人类疾病的基因诊断策略与技术

基因诊断的问世使人类疾病的诊断从传统的表型诊断步入基因型诊断的新阶段，是诊断学领域的一次革命。相对于传统的表型诊断，基因诊断具有高特异性、高灵敏性、早期诊断性和应用广泛性等特点，因此逐步得到运用和普及。基因诊断不仅能对某些临床特定疾病做出诊断，而且能对肿瘤及其它多因素常见病(如心血管疾病和内分泌疾病等)进行易感性预测；可以对传染性及流行性疾病进行诊断和普查。以及对器官移植组织的HLA基因水平配型和法医学鉴定等。其中在遗传性疾病的诊断研究中的应用最为突出。目前不但用于产前诊断，     

人参皂苷Rh2对白血病HL-60细胞凋亡的诱导作用

目的探讨人参皂苷Rh2对人白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响。方法应用MTT法检测人参皂苷Rh2对HL-60细胞增殖的影响，采用DNA的片段化实验，观察人参皂苷Rh2对HL-60细胞凋亡的影响。结果G—Rh2能明显抑制HL-60细胞增殖，呈浓度依赖性关系；人参皂苷Rh2能明显诱导HL-60细胞凋亡，呈浓度和时间依赖效应，DNA的琼脂糖凝胶电泳分析可见凋亡特征性的DNA梯状图谱。结论G—Rh2主要通过有效抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡从而发挥其抗白血病效应。     

AKP染色鉴别组织内死活血吸虫虫卵的条件探索与效果观察

目的探索碱性磷酸酶(AKP)染色条件,观察其对宿主组织内死活血吸虫虫卵的鉴别效果。方法采用偶氮偶联法和NBT/BCIP两种AKP酶染色方法对血吸虫感染后第45 d鼠(未治疗组10只)和经吡喹酮治疗后3个月鼠(治疗组10只)的肝、肠组织内完整虫卵,冰冻切片虫卵和石蜡切片虫卵进行比较检测和分析;收集12份有近、远期变性虫卵的血吸虫病患者肠黏膜活检标本,进行虫卵染色,计数虫卵阳性数,评价两种AKP染色法对血吸虫死卵和活卵鉴定的效果。结果两种AKP染色方法对未治疗组小鼠组织内完整虫卵染色仅半数阳性,其阳性反应主要取决于完整虫卵是否裸露。未治疗组小鼠肠组织石蜡切片和冰冻切片偶氮偶联染色法阳性率分别为97.72%和92.47%,NBT/BCIP染色法阳性率分别为97.65%和98.49%;肝组织两种染色法的阳性率分别为81.17%、86.55%和74.36%、95.32%。在冰冻切片中,肝、肠组织偶氮偶联检测的敏感性均低于NBT/BCIP法;治疗组两法的阳性率均为0。12份临床标本,偶氮偶联法检出1例阳性,NBT/BCIP法检出3例阳性。结论 NBT/BCIP AKP染色法可用于鉴别组织切片中血吸虫虫卵的死活,但在实际应...     

重组逆病毒pRevTRE-E77.43转导小鼠后抗血吸虫感染作用

目的 探讨东方田鼠E77.43基因片段治疗日本血吸虫感染的生物学功能。 方法 构建pRevTRE?E77.43重组逆转录病毒载体，转染PA317细胞，用Hygromycin筛选后获得稳定表达的细胞株，并进行重组逆转录病毒的包装、浓缩与纯化。通过静脉或腹腔途径将制备的重组病毒注射到日本血吸虫感染模型小鼠体内，探讨目的基因在小鼠体内的表达以及体内治疗血吸虫感染的作用。结果 病毒注射动物机体7 d后目的基因就有表达，且一直能持续表达45 d以上。pRevTRE?E77.43诱导小鼠产生了31.0%的减虫率，高于pRevTRE的1.2%（[t = 3.524,P<0.01]）；pRevTRE?E77.43诱导小鼠产生了35.0%的减卵率，高于pRevTRE的0.9%（[t = 9.485,P<0.01]）。结论 pRevTRE?E77.43能对血吸虫感染模型小鼠产生一定程度的治疗效果，说明东方田鼠E77.43基因参与了东方田鼠抗日本血吸虫感染的生物学作用过程。     

湖南人群CYP1A1、GSTM1、GSTT1基因多态性与急性白血病易感性关系研究

目的分析生物代谢酶Ⅰ相酶细胞色素P4501A1（CYP1A1）和Ⅱ相酶谷胱甘肽转硫酶GSTM1、GSTT1基因的遗传多态在湖南人群急性白血病患者和健康人群中的分布。方法采用病例对照研究方法，应用聚合酶链反应及聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术对112例急性淋巴细胞性白血病（ALL）患者和120例急性非淋巴细胞性白血病（ANLL）患者以及204名健康个体的CYP1A1 MspⅠ多态（3801 T—C突变）、GSTM1和GSTT1等基因的多态分布进行分析。结果ALL组与ANLL组的CYP1A1基因3801位点等位变异的频率分别为74．1％、70．8％，高于对照组（63．3％），但其差异无统计学意义（P〉0．05）；ALL组GSTM1缺失基因型（GSTM1-／-）的频率为60．7％，与对照组（55．4％）比较差异无统计学意义（P〉0．05）；ANLL组GSTM1-／-基因型频率为68．3％，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。ALL组、ANLL组及对照组的GSTT1缺失基因型（GSTT1-／-）的频率分别为50．9％、55．0％和49．0％，病例组与对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。GSTM1-／-和GSTT1-／-联合基因型在ALL、ANLL患者组和对照组中的频率分别为33．0％、40．0％和27．5％，其中ANLL组与对照组比较，其差异有统计学意义（P〈0．05）。同时携带CYP1A1 MspⅠ多态突变基因型（杂合突变型或纯合突变型）与GSTM1-／-、GSTT1-／-基因型的个体患ANLL的风险增加（OR=1．890，95％CI：1．084～3．295）。结论单一的CYP1A1 MspⅠ多态突变基因型或GSTT1-／-基因型与急性白血病易感性不相关；GSTM1-／-基因型及其与GSTT1-／-基因型、CYP1A1 MspⅠ多态突变基因型（杂合突变型或纯合突变型）同时存在时增加患ANLL的风险。提示GSTM1-／-可能是ANLL发病的易感因素之一，且与其他缺陷基因型存在协同作用。     

