liguzinediol对压力超负荷大鼠心室重构的影响

目的通过部分结扎大鼠肾上腹主动脉建立压力超负荷性心室肥厚模型,观察liguzinediol对各组大鼠心室重构的影响。方法用腹主动脉缩窄方法复制大鼠压力超负荷心室重构模型。设假手术组,模型组,liguzinediol高、中、低剂量(20、10、5 mg.kg-1)组及阳性药(卡托普利10 mg.kg-1)组。造模后稳定1周开始灌胃给药,给药8周后测量大鼠心脏动脉收缩压(SBP)、动脉舒张压(DBP)、平均动脉压(MAP)、左室收缩内压(LVSP)、左室舒张末期压(LV-EDP)、左心室内压最大上升/下降速率(±dp/dtmax);计算全心质量指数(HMI)以及左室质量指数(LVMI);HE染色光镜观察心肌结构;放射免疫法检测大鼠血浆中肾素活性(PRA)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD);碱水解法测羟脯氨酸(HYP)含量,ELISA法检测大鼠心肌组织Ⅰ/Ⅲ型胶原比值。结果 liguzinediol能明显降低压力超负荷致心室重构大鼠的HMI和LVMI,改善血流动力学参数,降低AngⅡ和ALD含量,降低HYP含量及Ⅰ/Ⅲ型胶原比值。结论 liguzinediol具有抑制实验性心室重构的作用,其机制与抑制心肌肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)活性有关。     

Liguzinediol在不同种属肝微粒体中代谢产物的比较研究

目的 比较研究不同种属间liguzinediol的体外代谢产物。方法 建立liguzinediol及其体外代谢产物的LC-MS/MS检测方法,采用肝微粒体温孵法研究liguzinediol在大鼠、犬、猴、人等多种属肝微粒体中的代谢产物。结果 liguzinediol在肝脏可发生Ⅰ相和Ⅱ相代谢,并且在大鼠、犬、猴、人肝微粒体温孵体系中均孵育有氧化产物和葡萄糖醛酸结合产物。结论 liguzinediol在大鼠、犬和猴等动物的肝微粒体中的Ⅰ相和Ⅱ相代谢产物与人肝微粒体基本一致,该研究结果可为liguzinediol临床前安全性评价的实验动物选择提供依据。      

Liguzinediol缬氨酸酯前药的设计、合成及成药性评价

目的 设计、合成liguzinediol缬氨酸酯前药,结合化学稳定性、理化性质、体外生物转化和体内药代动力学研究,为进一步liguzinediol氨基酸酯类前药研究奠定基础。方法 以liguzinediol和N-叔丁氧羰基(Boc)-L-缬氨酸为原料,经4-二甲氨基吡啶（DMAP）催化、N,N'-二环己基碳二亚胺（DCC）缩合成酯,15% TFA脱Boc保护得liguzinediol缬氨酸酯前药,目标化合物结构经LC-HRMS、1H-NMR和13C-NMR确证。采用高效液相色谱法（HPLC）测定目标化合物的化学稳定性、溶解度、容量因子和脂水分配系数,以及体外80%人体血浆中酯酶水解的释放特性和体内药代动力学研究。结果 Liguzinediol缬氨酸酯前药保留了原药的溶解度特性,体外80%人体血浆酶解liguzinediol释放速率良好,体内作用时间明显延长;但脂溶性相对较差。结论 Liguzinediol缬氨酸酯前药具有一定的成药性,且明显延长了原药 liguzinediol的体内作用时间,为进一步liguzinediol氨基酸酯前药研究提供了思路。      

Liguzinediol 对正常大鼠心脏血流动力学的影响

 目的 观察 liguzinediol （ 2 ， 5- 二羟甲基 -3 ， 6- 二甲基吡嗪）对正常 SD 大鼠心脏血流动力学的影响。 方法 将大鼠随机分为 5 组：生理盐水组，阳性对照组（磷酸二酯酶抑制剂米力农， 0.3 mg·kg^-1 ）， 3 个剂量组（ liguzinediol 5 ， 10 ， 20 mg·kg^-1 ），每组 10 只。采用 RM6240B/C （四道）型多道生理记录仪测量给药后大鼠心脏血流动力学指标如左心室收缩压（ LVSP ），左心室终末舒张压 (LVEDP) ，左心室最大变化速率（± d<>p/d<>t_max ），左室开始收缩至左室内压上升速率峰值时间 (t-d<>p/d<>t_max) ，收缩压 (SAP) ，舒张压 (DAP) ，平均压 (MAP) ，脉压差 (MPP) 以及心率 (HR) 。 结果 静脉给药后， liguzinediol 5 ， 10 ， 20 mg·kg^-1 使大鼠左心室 LVSP 、 +d<>p/d<>t_max 、 - d<>p/d<>t_max 、 SAP 、 MAP 、 MPP 显著增加， t-d<>p/d<>t_max 、 LVEDP 降低。 结论 liguzinediol 对正常大鼠心脏具有正性肌力作用。     

Liguzinediol improved the heart function and inhibited myocardial cell apoptosis in rats with heart failure

Aim:

Liguzinediol is a novel derivative of ligustrazine isolated from the traditional Chinese medicine Chuanxiong (Ligusticum wallichii Franch), and produces significant positive inotropic effect in isolated rat hearts. In this study we investigated the effects of liguzinediol on a rat model of heart failure.

