三维试验法检测鲍曼不动杆菌产超广谱β内酰胺酶和AmpC酶

为了解我院鲍曼不动杆菌对β 内酰胺类抗生素耐药原因,我们采用三维试验法对临床分离的菌株进行超广谱β 内酰胺酶(ESBLs)和AmpC酶检测。一、材料和方法1.菌株来源及鉴定　 60株菌株均分离自我院 2000年 6月~2002年 12月住院患者临床标本,分别为痰液 33份、创伤伤口分泌物 13份、烧伤创面分泌物 10份、气管切开口分泌物 2份、中段尿和血液各 1份,采用法国生物梅里埃公司API20NE鉴定菌种。标准菌株为大肠埃希菌(ATCC25922)和铜绿假单胞菌 (ATCC27853);肺炎克雷伯菌(ATCC700603) (产SHV 18型ESBLs)和阴沟肠杆菌(029M) (去阻…     

肺炎克雷伯菌中检出16S rRNA甲基化酶基因mtB及β内酰胺酶基因blaLAP-2

肺炎克雷伯菌(klebsiella pneumoniae,Kpn)是医院感染病原菌中最常见菌种之一,对包括广谱β内酰胺类、氮基糖苷类和氟喹诺酮类在内的常用抗菌药物呈现多重耐药性日趋严重,甚至出现了对碳青霉烯类抗生素耐药的临床分离株[1-2],导致抗菌感染治疗相当困难.     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子遗传标记及β-内酰胺类抗生素耐药相关基因研究

目的 了解临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌（IRPa）中Ⅰ类整合子及β-内酰胺类抗生素耐药相关基因存在状况。方法 自临床分离28株IRPa，采用聚合酶链反应及序列分析的方法检测Ⅰ类整合子遗传标记（intll和qacEace△I-sull基因）及18种β-内酰胺类抗生素耐药相关基因。结果 28株中，intll、qacEΔ1-sull、blaTEM、blaoxA-30群和blaCARB基因阳性株数（％）分别为21株（75．0％）、24株（85．7％）、20株（71．4％）、1株（3．6％）和1株（3．6％），经序列分析分别确认为blaaxA-J0（GenBank注册号：AY841859）和blaCARB-3,25株（89．3％）oprD基因缺失，blaIDM、blaVIM、blaSHV、blaHR、blaVEB、blaCES、blaMIR、blaDHA、blaSPM、blaGIM、blaaxA，群、blaoxA-2群、blaBEL-1、blaCTX-M-1群基因均阴性。结论 临床分离的IRPa中Ⅰ类整合子携带率很高，至少存在blaTEM、boxA-10和blaCARB-3种β-内酰胺酶基因，oprD基因缺失突变是其对亚胺培南耐药的主要原因。     

肠球菌属产氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的：了解肠球菌耐氨基糖苷类药物的耐药机制和耐药基因流行状况。方法：对22株肠球菌进行了氨基糖苷类修饰酶aac(6’)／aph(2”)、aph(3’)-Ⅲ和ant(6)-Ⅰ基因的研究。结果：22株肠球菌中9株为高浓度庆大霉素耐药，14株为高浓度链霉素耐药；aac(6’)／aph(2”)、nph(3’)-Ⅲ和ant(6)-Ⅰ基因阳性分别为15株(68．2％)、13株(59．1％)和10株(45．5％)。对2株粪肠球菌和2株屎肠球菌进行3种基因的聚合酶链反应阳性产物测序。测得序列与GenBank已登录的序列作比较结果一致。本研究测得序列并已登录GenBank(登录号分别为AY602207、AY602208、AY602210、AY602211、AY602212、AY602213、AY626918、AY626919、AY626921、AY626922、AY626923)。结论：提示国内肠球菌产氨基糖苷类修饰酶的比率已较高。     

一种新基因型TEM-128β-内酰胺酶的发现及其临床意义

目的 分析产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)鲍曼不动杆菌TEM型β-内酰胺酶(BLA)的编码基因并确定其亚型。方法 采用聚合酶链反应(PCR)扩增BLA编码基因TEM、SHV、OXA、CTX—M-1、CTX—M-2、CTX—M-9、PER和VEB片段，双脱氧链终止法测定核苷酸序列、确定亚型。结果临床分离的鲍曼不动杆菌HZ38株产生TEM型BLA，其扩增片段含1049个核苷酸，核苷酸及相应的氨基酸序列经Gen—Bank查询无相同序列，为新发现的一种BLA TEM-128型(GenBank注册号：AY359287)。结论 临床分离的鲍曼不动杆菌HZ38株所产BLA为TEM-128亚型，为一种新发现的新型BLA。     

