HOTAIR在Matrigel三维培养乳腺癌细胞的表达

目的建立乳腺癌MDA-MB-231细胞株三维培养模型,观察三维培养条件下乳腺癌细胞的形态、增殖以及HOTAIR表达水平的变化。方法 Matrigel三维培养乳腺癌细胞,采用倒置显微镜观察乳腺癌细胞的生长情况,通过检测DNA含量测定细胞增殖情况,Real time-RCR检测HOTAIR表达水平。结果与二维细胞培养条件相比,Matrigel三维培养的乳腺癌细胞成团生长,细胞数量显著增加,并且HOTAIR mRNA表达水平上调。结论 Matrigel三维培养体系能较好维持乳腺癌MDA-MB-231细胞形态,长链非编码RNA-HOTAIR表达在三维培养时显著升高。     

疟原虫和其他病原体混合感染的研究进展

疟疾是一类在热带和亚热带地区非常流行的疾病,混合感染现象在疟疾流行区普遍存在。能够引起混合感染的病原体种类很多,其中比较常见的有HIV、结核分枝杆菌、血吸虫和钩虫。本文就疟疾和HIV、EB病毒,疟疾和蠕虫,以及疟疾和细菌的混合感染作一综述。     

口服Ag85A DNA疫苗表达产物在脾脏的分布

目的 检测口服Ag85A DNA疫苗表达产物在脾脏内的分布,为阐明口服DNA疫苗可诱导全身性免疫应答的机制提供依据。方法 将本实验室构建的pCDNA3．1^＋-Ag85A真核表达重组质粒转化感受态大肠杆菌DH5α进行扩增,无内毒素抽提纯化,进一步用脂质体包裹制成口服重组Ag85A DNA疫苗。将C57BL／6小鼠随机分为2组,即生理盐水组和DNA疫苗组。分别将生理盐水和Ag85A DNA疫苗以灌胃方式投给各组小鼠,共免疫3次,每次间隔14d,末次免疫后14d处死小鼠,取脾,免疫组化、免疫荧光法检测Ag85A表达产物在脾脏的分布情况。结果 Ag85A重组DNA疫苗的表达产物在小鼠脾脏白髓、边缘区和红髓的脾索处有广泛分布,在边缘区及红髓的脾索处的检出强度高于白髓。免疫组化结果中边缘区与白髓比较t=3．039,P〈0．05;红髓的脾索与白髓比较t=3．068,P〈0．05;边缘区与红髓的脾索比较t=1．750,P〉0．05。免疫荧光结果中边缘区与白髓比较t=3．144,P〈0．05;红髓的脾索与白髓比较t=3．098,P〈0．05;边缘区与红髓的脾索比较t=1．369,P〉0．05。结论口服脂质体包裹的DNA疫苗的表达产物存在于脾脏,表明经口途径接种的DNA疫苗可能会在脾脏诱导全身性免疫应答的产生。     

量子点标记肺炎支原体重组蛋白抗体检测抗原方法的建立

目的建立一种用CdSe／ZnS量子点标记技术用于肺炎支原体检测的方法。方法用重组MpP1蛋白免疫动物制备免疫血清,硫酸铵沉淀法及离子层析法纯化IgG抗体,纯化抗体用CdSe／ZnS量子点标记,离心沉淀法纯化标记产物。用标记抗体检测Mp抗原。结果量子点标记抗体直接玻片荧光法检测Mp抗原具有较高的敏感性（检测灵敏度在0．00tt~g／mL）,且与呼吸道常见病原菌无交叉反应。结论成功建立量子点标记技术检测肺炎支原体抗原方法,具有操作简单、检测快速的优良,适用于Mp感染的早期诊断。     

双歧杆菌菌体多糖对iIEL细胞产生IFN_γ和IL-2激活作用的研究

目的　检测小肠上皮间淋巴细胞 (iIEL)产生IFNγ 和IL - 2的能力。方法　采用Percoll非连续密度梯度离心法从小鼠小肠提取iIEL细胞 ,应用有机溶剂提取的双歧杆菌菌体多糖 ,将它与iIEL细胞共同孵育作用。结果　双岐杆菌多糖组与正常对照组之间有显著差异 (P <0 0 1)。结论　双歧杆菌菌体多糖能促进iIEL细胞产生IFNγ 和IL 2。     

