蒲公英水煎液对环磷酰胺诱导的实验性小鼠精子畸形的影响

目的 :研究蒲公英水煎液对实验性小鼠生殖细胞遗传物质的影响。方法 :应用小鼠精子畸形实验 ,观察蒲公英水煎液本身能否诱发雄性生殖细胞遗物质的损伤 ;以及对环磷酰胺诱导的雄性生殖遗传物质损伤是否具有抑制作用。结果 :蒲公英水煎液本身不能诱发实验性小鼠精子畸形 ;对环磷酰胺诱导实验性小鼠精子畸形具有明显抑制作用。结论 :蒲公英水煎液具有一定的抗突变作用 ,可安全应于临床肿瘤治疗。     

He-Ne激光照射对脑梗死患者淋巴细胞生物学的影响

目的 探讨鼻腔内低强度激光照射治疗(ILILT)对脑梗死患者淋巴细胞增殖、畸变、凋亡和细胞周期动力学指数的影响,以及致突变性.方法 对ILILT前、后的35例脑梗死患者和35例健康成年人外周血进行淋巴细胞培养,并进行细胞增殖指数(MI)、细胞周期动力学指数(CKI)、姐妹染色单体交换(SCE)频率和细胞凋亡的分析,观察ILILT对淋巴细胞的效应.结果 ILILT后,脑梗死患者的淋巴细胞增殖活性比对照组和照射前有所提高,并且随着照射剂量的增加其增殖活性也增高(P＜0.05,P＜0.001),但对淋巴细胞周期的进程影响不大.各组间的SCE频率差异不显著(P＞0.05).ILILT前、后的CKI与对照组相比,差异无显著意义(P＞0.05).ILILT后脑梗死患者的细胞凋亡率比照射前和对照组比较均有极显著增加(P＜0.001).结论 ILILT能提高脑梗死患者的淋巴细胞增殖活性,虽可诱发较高的淋巴细胞凋亡率,但对细胞没有致突变性.     

高表达重组Ret蛋白B16细胞株的建立

目的：探讨建立高表达重组Ret蛋白的B16细胞株的方法,为Ret抗原的免疫原性研究提供靶细胞。方法：通过常规分子克隆的方法,构建Fxyd3-Ret嵌合蛋白的真核表达质粒pIRES-rFxyd3-His-Ret-neo2;将该质粒转染293细胞以验证构建质粒的可行性;将该质粒转染B16细胞,通过筛选获得Fxyd3-Ret蛋白高表达的阳性细胞株。结果：PCR和酶切验证pIRES-rFxyd3-His-Ret-neo2的产物片段大小符合预期,Western blot对转染pIRES-rFxyd3-His-Ret-neo2质粒的细胞进行检测,发现在转染细胞内有目标蛋白高表达。结论：成功构建了pIRES-rFxyd3-His-Ret-neo2真核转染质粒;成功建立了Ret蛋白高表达的B16细胞株。     

利用Bayes公式计算单基因遗传病再发风险的教学策略

目的讨论单基因遗传病再发风险的Bayes分析方法的教学技巧。方法通过系统讲述单基因遗传病的发病风险估计,引入在夫妻双方或一方基因型不确定的情况下,通过Bayes公式精确计算各种单基因遗传病再发风险。结果利用Bayes公式精确计算遗传病再发风险,可以为患者家庭提供可靠的遗传咨询信息及正确的婚姻、生育指导,作为是医学遗传学教学的难点和重点,利用Bayes公式精确计算遗传病再发风险的教学需要必要的教学技巧,其中讲述条件概率的计算是教学成功与否的关键。结论利用Bayes公式精确计算遗传病再发风险比单纯利用孟德尔分离定律更能准确地计算遗传病的再发风险,在教学过程中,通过各种手段强化教学内容是教学成功的关键。     

应用变性高效液相色谱法检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的三种常见基因突变

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症呈X连锁不完全显性遗传。G6PD具有遗传多态性，其基因定位在染色体Xq28，现已鉴定的G6PD基因突变型有131种，在我国已报道的有20种，其中多为点突变，G6PD缺乏症呈全球性、多种族、多民族分布，其基因突变型具有民族和种族异质性，我国是一个多民族闰家，在G6PD基因上一定存在着多种类型的突变，研究这些突变型对我国群体遗传学、人类学、民族渊源和变迁至关重要，也可填补我国“人类基因组多样性计划”G6PD座位的空白。变性高效液相色谱法（DHPLC）是近年发展起来的检测突变的新技术，我们初步探索了DHPLC在中国人G6PD基因突变检测中的应用。     