大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌traA、tnp513基因研究

目的为了解大肠埃希菌(ECO)、肺炎克雷伯菌(KPN)traA基因和tnp513基因携带状况。方法应用PCR检测ECO、KPN traA基因和tnp513基因。结果29株ECO traA基因阳性24株(82.8%),tnp513基因阳性24株(82.8%);25株KPN traA基因均阴性,tnp513基因阳性23株(92.0%)。结论ECO、KPN耐药性高可能与traAt、np513高携带率有关。     

烧伤患者创面细菌感染的分布及其耐药性分析

目的:探讨烧伤患者创面细菌感染的分布特点及耐药性。方法:对326例烧伤患者不同阶段的创面分泌物进行多次采集并进行细菌培养和鉴定,对革兰阴性及阳性菌的耐药性进行检测。结果:检出革兰阴性杆菌219株,病原菌的69.52%,比例最高的为铜绿假单胞菌(25.71%);革兰阳性球菌占25.08%,比例最高的为金黄色葡萄球菌(9.52%)。铜绿假单胞菌对复方磺胺甲口恶唑的耐药率最高(97.45%),对阿米卡星的耐药率最低(21.12%);鲍曼不动杆菌对氨曲南和头孢噻肟的耐药率最高(均为100.00%),对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低(29.59%);大肠埃希菌对复方磺胺甲口恶唑的耐药率最高(79.48%),对亚胺培南的耐药率最低(0.00%);肺炎克雷伯菌对哌拉西林的耐药率最高(88.26%),对美罗培南的耐药率最低(1.42%)。金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌对青霉素的耐药率均最高(94.62%,96.37%),对利奈唑胺和万古霉素的耐药率最低(均为0.00%)。结论:烧伤患者创面感染的病原菌类型主要为革兰阴性菌,并且耐药现象日益严重,临床上应掌握病原菌的分布特点并及时监测耐药情况,以指导合理用药,控制再次感染。     

铜绿假单胞菌亚胺培南及消毒剂耐药相关基因研究

目的了解临床分离的对亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中金属β内酰胺酶基因(blaIMP和blaVIM)、外膜孔蛋白D2(OprD2)基因(oprD)、消毒剂-磺胺耐药相关基因(qacE△1-sulⅠ)存在状况.方法采用ATB′PSE 5药敏试验条板微量肉汤法测定28株铜绿假单胞菌对14种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)技术及序列分析的方法检测耐药基因.结果该28株铜绿假单胞菌对亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦、庆大霉素、妥布霉素和复方新诺明均完全耐药,对哌拉西林/他唑巴坦的敏感率最高为64.3%,其余的耐药率在57.1%～92.9%之间.28株Pa中blaIMP和blaVIM基因均阴性,25株(89.3%)oprD基因缺失,24株(85.7%)qacE△1-sulI基因阳性.结论浙江湖州解放军第98医院临床分离的对亚胺培南耐药铜绿假单胞菌多重耐药严重,oprD基因缺失是其对亚胺培南耐药的重要原因,qacE△1-sulI基因携带率很高.     

颅脑外伤病人痰液中鲍曼不动杆菌gyrA基因突变与环丙沙星耐药关系研究

目的了解分离自颅脑外伤病人痰液中鲍曼不动杆菌gyrA基因突变与环丙沙星耐药性的关系。方法用ATB药敏试验条板微量肉汤法测定27株鲍曼不动杆菌对14种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析gyrA基因序列。结果27株菌中除HZ16号菌株对环丙沙星敏感外,其余26株均耐药。序列分析表明HZ16号菌株gyrA基因无突变,其序列已登录GenBank(accessionAY642140),其余26株耐药菌均存在gryA基因突变,导致耐喹诺酮决定区(QRDR)第83位的丝氨酸被亮氨酸取代。其中HZ28号菌株gyrA基因序列也已登录(GenBankAY642141)。结论gyrA基因突变是导致分离自颅脑外伤病人痰液中鲍曼不动杆菌对环丙沙星耐药的主要原因。