用量子点标记技术检测肺炎支原体抗原

目的:通过建立鼠肺炎支原体肺炎模型,研究CdSe/ZnS量子点标记技术检测肺炎支原体抗原的最佳时期,并探讨其临床应用的可行性。方法:以CdSe/ZnS量子点标记兔抗肺炎支原体P1重组蛋白IgG作为检测抗体,对不同感染时期的鼠支气管灌洗液标本及105份临床呼吸道感染标本进行测定,观察CdSe/ZnS量子点标记方法检测肺炎支原体感染阳性率与病程的关系,以及该方法与聚合酶链反应(PCR)检测法的符合率。结果:感染3 d～7 d的鼠支气管灌洗液检测Mp阳性率最高。临床标本PCR检测阳性率为35.2%(37/105),量子点标记方法阳性率为31.4%(33/105),两者符合率达86.7%(91/105)。结论:量子点标记方法适用于肺炎支原体感染早期的检测,方法操作简单、检测快速,在实验室诊断中有良好的应用前景。     

异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌检测方法的临床应用评价

近年来,随着甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌(MRSA)感染率的上升和万古霉素的广泛使用,临床上出现了万古霉素敏感性下降的金黄色葡萄球菌,包括万古霉素中介金黄色葡萄球菌(vancomycinintermediate Staphylococcus aureus,VISA)和异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌(heterogeneous vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus,hVISA).2006年,美国临床和实验室标准协会(CLSI,原NCCLS)将万古霉素对金黄色葡萄球菌的折点进行了更新,但并未对hVISA做出明确的定义,也未推荐确认hVISA的标准方法[1].目前,hVISA的准确检测仍存在困难,其分离率和临床意义尚不明确.为此,本研究对国际上常用的3种检测方法进行比较分析,并评价它们的可靠性和临床应用价值,旨在寻找一种适用于临床实验室检测hVISA的简便易行的方法.     

肺孢子虫体外培养的研究进展

肺孢子虫是引起肺孢子虫肺炎的病原体。20世纪80年代以来,随着AIDS的蔓延,肺孢子虫的感染率逐渐升高,因而引起了医学界的广泛关注。体外培养肺孢子虫至今仍是一个难题,为进一步研究它的生活史、致病机制及药物筛选带来了困难。为了解肺孢子虫培养研究工作所取得的成果,现将国内外在该方面的研究进展加以综述。     

MultiSite Gateway技术在疟原虫条件性基因打靶载体快速构建中的应用

目的构建可条件性敲除约氏疟原虫ebl基因的打靶载体。方法以约氏疟原虫基因组DNA为模板,PCR扩增EBL-3U和EBL-5U1、EBL-5U2+EBL.orf同源臂片段,利用MultiSite Gateway技术,完成若干DNA片段的定性重组,构建打靶载体pCHD-EBL-RFT,并对质粒酶切和测序鉴定。PCR扩增约氏疟原虫UIS4-5U片段,置换质粒PbUIS4/flp中原有同源臂,并通过位点特异突变技术,获取AvrII和NheI两种线性化位点,构建插入载体PyUIS4/flp。结果构建出打靶载体pCHD-EBL-FRT和PyUIS4/flp,酶切鉴定和测序分析正确。结论将MultiSite Gateway技术成功地用于疟原虫条件打靶载体的构建,建立了以MultiSite Gateway技术为基础的打靶载体构建体系。     

鸦胆子油乳抑制肺癌NCI-H460细胞的增殖及其机制

目的:探讨鸦胆子油乳在体外对人大细胞肺癌NCI-H460细胞的抑制作用及其机制。方法:以不同质量浓度鸦胆子油乳(2.5、5.0、10、20、40、80μg/ml)处理NCI-H460细胞,24、48、72h后收集细胞,MTT法检测鸦胆子油乳对NCI-H460细胞增殖的抑制作用;吉姆萨染色后光学显微镜下观察NCI-H460细胞形态学改变;流式细胞仪测定NCI-H460细胞凋亡率;caspase-3酶活性试剂盒检测NCI-H460细胞caspase-3酶活性。结果:鸦胆子油乳可剂量和时间依赖性抑制NCI-H460细胞的增殖,80μg/ml鸦胆子油乳作用72h时的抑制率达(91.07±1.60)%。鸦胆子油乳作用后,NCI-H460细胞呈现典型凋亡形态学改变;流式细胞术检测结果显示,10、20和40μg/ml鸦胆子油乳作用48h后,NCI-H460细胞凋亡率分别为(45.23±4.30)%、(54.14±3.09)%和(61.57±7.28)%(P<0.01)。鸦胆子油乳可剂量依赖性上调NCI-H460细胞caspase-3酶活性,40μg/ml鸦胆子油乳时caspase-3酶活性为(1.07±0.07)μmol/μg,是对照组的4.97倍(P<0.01)。结论:鸦胆子油乳可能通过活化caspase-3诱导NCI-H460细胞凋亡,抑制NCI-H460细胞增殖。