家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体新突变类型与表型关系的研究

目的　检测中国汉族家族性高胆固醇血症 (FH)家系低密度脂蛋白受体 (LDLR)基因突变类型 ,研究基因型与表型间的关系 ,探讨FH发病的分子病理机制。方法　先证者及家系成员进行血脂测定、心电图、心脏及大血管彩色多普勒超声检查后采用聚合酶链反应 ( polymerasechainreaction ,PCR) 变性高效液相色谱 (DHPLC)法结合扩增产物直接序列分析检测LDLR基因启动子和全部 18个外显子片段 ,结果与GenBank公布的该基因正常序列比对找出突变并检索FH突变数据库(www .ucl.ac .uk/fh)。此外 ,采用PCR 限制性内切酶技术 ,检测载脂蛋白B10 0 (ApoB10 0 )基因Q35 0 0R突变 ,以排除家族性ApoB10 0 缺陷症 (FDB)。结果　DHPLC分析发现该患儿及其父母LDLR基因第 3外显子存在一异常波峰 ,DNA测序证实该患儿第 3内含子 5′剪接位点存在G→A纯合剪接突变 ,其父母相同位点表现为野生型和突变型杂合现象 ;同时未检测出患儿及其父母ApoB10 0Q35 0 0R突变。结论　国内首次发现LDLR基因第 3内含子G→A纯合剪接突变 ;该突变可能是FH发病的分子基础并导致其严重的临床表型 ;PCR DHPLC法可用于FH可疑人群的确诊     

原子力显微镜定量检测人骨髓间充质干细胞等效黏附力的实验研究

目的 建立原子力显微镜检测体外培养人骨髓间充质干细胞（hMSCs）黏附力的方法. 方法 对原子力显微镜施加不同垂直方向力所引起的体外培养hMSCs细胞宽度的变化进行测量,并根据力学原理推算细胞对抗垂直力的等效黏附力.设引起细胞宽度降低10%的垂直力为临界等效黏附力,引起细胞完全脱离培养基质面的垂直力为最大等效黏附力. 结果 培养24 h后,末包备培养皿中hMSCs细胞的临界和最大等效黏附力分别为0.8319和1.1092 nN,纤维黏连蛋白包备基质培养皿中hMSCs的临界和最大等效黏附力分别为0.5546和0.8319 nN.培养72 h后,2组细胞的等效黏附力没有改变. 结论 建立了原子力显微镜垂直方向力模式直接测量体外培养hMSCs等效黏附力的方法.     

变性高效液相色谱技术在家族性高胆固醇血症低密度脂蛋白受体基因突变检测中的应用

目的 以变性高效液相色谱(DHPLC)，分析检测家族性高胆固醇血症(FH)一汉族家系成员的低密度脂蛋白受体(LDLR)基因突变，以明确诊断。方法 收集临床诊断为家族性高胆固醇血症的汉族一个家系共37名成员，其中30人为一级和二级亲属，7名为亲属配偶作为对照，提取基因组DNA，聚合酶链反应(PCR)方法扩增LDLR基因包含启动子和全部基因编码区(1-18外显子)及临近的内含子序列共21个片段，琼脂糖凝胶电泳鉴定产物。采用DHPLC技术检测了LDLR基因，对洗脱曲线异常者进行核苷酸序列分析。结果 该家系中发现4处变异，其中1处经核苷酸序列测定明确了突变的性质为第3内含子的剪接突变，并在此家系5名成员中得到证实，而对照组中未检出。结论 成功地建立了以DHPLC筛查LDLR基因点突变的方法及技术参数，该方法简便，结果稳定，可作为大样本筛查突变位点的一种便捷可靠手段。     

降落聚合酶链反应技术在低密度脂蛋白受体基因点突变研究中的应用

目的 建立降落(TOUCHDOWN)聚合酶链反应(PCR)方法，快速检测家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体(LDL-R)基因点突变。方法 设计LDL-R基因2l对引物，根据TOUCHDOWN原理设计包括启动子和18个外显子特异性片段在内的PCR程序，通过试验选择PCR最佳反应条件，在同一程序中分别对21个片段进行扩增，琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，纯化后DNA产物测序分析该方法的特异性。结果 编设退火温度范围从68℃降至54℃的PCR程序，优化PCR扩增条件，电泳检测采用同一程序同时分别扩增的LDL-R基因21个片段条带清晰，测序证实了此组片段的特异性。结论 成功建立降落PCR方法，提示此法为LDL-R基因突变筛查提供了快速可靠的手段。     

家族性高胆固醇血症一例

患者，男，15岁。皮肤结节性肿胀13年，因频繁出现胸闷，呼吸困难等心肌缺血表现，于2003年4月来我院动脉硬化高脂血症门诊就诊。患者13年前出现皮肤结节性肿胀，4年前出现心肌缺血的表现，眼角膜出现角膜弓。体检血压135／90mmHg(1mmHg=0．133kPa)，双肘部以及跟腱可见多个散发的黄色结节，双手及臀部可见多发弥散小结节，眼睑周围有米粒大小结节，质地较硬，无疼痛。眼角膜下缘有半月形阴影。     

