云南省2007--2009年流行性腮腺炎病毒SH和HN基因的遗传特征分析

目的 分析2007-2009年云南省腮腺炎病毒(MuV)分离株的SH和HN遗传特征.方法 采用反转录-聚合酶链反应从Vero细胞分离的病毒株基因组中扩增出SH基因和HN基因,测序后用Mega4.1软件分析其遗传特征.结果 云南省分离14株MuV的SH基因其核苷酸和氨基酸同源性为98.3%～100.0%和96.5%～100.0%,与其他省份比较其同源性为92.6%～99.4%和87.7%～100.0%,其中Wsh1和Wsh2与其他F基因型差异较大;与疫苗株同源性为84.5%～85.1%和77.2%;与其他基因型同源性为83.4%～90.9%和70.1%～86.0%.6株MuV分离株的HN基因与核苷酸和氨基酸同源性分别为99.3%～99.5%和99.1%～99.7%;与中国分离株SP株的核苷酸和氨基酸同源性均为99.8%;与其他基因型同源性为94.7%～96.8%和95.5%～99.1%;与疫苗株的同源性为92.4%～93.2%和95.5%～96.4%.结论 2007-2009年云南省流行的MuV均为F基因型;其HN基因比SH基因保守.

Abstract：

Objective To analyze genetic characterization of the small hydrophobic and hemagglutinin-neuraminidase genes of mumps virus(MuV)isolated in Yunnan province,China from 2007 to 2009.Methods Fourteen MuV strains were isolated in Yunnan,China from 2007 to 2009.Using RT-PCR,the SH gene fragments contained 316 nucleotides in all strains and HN gene of six strains were sequenced.The sequences were aligned with other mumps virus sequences downloaded from GenBank using Mega 4.1 software.Results Fourteen isolated strains were closely related to other reference strains of F genotypes.In SH gene,the homology of nucleotide and amino acid among the fourteen isolated strains were 98.3%-100.0%and 96.5%-100.0%,respectively,and 92.6%%-99.4%and 87.7%-100.0% of homology when compared with that of strains isolated from other provinces in China,respectively.Wsh1 and Wsh2 strains had less homology when compared to other strains of F genotypes.The fourteen strains had homology of 84.5%-85.1%and 77.2%compared to vaccine strains on nucleotide and amino acid,respectively,and had homology of 83.4%-90.9% and 70.1%-86.0% compared to that of other genotypes.In HN gene,the homology of nucleotide and amino acid among the six isolated strains were 99.3%-99.5% and 99.1%-99.7%,respectively,and also 99.8% and 99.8% of homology respectively when compared to the SP strain in China.All the six strains had homology of 92.4%-93.2% and 95.5%-96.4% when compared to the vaecine strains on nucleotide and amino acid,respectively,and had homology of 94.7%-96.8% and 95.5%-99.1%compared to other genotypes.Conclusion Fourteen strains isolated in Yunnan from 2007 to 2009belonged to F genotype of MuV while the HN gene seemed more conservative than SH gene.     

一株引起无菌性脑膜脑炎柯萨奇B组3型病毒的分离和VP1基因分析

目的对一株从无菌性脑膜脑炎患者中分离到的柯萨奇B组3型病毒(coxsackie virus B3,CVB3)分离株KMA103-09进行VP1区的基因特征分析。方法采用Hep-2、RD细胞对患者粪便标本进行病毒分离,肠道病毒组合血清进行鉴别,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒目的片段,测序后进行VP1基因分析,用Mega4.1等软件分析处理。结果肠道病毒组合血清鉴别为柯萨奇病毒B组3型(Cox.B3),从病毒性脑膜脑炎患者粪便标本中,分离到CVB3,其VP1区的核苷酸长度为849bp,未发现核苷酸插入与丢失。与山东04433/SD/CHN/2004/CB3株、山东05280/SD/CHN/2005/CB3株及山东YZ127/SD/CHN/2005/CB3株氨基酸同源,与其余国内分离株同源性高于为99.29%,与国外毒株的同源性为95.41%~96.47%。在进化树上与AM06HZ/SD/CHN/2006/CB3株显示在同一个分支上。结论分离的肠道病毒为柯萨奇病毒B组3型(Cox.B3),分离株(KMA103-09)VP1区变异较小。     

慢病毒介导的HIF-1α mODD在肿瘤细胞中的高表达

目的在肿瘤细胞中利用重组慢病毒介导缺氧诱导因子-1α突变体(HIF-1α mODD)在正常氧压下高表达,以模拟肿瘤缺氧微环境下肿瘤细胞中HIF-1α的高表达,为研究HIF-1介导的缺氧信号通路及其在肿瘤细胞中的作用提供实验模型。方法将含HIF-1αmODD基因片段的慢病毒表达质粒pWPI GW/HIF-1α mODD,与pVSVG及pSPAX质粒共转染人胚肾293T细胞,包装制备重组慢病毒,重组病毒经过纯化后直接感染GLC、H157和YTMLC等肿瘤细胞,并在正常氧压条件下培养,通过RT-PCR、免疫印迹等方法检测HIF-1α mODD在细胞中的表达水平。结果重组慢病毒介导HIF-1α mODD在GLC、H157和YTMLC细胞内获得高表达。结论成功模拟了肿瘤细胞在缺氧微环境下高表达HIF-1α的情况,为体外研究HIF-1α在肿瘤血管新生及肿瘤生长中的作用提供途径。     

