日本脑炎病毒受体功能缺陷细胞的筛选和鉴定

目的筛选并鉴定日本脑炎病毒（JEV）受体功能缺陷的BHK-21细胞突变株。方法用化学诱变剂ICR-191人工诱变JEV易感细胞系BHK-21,经JEV攻击,对存活细胞克隆化,RT-PCR筛选JEV RNA阴性细胞,用流式细胞术,免疫荧光和空斑实验鉴定其对JEV的敏感性。结果筛选到1株JEV RNA阴性细胞3A10-3F。流式细胞术检测3A10-3F细胞与JEV的结合率为2.10%,免疫荧光和空斑实验证实其对JEV感染有相当程度的抵抗,在JEV感染复数MOI 1时3A10-3F细胞培养上清中JEV最高滴度比BHK-21细胞中JEV最高滴度下降2个数量级。结论用化学诱变法筛选到1株JEV受体功能缺陷细胞,为进一步鉴定JEV受体,深入研究JEV致病机理提供了有益线索。     

噬菌体表达短肽模拟乙脑病毒糖蛋白的研究

为研究日本脑炎病毒 (JEV )E蛋白模拟肽 ,将抗JEVE蛋白的mAb 2H4淘筛噬菌体 15肽库。经夹心ELISA、竞争ELISA鉴定后 ,随机挑取 10个阳性克隆 ,测序并与JEVE蛋白同源比较。将阳性噬菌体免疫小鼠 ,检测血清中特异性抗体。ELISA结果显示筛选到的噬菌体能特异地与mAb 2H4结合 ,并且这种结合可被JEV天然抗原所竞争抑制。 10个阳性克隆的氨基酸序列相同 :—RQDPQWPYANSTIAR— ,同源分析得到的序列STXAR可能为mAb 2H4识别的模拟表位。阳性噬菌体表达的 15肽能够刺激小鼠产生特异性抗体。该噬菌体表达短肽模拟JEVE蛋白的部分抗原性。     

SARS冠状病毒核衣壳蛋白的重组表达及其单克隆抗体的制备

目的:表达SARS冠状病毒核衣壳蛋白(N蛋白),并以表达产物为免疫原制备特异性单克隆抗体(mAb).方法:采用RT PCR方法,从灭活的病毒抗原标本中扩增编码N蛋白的基因.测序确认后,再亚克隆至原核表达载体中.从SDS PAGE凝胶中 回收原核表达产物后免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性mAb.结果:从标本中扩增出1269bp的DNA,测序结果证实 为N蛋白基因.将该基因克隆至原核表达载体中后,在大肠杆菌中获得了较好的表达.表达产物经SDS PAGE后,在Mr约为 43000处可见1条明显的诱导表达带.Westernblot的结果表明,该电泳带与SARS患者的恢复期血清呈特异的免疫反应.从 SDS PAGE凝胶中回收表达产物并免疫BALB/c小鼠,制备出3株抗N蛋白的mAb.这些mAb与SDS PAGE凝胶上Mr约为 43000的蛋白带也呈现很强的免疫反应.结论:所获的重组N蛋白及特异性mAb,将为进一步建立SARS病毒感染早期诊断的 方法奠定了基础.     

真核表达单纯疱疹病毒糖蛋白模拟表位mgC及其基因免疫效果的观察

目的 鉴定单纯疱疹病毒（HSV）糖蛋白C(gC)一个短肽模拟表位mgC基因作为HSV DNA表位疫苗的可能性。方法 将mgC基因克隆入真核载体pcCNA3.1中,并在CHO细胞中表达,免疫荧光法鉴定表达效果。DNA免疫不同种属小鼠,ELISA法观察HSV gC特异结合抗体的诱生。结果 含mgC的真核载体在哺乳动物细胞中可以成功表达外源蛋白。重组载体DNA在BALB／c小鼠体内可诱导抗天然HSV gC蛋白的抗体,而在C57BL鼠体内未见明显的抗体反应。结论 成功构建了可表达模拟表位mgC的真核表达载体。证明了应用gC模拟短肽基因作为DNA免疫的基因源是可行的,但其对不同种属动物的反应性不同,提示DNA免疫还应针对不同免疫对象调整免疫策略。这一研究为HSV多表位组合多肽疫苗的研制提供了一个新的备选组份。     