单细胞悬液制备应注意的问题

流式细胞仪（FlowCytometry，FCM）是目前常用来测量细胞表面荧光免疫标志、DNA含量和钙离子变化的大型精密仪器，但是，利用FCM来做实验分析最常见的问题就是测试时细胞数太少（实验要求为1×106／ml），尤其是用固定剂固定过的细胞。本人发现在离心时如果不采用正确的方法，细胞损失料相当严重。例如，将乙醇固定过的胸腺细胞（1．12×107／ml）在垂直离心机上1000rpm离心10分钟，去固定液，发现细胞只剩下6．4×106／ml；然后用PBS漂洗，离心后去PBS液，细胞剩下3．2×106／nd，经PBS第二次次漂洗，离心后细胞则只有6×105／ml。…     

假肥大型肌营养不良症患者及携带者的致病基因突变检测

目的 检测假肥大型肌营养不良症患者及携带者的dystrophin基因致病突变类型,为防止假肥大型肌营养不良症的再发提供信息.方法 利用多重引物连接依赖式扩增技术和变性高效液相色谱技术检测临床研究发现的20例假肥大型肌营养不良症患者的DMD基因突变.结果 缺失突变10例,重复突变1例,终止密码子突变4例,5例未发现致病突变.结论 通过致病突变的检测可以为防止患者家庭假肥大型肌营养不良症的再发提供优生优育指导.     

蝙蝠SARS样冠状病毒S蛋白受体结合域在昆虫细胞中的表达和纯化

目的：在昆虫细胞表达系统中表达蝙蝠SARS样冠状病毒Spike蛋白的受体结合域,并探讨其表达动力学和纯化条件。方法：以PCR扩增蝙蝠SARS样冠状病毒Spike基因的受体结合域片段,产物连接到pMD-T载体,再亚克隆至供体质粒pFAST—HTB,经序列测定确认基因正确克隆,进一步将其转座入Bacmid中,在昆虫细胞S西中进行表达,采用SDS—PAGE和Westernblotting对表达产物进行分析,并通过镍离子螯合树脂纯化重组蛋白。结果：在昆虫细胞表达系统中表达出蝙蝠SARS样冠状病毒Spike蛋白的受体结合域片段,当感染复数（multiplicityofinfectiin,MOI）为2时,重组病毒感染细胞56h后,重组蛋白的表达量达到峰值。结论：蝙蝠SARS样冠状病毒Spike蛋白的受体结合域片段在昆虫细胞表达系统中得到了有效表达,并可通过镍离子螯合树脂纯化重组蛋白。     

蒲公英对环磷酰胺致小鼠骨髓细胞突变作用的抑制研究

目的：研究蒲公英(TM)抗突变作用和对细胞增殖的影响。方法：采用小鼠骨髓淋巴细胞有丝分裂指数试验、染色体畸变试验、微核试验,观察蒲公英水煎液对小鼠骨髓淋巴细胞的遗传损伤效应的影响。结果：①环磷酰胺(CP)单独作用时,能抑制小鼠骨髓淋巴细胞的增殖(P<0.01);与TM联合作用时,有丝分裂指数明显比阳性对照组提高(P<0.01)。②蒲公英低、中、高剂量组均能明显地抑制由于CP引起的染色体畸变率,其抑制率分别为39.62 ％、58.49 ％、54.72 ％,同时对CP诱发的微核率也有明显的抑制效应;蒲公英水煎液不会导致小鼠骨髓淋巴细胞的染色体畸变和微核率的增加(P> 0.05)。结论：蒲公英本身没有致突变性,能抑制CP诱发的染色体畸变和微核率,促进细胞的增殖能力。     

低能量He-Ne激光血管内照射对脑梗死患者淋巴细胞的影响

目的　探讨He Ne激光血管内照射 (ILIB)对脑梗死患者淋巴细胞增殖和凋亡的影响 ,以及有否遗传毒性。方法　对ILIB治疗前、后的脑梗死患者外周血进行淋巴细胞培养 ,并进行细胞增殖指数(MI)、细胞周期动力学指数 (CKI)、姐妹染色单体交换 (SCE)频率和细胞凋亡的分析 ,观察ILIB对淋巴细胞的效应。结果　经ILIB照射后 ,脑梗死患者的淋巴细胞增殖活性比对照组和照射前有所提高 ,并且随着照射剂量的增加 ,其增殖活性也增高 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 0 1) ,但对淋巴细胞周期的进程影响不是很大 ,ILIB治疗前、后的CKI与对照组相比 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ;各组间的SCE频率差异不显著 (P >0 .0 5 ) ;流式细胞仪 (FCM )检测后显示 ,经ILIB照射后的脑梗死患者的细胞凋亡率比照射前和对照组均有极显著增高(P <0 .0 0 1)。结论　低能量He Ne激光血管内照射能提高脑梗死患者的淋巴细胞增殖活性 ,虽可诱发较高的淋巴细胞凋亡率 ,但对细胞没有致突变性。