人乳腺癌上皮细胞miR-217对DNMT1调控作用的研究

目的 验证在乳腺癌上皮细胞系中,miR-217通过直接作用于DNMT1 3′UTR调控DNMT1表达,为后期动物实验和临床试验提供实验基础.方法 利用瞬时转染技术,在对应细胞系中,过表达、抑制miR-217,Western blot检测各实验组中DNMT1蛋白表达,并用含有miR-217野生型及突变型识别位点的DNMT1 3′UTR载体质粒分别转染293T细胞,检测相对荧光素酶活性改变.结果 过表达miR-217,DNMT1表达下降;抑制miR-217,DNMT1表达增高;双荧光素酶检测实验,DNMT1-UTR-WT的相对荧光素酶活性显著低于DNMT1-UTR-MUT,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 在乳腺癌上皮细胞系中,miR-217对DNMT1表达具有调控作用,且miR-217通过直接作用于DNMT1 3′UTR调控DNMT1表达.     

EZH2及DNMT1在三阴性乳腺癌中的表达及意义

目的探讨EZH2及DNMT1在三阴性乳腺癌中的表达特点及与主要临床病理参数的关系。方法采用免疫组化SP法,检测131例三阴性乳腺癌、78例非三阴性乳腺癌及65例癌旁组织中EZH2及DNMT1的表达情况。采用多因素logistic回归分析EZH2及DNMT1阳性表达有关的因素,Spearman等级相关分析三阴性乳腺癌中EZH2及DNMT1表达的相关关系。结果 EZH2蛋白在三阴性乳腺癌组织、非三阴性乳腺癌组织和癌旁组织的阳性表达率分别为86.3%、89.7%和40.0%;DNMT1蛋白在三种组织中的阳性表达率分别为63.4%、66.6%和44.6%;两种蛋白在乳腺癌组织中的表达均高于癌旁组织(P<0.05);两种蛋白在三阴性乳腺癌与非三阴性乳腺癌组织间表达差异无统计学意义。在三阴性乳腺癌中,EZH2阳性表达与肿瘤组织学分级、肿瘤直径、淋巴结是否转移有关(P<0.05),DNMT1的表达与肿瘤组织学分级、淋巴结是否转移有关(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,肿瘤组织学分级为影响EZH2及DNMT1表达的最主要因素;三阴性乳腺癌中DNMT1与EZH2的表达呈正相关(r=0.34,P<0.01)。结论 EZH2与DNMT1的高表达与三阴性乳腺癌的分化、生长、转移有关,且两者在三阴性乳腺癌中的表达呈正相关,其联合检测可能对三阴性乳腺癌的预后判断更有价值。     

慢性HBV感染者的免疫状态与外周血T、B细胞亚群的含量相关性研究

目的通过分析慢性HBV感染者不同免疫状态外周血T、B细胞亚群的占淋巴细胞的百分比探讨其相互关系。方法选取2010年2月至2013年3月50例在该院就诊医治的慢性HBV感染者作为试验组,按照免疫状态的不同将试验组分为21例免疫耐受组和29例免疫清除组,同时选取20例健康成人作为正常对照组,采用流式细胞术检测外周血T、B细胞亚群的百分比,对3组的临床资料进行了对比。结果与对照组相比,免疫耐受组和免疫清除组患者的B细胞、CD8+T细胞的百分比明显增高;而免疫耐受组和免疫清除组患者CD3+T、CD4+T细胞的百分比和CD4+/CD8+的比值均明显降低,不同组间相比较差异有统计学意义(P0.05)。结论外周血T、B细胞亚群的百分比可作为慢性HBV感染者免疫状态的参考指标,常规检测该项目对了解HBV感染者的不同免疫状态以及疾病的治疗和疫苗接种等具有重要的指导作用,值得临床推广应用。     

miRNAs慢病毒文库筛选靶向EZH2 3’非翻译区的新型miRNAs及其在乳腺癌中的表达

目的重组过表达EZH2基因3’非翻译区的MCF-7细胞株中筛选靶向miRNAs,并进行细胞和组织定量分析。方法重组
细胞株感染慢病毒文库,利用细胞毒性药物筛选后抽提细胞基因组,以此为模板PCR扩增出miRNA前体,测序确定miRNAs名
称,并对其进行PCR定量分析。结果在重组细胞株中共筛选出7种miRNAs,依次为miR-15b、miR-16-2、miR-181b2、miR-217、
miR-224、miR-329-1、miR-487b,这些新型miRNAs用生物信息学软件PicTar 和TargetScan 无法预测。Real-time PCR发现,与
乳腺癌细胞MCF-7 相比,正常乳腺细胞株HBL-100 中miR-217、miR-329-1、miR-487b 高表达;乳腺癌组织中仅miR-15b 及
miR-16-2表达增加,与癌旁组织相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论在重组过表达EZH2 3’-UTR的乳腺癌MCF-7细胞株
中结合慢病毒文库可筛选出用生物信息学软件未预测的新型靶向miRNAs,这些新型miRNA在正常乳腺细胞与肿瘤细胞及组
织中存在差异表达。
     

miRNA-21在子宫颈鳞癌组织中表达的初步研究

目的探讨微小分子RNA(microRNA-21,miR-21)在宫颈癌患者组织中的表达情况。方法选择宫颈鳞癌20例作为宫颈癌组,其中12例HPV16阳性,8例HPV16阴性;正常宫颈16例作为对照组,采用实时定量PCR方法检测miR-21在各组中的表达情况。结果 MiR-21在宫颈癌和对照组中的相对表达量为4.019±0.002;MiR-21在HPV16阳性宫颈癌组和阴性组的相对表达量分别为2.376±0.034和2.002±0.024,差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-21在宫颈癌组织中呈高表达,可能与宫颈癌发生、发展有关。     