肿瘤疫苗研究进展

近年来，为了有 效地诱导肿瘤免疫应答，达到预防，治疗肿瘤的目的，许多学者用不同方法在制备肿瘤疫苗方面做了大量的实验研究，并取得了一定进展。     

人源化小鼠及其在病毒感染研究中的应用

人源化小鼠是指将人体细胞或组织移植入免疫缺陷小鼠,即保证不会产生免疫排斥,又可保证移植入的人体细胞/组织在小鼠体内作为合适的基质,适用于人体病原的感染及增殖,相较于普通动物模型可以获得更接近人体的较为可信的实验数据.目前人源化小鼠已经在病毒感染机制、诱导的免疫应答、抗病毒药物筛选及疫苗研发、基因治疗等方面的研究中获得应用,尤其对一些高度宿主特异性的病毒如HIV、HCV、DENV具有重大的研究价值.     

EV71毒力相关位点研究进展

肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)是引起手足口病(hand-foot-and-mouth disease,HFMD)的主要病原体之一,主要通过粪口途径以及与患者的病变部位、唾液等直接接触而感染,感染对象主要为5岁以下的低龄儿童.其所引起的临床症状以温和的HFMD为主,表现为手、足及口腔黏膜的疱疹样病变,多数可自愈,但在少数病人中则可引起包括无菌性脑膜炎(aseptic meningitis)、脑干脑炎(brainstem encephalitis)、类脊髓灰质炎麻痹(poliomyelitis-like paralysis)等神经系统综合症及心-肺功能衰竭综合症在内的严重的临床症状.     

粪便中脊髓灰质炎病毒IgA的ELISA检测方法比较

脊髓灰质炎是由脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型引起的传播广泛且危害极大的急性传染病.黏膜免疫在抗脊髓灰质炎免疫应答过程中颇为重要.     

2009年昆明地区流行的肠道病毒71型基因特征分析

目的分析2009年昆明地区肠道病毒71型分离株VP1的遗传特征。方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法从Vero细胞分离的病毒株基因组中扩增出VP1基因,并测序;分别用Mega4.1软件分析其遗传特征。结果中国昆明分离到的6株肠道病毒71型VP1基因的核苷酸和氨基酸同源性为95.4%～97.9%和97.3%～99.7%,与其他C基因型C1、C2、C3和C5的VP1的同源性为87.9%～89.1%和98.3%～99.1%,而与C4基因型的同源型为92.6%～98.5%和97.0%～99.7%,与SHZH98的同源性最低为92.6%和97.0%,与其他基因型的同源性为82.7%～84.6%和96.0%～97.6%。结论 2009年云南昆明流行的肠道病毒71型均为C4基因型;其VP1基因保守性较好。     

HSV-1 VP22和hIL-18增强HBV DNA微球疫苗诱导的小鼠体液免疫应答

为了研究HSV-1VP22和hIL-18作为分子佐剂对HBVDNA微球疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响,HSV病毒经Vero细胞培养增殖后,提取病毒DNA,PCR扩增VP22编码基因。从人PBMC中提取总RNA,RT-PCR扩增hIL-18。VP22、hIL-18按不同需要插入pcDNA3.1-S,构建成3种质粒:pcDNA3.1-VP22-S、pcDNA3.1-S-IL-18、pcDNA3.1-VP22-S-IL-18。制备DNA壳聚糖微球疫苗,鼻腔免疫小鼠,同时裸质粒DNA肌注小鼠,ELISA检测小鼠血清IgG、粪便sIgA水平。结果,与pcDNA3.1-S相比,pcDNA3.1-VP22-S、pcDNA3.1-S-IL-18、pcDNA3.1-VP22-S-IL-18均能引起小鼠血清IgG、粪便sIgA水平升高。在鼻腔免疫实验中,pcDNA3.1-VP22-S、pcDNA3.1-S-IL-18、pcDNA3.1-VP22-S-IL-18免疫组的血清IgG水平均在第8周达到最高,并且与pcDNA3.1-S相比,抗体水平有差异(P<0.05)。研究结果表明,VP22和hIL-18能够增强乙肝DNA疫苗的体液免疫应答;制备的DNA微球疫苗经鼻腔免疫后,能够诱导黏膜免疫应答。     

用富含CpG的质粒初免并以蛋白及CpG寡核苷酸和Quil A加强免疫可诱导强的抗HCV NS3细胞及体液免疫应答

丙型肝炎病毒(HCV)中具有丝氨酸蛋白酶活性和解旋酶活性的NS3蛋白是最保守的蛋白之一；另外，与慢性感染病人相比，在感染恢复病人体内更易于检测到较强的NS3特异性免疫应答，使得NS3成为一种受到关注的候选疫苗。