从噬菌体15肽库中筛选乙脑病毒糖蛋白模拟肽

目的 用抗JEVE蛋白的mAb2H4筛选噬菌体15肽库,以研究JEVE蛋白模拟肽。方法 用生物素标记的mAb2H4,对噬菌体随机15肽库进行3轮筛选,经ELISA鉴定后,随机挑战取10个阳性噬菌体克隆测序,并与JEVE蛋白进行同源性比较,结果 筛选到的噬菌体能与mAb2H4特异地结合,并且这种结合可被天然JEV抗原所抑制,10个阳性噬菌体克隆的氨基酸序列相同,均为RQD-PQWPYANSTIAR,同源分析表明,在JEVE蛋白不同区域有两个同源性较高的序列：STXAR和WXXAXST,阳性噬菌体展示肽了能与抗天然JEV抗原的鼠血清产生特异性反应。结论 筛选的该噬菌体克隆展示肽可模拟JEVE蛋白的部分抗原性。     

蚊传黄病毒的蚊虫细胞受体研究现状

研究日本脑炎病毒、登革病毒和西尼罗病毒这三种蚊传黄病毒在蚊虫细胞上的受体特性及功能,对于最终揭示这三种蚊传黄病毒的致病机理,切断蚊传黄病毒传播途径具有重要的意义.本文介绍了这三种蚊传黄病毒相似的受体结合蛋白的结构与膜融合机制,综合论述了在C6/36细胞上受体研究的进展,推测这三种蚊传黄病毒可能在蚊虫细胞上有相同的受体分子.     

从噬菌体15肽库中筛选乙脑病毒糖蛋白模拟肽

目的　用抗 JEV E蛋白的 m Ab 2 H4筛选噬菌体 15肽库 ,以研究 JEV E蛋白模拟肽 .方法　用生物素标记的 m Ab 2 H4,对噬菌体随机 15肽库进行 3轮筛选 .经 EL ISA鉴定后 ,随机挑取 10个阳性噬菌体克隆测序 ,并与 JEV E蛋白进行同源性比较 .结果　筛选到的噬菌体能与 m Ab 2 H4特异地结合 ,并且这种结合可被天然 JEV抗原所抑制 . 10个阳性噬菌体克隆的氨基酸序列相同 ,均为 RQDPQWPYANSTIAR.同源分析表明 ,在 JEV E蛋白不同区域有两个同源性较高的序列 :STXAR和WXXAXST.阳性噬菌体展示肽也能与抗天然 JEV抗原的鼠血清…     

含日本脑炎病毒pre—M／E蛋白基因真核表达质粒的构建及…

本文作者将日本脑炎病毒（ＪＥＶ）的前膜蛋白和囊膜蛋白（ｐｒｅＭ／Ｅ）的基因插入到真核表达载体ｐＳＧ５中，构建了重组表达载体ｐＳＧＪＥ。用其体外转染地鼠肾细胞ＢＨＫ－２１，经间接免疫荧光法（ＩＦＡ）检测，证实了ＪＥＶ－Ｅ的瞬时，大量制备和纯化重组质粒，经肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，结果显示该重组质粒可明显促进小鼠在受到ＪＥＶ活病毒攻击中特异性抗体的产生。     

编码HIV-1 Pr42~(gag)的杆状病毒转移载体的构建及鉴定

本文作者采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ），从ＨＩＶ－１ｃＤＮＡ克隆ＢＨ１０中扩增出Ｐｒ４２ｇａｇ的基因片段，经适当的限制性内切酶消化后插入到杆状病毒转移载体ｐＢａｃＰＡＫ９中，使其处于多角蛋白启动子的控制之下，构成重组转移载体ｐＢａｃＧＡＧ４２。酶切鉴定结果与预期的一致。再用载体上多克隆位点两翼的引物对连接处进行序列分析，结果表明外源基因处于多角蛋白启动子的控制下，且成功地引入了起始码和终止码。