苦参促粒系造血机制及对白血病HL—60细胞的诱导凋亡作用

目的：进一步探讨苦参促粒系造血机制及新的抗白血病作用机理。方法：建立实验性环磷酰胺（Cy:0.08g/kg)低白细胞血症小鼠模型,观察苦参对粒系造血的影响和对白血病HL－60细胞的诱导凋亡作用。结果：苦参对Cy所致外周血白细胞和中性粒细胞数下降具有对抗和促恢复作用（P＜0．01）,能增加骨髓有核细胞、粒－巨噬系祖细胞（CFU－GM）数（P＜0．01）促进CFU－GM增殖并诱导其向粒系、巨噬系分化,且其促粒系造血作用与鲨肝醇一致。此外,苦参与明显诱导白血病HL－60细胞凋亡,呈药物浓度－粒应关系。结论：苦参有望用于防治化疗所致的白细胞减少及通过诱导细胞凋亡发挥其抗肿瘤作用。     

主动性思维教学模式在神经病学教学中的运用

在神经病学临床教学中运用医学主动性思维的教学模式，以提高教学质量。选择1999级临床医学专业2班为实验对象，分为改革组和非改革组，在神经病学临床教学中采用不同教学模式教学并进行对比研究。结果在主动性思维临床医学教学模式下，学生成绩较好，学习热情高涨，创新精神和实践能力增强，提高了教学质量。     

益阳市城郊献血者丙型肝炎血清学检测分析

丙型肝炎为一世界性公共卫生问题。据近年全国各地血清流行病学调查显示 ,我国HCV抗体阳性率约 3%～ 5 % [1～ 6 ] 。与慢性乙型肝炎比较 ,丙型肝炎慢性化比较隐蔽 ,症状不明显 ,很容易被忽视 ,造成很多患者在出现肝硬化甚至肝癌时才被发现[7] 。丙型肝炎病毒是输血后肝炎主要的病原 ,因此加强对输血人群血清中丙型肝炎病毒的监测具有重要的现实意义。为了解本市部分输血员丙型肝炎感染情况 ,我们对益阳市赫山、朝阳区献血员进行了血清流行病学调查 ,现将结果报告如下。1　材料与方法1.1　调查对象随机抽取龙光桥镇、千家洲乡、黄泥湖乡、…     

人FoxA1 shRNA载体构建与检测

目的构建有效的针对人FoxA1基因的shRNA干扰载体,并验证其干扰效果。方法设计合成3对针对人FoxA1基因的和1对无同源性的shRNA片段,将合成的shRNA片段插入到干扰载体pRNAT-U6.1/Neo中,经过酶切和测序验证,成功构建人FoxA1基因的shRNA和空白对照载体。将各干扰载体和空白载体转染人正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)和胃癌细胞(SGC-7901),Realtime RT-PCR和Western-blotting检测干扰载体的干扰效率。结果①酶切和测序验证均表明各shRNA载体构建成功。将空载体及各干扰载体分别转染人正常胃黏膜细胞(GES-1)和胃癌细胞(SGC-7901)发现,和空白对照组相比,3组干扰载体能够从mRNA和蛋白表达水平明显抑制FoxA1的表达,但是3组质粒的抑制效率有一定的差异,以3号质粒对Foxa1的干扰效率最强。结论成功构建了三个有效的针对人FoxA1基因的shRNA干扰载体,三组质粒都能有效地抑制FoxA1在GES-1细胞和SGC-7901细胞中的表达。     

日本血吸虫不同发育阶段抗原与抗LSA兔血清的交叉反应分析

目的　为进一步阐明水蛭与日本血吸虫抗原交叉性机理提供依据。　方法　制备日本血吸虫子胞蚴抗原、尾蚴抗原、肝期童虫抗原、雌 (雄 )成虫抗原、虫卵抗原 ,采用Westernblot方法对制备的日本血吸虫不同发育阶段抗原与水蛭可溶性抗原 (LSA)免疫兔血清分别进行免疫印迹反应 ,分析其交叉性。　结果　LSA免疫兔血清能识别日本血吸虫不同发育阶段抗原 ,且所识别的抗原成分有明显差异 ,雌性成虫抗原和雄性成虫抗原分别有 3条和 2条蛋白组分可被LSA免疫血清识别 ,而不含抗虫卵和抗尾蚴抗体。　结论　在LSA成分中与血吸虫的共同成分主要存在于成虫中 ,LSA免疫血清中含有较多的抗雌性成虫抗体 ,而雄虫次之。