＞0.05).然而,实验组细胞贴壁具有良好的活性,初次贴壁仅需40～50min,而对照组细胞需要4～5h甚至过夜培养才能贴壁.3次差速贴壁后,实验组Thy-1阳性细胞占睾丸细胞的比例为(56.3±4.7)%,而对照组仅为(32.6±4.2)%,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 改良消化富集法能明显提高睾丸细胞活性和富集效率,可获得大量高度纯化的精原干细胞,为精原干细胞培养和移植奠定基础.     

精原细胞的增殖和分化

精原干细胞As是体内唯一既能自增殖又能分化的细胞，其自增殖与分化的比率由支持细胞(sertoli cells)分泌的胶质细胞源性神经营养因子(glial cell-derived neurotorphic factor GDNF)调控。在生精周期的第8阶段，几乎所有的Aal、少量的Apr和极少量的As型精原细胞均分化成A1型精原细胞，许多因子如SCF／c-kit系统、DazlRNA结合蛋白、周期素D2和视黄酸在此分化阶段起调节作用。生精小管中有均匀的精母细胞分布，是由A2、A3、A4型精原细胞的选择性凋亡得以实现的，Bcl-2家族成员Bax和Bcl-xl对精母细胞的均匀分布起重要作用。     

犬自体睾丸移植术式的改进

目的建立犬自体睾丸移植术的改进方法。方法健康成年雄性杂种犬30只,年龄1.5~2.0岁,体重14~17kg。切取带腹主动脉瓣和下腔静脉瓣的睾丸动、静脉,并进行灌注及冷保存。将睾丸动、静脉分别与同侧髂外动、静脉进行端侧吻合,行自体睾丸移植术30只。对睾丸灌注、带瓣睾丸血管的切取及血管吻合等关键步骤进行了改进。观察术后犬生存情况,对移植的睾丸进行影像学及组织学检查,测定犬术后不同时间点的性激素水平。结果自体睾丸移植30只,成功27只,成功率90%。其中睾丸热缺血4.5±0.9min,冷缺血50.0±10.0min,睾丸血管吻合35.5±5.5min,总手术时间3.5±0.5h。数字减影动脉造影(digitalsubtractionarteriography,DSA)证实成活睾丸血供良好;组织学检查显示精曲小管的各期生精细胞形态无异常,层次及数量无减少,管腔内有少量精子;术后各时间点,黄体生成素较术前明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),睾酮及卵泡刺激素与术前差异均无统计学意义(P>0.05)。结论建立了改进后稳定而可行的犬自体睾丸移植的手术方法,为研究人睾丸移植提供了可靠的依据。     

耻骨前入路阴茎肉膜固定术治疗小儿埋藏式阴茎

目的:观察耻骨前入路阴茎肉膜固定术治疗小儿埋藏式阴茎的效果。方法:2002年8月~2003年12月共采用该术式治疗小儿埋藏式阴茎34例,并进行随访,观察术后效果及复发情况。结果:平均手术时间为45m in,34例患儿术后均获满意疗效。获1年以上随访21例,失访13例。随访病例中未见复发。结论:该术式设计合理、简单、有效,适合于无包皮不足的小儿埋藏式阴茎。     

小鼠隐睾模型制作方法的改进

目的:简化隐睾模型的制作方法,提高隐睾模型的质量。方法:60只68周龄昆明白小鼠随机分为实验组、模型对照组、正常对照组,每组20只。实验组,速眠新麻醉,常规消毒阴囊,将睾丸挤入腹腔,于阴囊根部连续性缝合结扎阴囊。模型对照组用经典的方法,切开腹壁,将睾丸脂肪垫靠近附睾处固定在腹壁,关闭腹腔。3组均饲养75d后,切取睾丸进行形态学和组织化学比较。结果:实验组无死亡,切取睾丸时腹腔内未见粘连,模型对照组死亡率10%,腹腔内均见粘连。两组睾丸形态、大小相似,均较对照组小;形态学比较,实验组与模型对照组相似,管腔内未见成熟精子,与正常对照组比较,细胞形态改变相似;3β羟类固醇脱氢酶(3βHSD)染色显示实验组与模型对照组酶含量无显著性差异(P>0.05),较对照组低(P<0.01)。结论:这种新的方法操作简单,没有粘连,模型质量较经典的方法好。     

