改良ELISA用于测定痢疾菌及EIEC毒力的研究

在痢疾菌、EIEC的研究和鉴定工作中,常用豚鼠角膜试验或细胞学方测定其毒力。但这些方法或需要动物或需要一定的细胞培养技术,而且费时。我们参照文献,初步建立了用改良的酶免疫吸附试验测定上述菌株毒力的方法。用有毒力的痢疾福氏2a-153和EIEC     

Vero细胞检测出血性大肠杆菌O157:H7毒素的方法研究

目的建立用Vero细胞检测大肠埃希菌毒素的方法。方法用两种不同的培养基培养10株大肠杆菌和1株痢疾志贺杆菌,将其培养物上清和菌体裂解液加入Vero细胞中,观察对Vero细胞的毒性作用。结果两种培养基培养大肠杆菌产生的上清对Vero细胞的毒性作用差异不大,大肠杆菌培养上清的毒性作用大于菌体,而痢疾志贺菌菌体的毒性作用大于上清。结论Vero细胞毒性检测方法可以用于检测出血性大肠杆菌细胞毒素。     

宋氏I相/福氏~(1b)痢疾双价抗原菌株的构建(简报)

1980年Kopecko等人证明了凡是强毒宋内氏痢疾杆菌都含有一个非诱动性的120Md大质粒,它编码宋氏Ⅰ相抗原并与该菌侵入上皮细胞的关系非常密切。用转座子插在大质粒上使其获得抗药性遗传标记,再通过诱动系统诱动,可将此大质粒转移给适当的受体菌株。     

宋氏I相/福氏1b痢疾双价抗原菌株的构建

以菌体内重组方法将脱失了部分毒力基因片段的宋氏痢菌Ⅰ相抗原质粒诱动到已脱失140Md毒力质粒的福氏痢菌1b中,构建成兼具福氏及宋氏“O”抗原的二价菌株。该菌株不含编码卡那霉素抗性基因的Tn5;连续传25代仍对宋氏及福氏1b痢菌O抗血清呈凝集反应;质粒电泳图显示该二价菌株拥有供体菌赋予的75Md的质粒带。     

伤寒Vi多糖菌苗流行病学效果

本文对我国伤寒Ｖｉ多糖菌苗研制协作组制备的伤寒Ｖｉ多糖菌苗进行接种反应及流行病学效果观察，并以其稀释液作为对照，对７７７名接种者的反应观察结果表明，菌苗组发热轻、中反应率分别为１６．９３％和０．０５％，对照组分别为１５．０１％和０．０３％，两者发热反应率无显著差异。菌苗组仅出现两例局部轻反应。对８１５０６名接种者的流行病学观察，以血培养伤寒杆菌阳性作为病人诊断标准，菌苗的保护指数为３．４９，保护率为７１．３５％，总的保护指数为４．５８，保护率为７８．１７％。临床资料显示，接种组发病者的发热强度明显低于对照组发病者。笔者认为伤寒Ｖｉ多糖菌苗全身、局部反应轻微，安全性好，保护率较高，发病者可降低发热强度，且初免只需注射一针，是一种值得推广使用的新一代菌苗     

大肠杆菌O157:H7 VT2毒素基因的克隆及测序

目的 克隆出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７的ＶＴ２毒素基因。方法 利用ＰＣＲ技术从出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７染色体基因组中扩增出ＶＴ２毒素基因。并连接至ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,构建重组质粒ｐＧＶＴ２并进行序列测定。结果与结论 酶切分析表明重组质粒含有ＶＴ２毒素基因,核苷酸序列分析表明,其序列与ＧｅｎＢａｎｋ上Ｏ１５７：Ｈ７的ＶＴ２毒素基因一致。     

不同梅毒螺旋体基因重组抗原酶联免疫试验比较

目的 对单一梅毒螺旋体（Treponema palidum,Tp）基因重组抗原Tp47、Tp42或TP17及联合3种基因重组抗原（Tp47、Tp42和Tp17）酶联免疫试验（enzyme immunoassay,EIA）进行比较。方法 分别用3种单一Tp基因重组抗原Tp47、Tp42或Tp17EIA法，检测11份梅毒血凝试验Tp抗体阳性和28份阴性血清，并与联合应用3种基因重组抗原（Tp47、Tp42和Tp17）EIA法比较。结果 单一基因重组抗原Tp47、Tp42和Tp17EIA法的灵敏工分别为100％（11／11）、100％（11／11）和90．9％（10／11）特异度分别为96．4％（27／28）、100％（28／28）和96．4％（27／28）；联合应用3种基因重组抗原EIA法的灵敏度和特异度分别为100％（11／11）和100％（28／28）。结论 单一Tp基因重组缺的EIA法用于梅毒诊断存在一定的假阳性和假阴性反应，联合应用3种基因重组抗原（Tp47、Tp42和Tp17）EIA法的灵敏度高于单一Tp基因重组抗原EIA法。     

梅毒密螺旋体Tp47重组蛋白的表达及其应用

目的：在大肠埃希菌中表达梅毒密螺旋体（treponema pallidum,Tp）Tp47重组蛋白，用其建立诊断梅毒的酶联免疫法（enzyme immunoassay,EIA）。方法：应用聚合酶链反应法（PCR）从Tp全基因组中扩增目的片段Tp47，并将其克隆到表达载体pET-30a中，构建重组质粒pET-30a-Tp47。在大肠埃希菌中表达重组蛋白Tp47，亲和层析柱纯化，建立EIA法，检测血清中抗－Tp抗体。结果：获得了Tp47基因重组蛋白的高效表达，该重组蛋白存在于细菌上清中，占全菌体蛋白12％左右，分子量约39kDa。蛋白印迹法（western blot,WB）显示，Tp47重组蛋白具有良好的抗原性。用Tp47重组蛋白建立EIA法，检测11份梅毒血凝试验阳性和28份阴性血清，灵敏度为100％（11／11），特异性为96．4％（27／28）。结论：Tp47重组蛋白EIA可用于梅毒的诊断。