小而密低密度脂蛋白对内皮细胞间黏附分子表达的影响

目的 探讨小而密低密度脂蛋白(sLDL)致动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法 两步超速离心法提取人sLDL作为试验组，与培养的人脐静脉内皮细胞共同孵育12h。设置大而轻LDL、氧化sLDL、氧化大而轻LDL对照组。用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组孵育细胞内皮细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的蛋白表达。同时用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测孵育细胞ICAM-1基因表达，以磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)扩增产物作为内对照。结果 与其他对照组比较，sLDL显著诱导培养细胞的ICAM-1信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达。结论 sLDL对内皮细胞功能的有较强的损伤作用，与AS的发生关系密切。     

比较低密度脂蛋白亚组份对血管细胞黏附分子-1表达的影响

细胞黏附分子的表达是动脉粥样硬化 (AS)形成的早期表现。血管细胞黏附分子 1(VCAM 1)在介导单核细胞向血管内皮黏附、迁移过程中起了极其重要的作用。低密度脂蛋白 (LDL)是重要的致AS因子[1] 。血浆LDL具有异质性 ,它是由一系列大小、密度和化学组成各异的颗粒组成。LDL的密度范围为 1 0 19～ 1 0 6 3,现一般将LDL亚组份中颗粒较小 (直径约 2 5nm)、密度较大 (接近 1 0 6 )的LDL称为小而密低密度脂蛋白 (sLDL) ;将颗粒较大(直径约 2 7nm) ,密度较小 (接近 1 0 2 )的LDL称大而轻LDL。大量流行病学及体内外实验表明 ,sLDL具有…     

家族性高胆固醇血症样表型的临床特点及基因诊断

家族性高胆固醇血症对人类健康危害极大已经受到世界各国的重视,并开展大量研究,但该病在我国并未得到应有的重视。因此,正确认识FH患者的临床特点,及早将他们鉴别出来,深入研究这类人群的遗传背景,有助于了解其分子病理机制,对于As疾病的防治有重要意义。     

低密度脂蛋白亚组份对血管细胞黏附分子-1表达的影响

背景：探讨低密度脂蛋白(LOW DENSITY LIPOPROTEIN，LDL)亚组份与人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVEC)的血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)表达之间的关系，初步探讨LDL亚组份致动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)作用可能的分子机制。目的：观察不同LDL亚组分对HUVEC VCAM-1表达的影响。设计：随机对照的实验研究。地点和对象：本实验在北京市心肺血管疾病研究所动脉硬化研究室进行，体外培养HUVEC。干预：体外培养HUVEL，分别加入25，50，100mg／L的小而密低密度脂蛋白(small dense low-density lipoprotein，sLDL)、大而轻LDL、氧化sLDL和氧化大而轻LDL，共孵育12h和24h。主要观察指标：采用细胞表面ELISA和RT—PCR分别测定VCAM-1蛋白表达及mRNA水平。结果：HUVEC经25，50，100mg／L的sLDL刺激12h后，VCAM-1表达呈浓度依赖性明显增高(0．233&;#177;0．036，0．260&;#177;0．052，0．365&;#177;0．036，F=20．883，P&;lt;0．05)。刺激12h后，与大而轻LDL0．231&;#177;0．075。oxsLDL 0．287&;#177;0．034及氧化大而轻LDL 0．258&;#177;0．043相比，sLDL明显诱导HUVEC的VCAM-1表达(F=17．211，P&;lt;0．05)。结论：sLDL显著诱导人脐静脉内皮细胞VCAM-1的表达，可能是sLDL更易引起动脉粥样硬化的机制之一。     

低密度脂蛋白亚组份对血管细胞黏附分子-1表达的影响

背景探讨低密度脂蛋白( low density lipoprotein, LDL)亚组份与人脐静脉内皮细胞( human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)的血管细胞黏附分子-1( vascular cell adhesion molecule-1, VCAM-1)表达之间的关系,初步探讨 LDL亚组份致动脉粥样硬化( atherosclerosis, AS)作用可能的分子机制. 目的观察不同 LDL亚组分对 HUVEC VCAM 1表达的影响. 设计随机对照的实验研究. 地点和对象本实验在北京市心肺血管疾病研究所动脉硬化研究室进行,体外培养 HUVEC. 干预体外培养 HUVEL,分别加入 25,50,100 mg/L的小而密低密度脂蛋白( small dense low density lipoprotein, sLDL)、大而轻 LDL、氧化 sLDL和氧化大而轻 LDL,共孵育 12 h和 24 h. 主要观察指标采用细胞表面 ELISA和 RT-PCR分别测定 VCAM-1蛋白表达及 mRNA水平. 结果 HUVEC经 25,50,100 mg/L的 sLDL刺激 12 h后, VCAM 1表达呈浓度依赖性明显增高( 0.233± 0.036,0.260± 0.052,0.365± 0.036,F=20.883,P< 0.05).刺激 12h后,与大而轻 LDL 0.231± 0.075, oxsLDL 0.287± 0.034及氧化大而轻 LDL0.258± 0.043相比, sLDL明显诱导 HUVEC的 VCAM 1表达 (F=17.211,P< 0.05). 结论 sLDL显著诱导人脐静脉内皮细胞 VCAM 1的表达,可能是 sLDL更易引起动脉粥样硬化的机制之一.