人乳腺癌上皮细胞miR-217对EZH2表达的调控作用

目的 验证乳腺癌上皮细胞中miR-217是否通过直接作用于homolog2 zeste基因增强子（EZH2）3＇UTR调控EZH2表达.方法 利用RT-PCR技术检测人正常乳腺上皮细胞系HBL-100及乳腺癌上皮细胞系MCF-7、MDA-MB-231细胞株中的miR-217,在低表达miR-217细胞株中转染miR-217模拟物（miR-217 minics）,在高表达miR-217细胞株中转染miR-217抑制剂（miR-217 inhibitor）;Western blot法检测各实验细胞中的EZH2蛋白.用含有miR-217野生型及突变型识别位点的EZH2 3＇UTR载体（UTREZH2-UTR-WT和EZH2-UTR-MUT）质粒分别转染人胚肾细胞293T,检测其相对荧光素酶活性.结果 miR-217在MDA-MB-231细胞中低表达,转染miR-217 minics后,其EZH2蛋白表达下降;miR-217在HBL-100中高表达,转染miR-217 inhibitor后,其EZH2蛋白表达增高.人胚肾细胞293T中EZH2-UTR-WT的相对荧光素酶活性低于EZH2-UTR-MUT,两者相比,P＜0.05.结论 在乳腺癌上皮细胞中,miR-217对EZH2的表达具有调控作用,且miR-217通过直接靶向EZH2 3＇UTR调控EZH2表达.     

老年住院患者感染肺炎克雷伯菌的临床特点及耐药性分析

目的 分析老年住院患者肺炎克雷伯菌感染的临床特点，为临床预防和诊治肺炎克雷伯菌感染，合理使用抗菌药物提供参考。方法 收集上海市奉贤区中心医院2020年1月—2021年12月期间合计641例肺炎克雷伯菌感染住院患者资料，根据年龄分为老年组(≥65岁)和非老年组(<65岁),比较2组患者科室分布、基础疾病、感染部位、危险因素、药物耐药等情况。结果 老年组与非老年组最常见的均为肺炎克雷伯菌所致的呼吸道感染，差异无统计学意义(P>0.05),其次为泌尿道感染，差异有统计学意义(P<0.05)。老年组高血压、脑梗死、冠心病、慢阻肺、泌尿系统感染疾病的比例均高于非老年组高，差异均有统计学意义(P<0.001)。老年组的易感因素如插管(尿管、胃管、鼻饲)、肾功能不全、低蛋白血症、呼吸衰竭、脓毒血症、多脏器功能障碍、合并真菌感染、使用三/四代头孢菌素、 β-内酰胺类加酶抑制剂复合物及感染病原菌种类≥2种等均高于非老年组，差异均具有统计学意义(P<0.05)。老年组对头孢唑林、氨苄西林/舒巴坦、环丙沙星/呋喃妥因的耐药率均高于非老年组(P<0.05);对亚胺培南、阿米...     

基于网络药理学研究柴胡达胸合剂治疗新型冠状病毒肺炎的作用机制

目的 基于网络药理学方法探讨柴胡达胸合剂治疗新型冠状病毒肺炎（COVID-19）的潜在药理作用机制。方法 利用中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP）筛选柴胡达胸合剂活性成分和对应的作用靶点,并通过Uniprot数据库标准化靶点名称;在GeneCards和OMIM数据库检索冠状病毒相关基因,并与柴胡达胸合剂作用靶点取交集,筛选出治疗作用靶点;利用Cytoscape 3.7.2软件,构建和分析“药材-活性成分-靶点”网络图;通过String平台分析靶点蛋白相互作用,并使用R软件的相关包进行GO基因注释和KEGG信号通路分析。结果 筛选出165个有效成分和51个作用靶点,进一步分析发现主要活性成分为β-谷甾醇和11个黄酮类化合物,核心作用靶点为CASP3、MAPK3、IL-6、MAPK8、IL-10、CXCL8、MAPK1、IL-1B等。GO基因注释得到GO条目共1 722个（P<0.05）,其中生物学过程条目1 612个,细胞组成条目30个,分子功能条目80个。KEGG信号通路筛选出信号通路156条（P<0.05）,富集基因较多的信号通路为糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、甲型流感、IL-17信号通路、TNF信号通路和乙型肝炎。结论 该研究初步揭示了柴胡达胸合剂多成分、多靶点、多通路对COVID-19发挥治疗作用的特点,为进一步阐明柴胡达胸合剂治疗COVID-19的药理作用机制提供理论依据。     

慢性不可预见性温和应激致抑郁对大鼠肝脏转运多肽mRNA和蛋白表达的影响

目的 研究慢性不可预见性温和应激（chronic unpredicted mild stress,CUMS）致抑郁对大鼠肝脏有机阴离子转运多肽（organic anion transporting polypeptides,Oatps） mRNA和蛋白表达的影响。方法 24只雄性SD大鼠随机分为抑郁模型组和对照组,模型组连续8周给予CUMS,对照组正常饲养。分别于造模前后称量体重、进行糖水偏好实验和旷场实验,并测定大鼠血浆去甲肾上腺素和皮质酮水平以验证抑郁模型的建立。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）和蛋白质印迹法（Western blotting）分别检测大鼠肝脏Oatp1a1、Oatp1a4和Oatp1b2 mRNA和蛋白表达。结果 与对照组相比,模型组大鼠体重减轻,糖水偏好百分比下降,垂直运动得分和水平运动得分减少,血浆去甲肾上腺素和皮质酮水平升高,肝脏Oatp1a1、Oatp1a4和Oatp1b2 mRNA和蛋白表达下降。结论 CUMS致抑郁下调大鼠肝脏Oatps mRNA和蛋白表达。