胶质细胞源性神经营养因子在小鼠生精恢复过程中的表达和意义

目的:分析并探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)在小鼠恢复生精过程中的表达变化,及其与精原干细胞增殖与分化的关系。方法:间隔24 d 2次腹腔注射白消安建立小鼠生精恢复过程的动物模型。根据第二次给药后的不同时间随机分为1、2、3、4、6、8、10周共7组(8只/组),8只正常小鼠作对照组,分别于相应时点取材,进行光镜和电镜的研究。采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同时间GDNF mRNA的表达变化;并采用原位杂交技术检测GDNFmRNA表达定位。结果:2次给药后第1-2周,GDNF mRNA的表达明显增强,在第2周达到高峰;在给药后第3-4周明显下降,并在第4周达到低谷;随后几周内表达又逐渐增强,于第10周恢复到正常水平。原位杂交显示,GDNF由sertoli细胞表达。结论:在小鼠生精恢复过程中,GDNF的高水平表达促进精原干细胞自我更新,对于维持生精上皮干细胞数量的稳定具有十分重要的意义。     

膀胱全切术后体外可控性回肠代膀胱术

 目的　探讨膀胱全切术后尿流改道新方法即体外可控性回肠代膀胱术的可行性及疗效。方法　取一段回肠 ,将中间部分折叠成N形并缝制成贮尿囊 ;远端回肠从腹壁造瘘口穿出体外 ,于此处取腹壁皮瓣包绕外露肠管缝制成皮管 ,构建输出道 ;将尿液控制器置于皮管外 ,利用气囊控制排尿。结果　 10只杂交狗顺利度过手术期 ,术后 3月时贮尿囊最大容量为 (15 0± 4 0 )ml,最大充盈压为 (2 4 .4± 5 .3)cmH2 O。临床应用 5例 ,随访 (3～ 14 )月 ,术后 3月时贮尿囊最大容量达 (2 90± 80 )ml,最大充盈压为 (36 .3± 8.2 )cmH2 O ,最大尿流率为 (2 0 .3± 4 .7)ml s,无残余尿。X线影像学检查 ,肾脏显影良好 ,输尿管通畅。尿液控制器的气囊充气后 ,无尿液流出 ;气囊消气后 ,尿液呈粗线条流出。结论　该尿流改道术式具有体外自主控制排尿的特点 ,不必佩戴集尿袋或自行导尿 ,且手术操作比较简单、并发症少、安全可靠。     

肾上腺髓样脂肪瘤诊治分析

目的 探讨肾上腺髓样脂肪瘤临床特点,提高对该病的诊断与治疗水平。 方法 回顾性分析2010年1月至2013年1月7例肾上腺髓样脂肪瘤患者临床资料,总结其诊断和治疗经验。 结果 7例患者经后腹腔镜肾上腺肿瘤切除,术后病理检查均证实为肾上腺髓样脂肪瘤,术后随访0. 5~ 3年,无肿瘤复发。结论 后腹腔镜手术创伤小,疗效满意,是治疗该病有效且安全的方法,值得临床推广。     

增塑剂邻苯二甲酸二丁酯致小鼠睾丸组织的病理学改变

背景：目前国内外研究邻苯二甲酸二丁酯对生殖损害研究对象多为大鼠,且不同时间点下小鼠病理组织学未见,以小鼠为移植对象没有明确移植时间。 目的：探讨邻苯二甲酸二丁酯致小鼠睾丸组织病理学改变,并找出其改变最大的时间点,为移植做准备。 方法：妊娠balb/c小鼠20只随机分成3组,分别为正常对照组6只,玉米油对照组6只,DBP组8只。自妊娠12~21 d,分别经口给予邻苯二甲酸二丁酯和玉米油,分别在小鼠出生后4~8周每间隔1周观察仔代雄小鼠睾丸的组织病理学改变,找到变化最大的时间点。 结果与结论：邻苯二甲酸二丁酯组染毒小鼠睾丸出现明显的生理、病理和电镜下的改变。邻苯二甲酸二丁酯可引起雄性仔鼠性分化异常,睾丸生精上皮损害和生精过程障碍,从而对雄性仔鼠生育力产生不利影响,在5,6周小鼠睾丸组织损害最大,可以作为移植变化最大时间进行选择。