Methods:

To induce heart failure, male SD rats were injected with doxorubicin (DOX, 2 mg/kg, ip) once a week for 4 weeks. Then the rats were administered with liguzinediol (5, 10, 20 mg·kg⁻¹·d⁻¹, po) for 2 weeks. Hemodynamic examination was conducted to evaluate heart function. Myocardial cell apoptosis was examined morphologically. The expression of related genes and proteins were analyzed using immunohistochemical staining and Western blot assays, respectively.

Results:

Oral administration of liguzinediol dose-dependently improved the heart function in DOX-treated rats. Electron microscopy revealed that liguzinediol (10 mg·kg⁻¹·d⁻¹) markedly attenuated DOX-induced injury of cardiomyocytes, and decreased the number of apoptotic bodies in cardiomyocytes. Furthermore, liguzinediol significantly decreased Bax protein level, and increased Bcl-2 protein level in cardiomyocytes of DOX-treated rats, led to an increase in the ratio of Bcl-2/Bax. Moreover, liguzinediol significantly decreased the expression of both cleaved caspase-3 and NF-κB in cardiomyocytes of DOX-treated rats. Administration of digitalis (0.0225 mg·kg⁻¹·d⁻¹) also markedly improved the heart function and the morphology of cardiomyocytes in DOX-treated rats.

Conclusion:

Liguzinediol improves the heart function and inhibits myocardial cell apoptosis in the rat model of heart failure, which is associated with regulating Bcl-2, Bax, caspase-3 and NF-κB expression.     

Liguzinediol的合成工艺优化

目的确定并优化Liguzinediol的合成工艺。方法以乙酰乙酸乙酯为起始原料,经亚硝化、Pd/C催化氢化、缩合、脱氢、硼氢化钠还原得到Liguzinediol,并对各步反应条件进行优化。结果制备2-羟亚氨-3-氧代丁酸乙酯时,原料与亚硝酸钠当量比为1∶1.4,亚硝酸钠水溶液的浓度为16%最佳;制备3,6-二甲基吡嗪-2,5-二甲酸二乙酯时,反应温度30℃、1当量三乙胺、反应溶剂乙醇与原料质量比为8.8最佳;制备Liguzinediol时,反应溶剂为THF和EtOH、3当量硼氢化钠、2当量无水氯化钙、反应温度为室温最佳。产品总收率49.1%,纯度99.91%。结论此路线所用原料均廉价易得,反应条件温和,收率提高至49.1%,产品质量可控,便于放大生产。     

川芎嗪衍生物liguzinediol对戊巴比妥钠致急性心力衰竭大鼠血流动力学的影响

目的:观察liguzinediol(2,5-二羟甲基-3,6-二甲基吡嗪)对戊巴比妥钠致急性心力衰竭大鼠血流动力学的影响.方法:40只雄性SD大鼠右侧股静脉恒速注射戊巴比妥钠制备急性心衰模型,造模后随机分为5组:模型组(给予NS),阳性对照组(地高辛,22.5 μg· kg -1),liguzinediol(5,10,20 mg·kg-1)3个剂量组,每组8只,稳定后经恒速注射泵右侧股静脉单次给药,多道生理记录仪记录全过程中大鼠血流动力学指标的变化.结果:静脉给药后,liguzinediol 3个剂量组均使大鼠左心室收缩压(LVSP)、左心室内压力最大上升速度(+dp/dtmax)、左心室内压力最大下降速度(- dp/dtmax)、收缩压(SAP)、舒张压(DAP)在1min内开始显著增加,并且对心率影响不大,心肌收缩力增强.结论:liguzinediol对急性心衰大鼠心脏具有正性肌力作用.     

Liguzinediol的正性肌力作用机制及心脏安全性

目的探索Liguzinediol(LZDO)对正常大鼠离体心脏正性肌力作用的机制,并评价其心脏安全性。方法①大鼠离体心脏实验:按照灌流液(空白对照)→LZDO 100μmol.L-1→洗脱的顺序灌流,持续5 min并于灌流5 min末记录大鼠离体心脏左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左室内压最大上升/降速率(±dp/dtmax)及心率(HR)。②豚鼠在体和离体实验:在体实验按照生理盐水→LZDO 1.7 g.kg-1的顺序经颈外静脉缓慢推注,持续5 min,于每次处理后5 min记录5只豚鼠心电图。离体实验按照灌流液(空白对照)→LZDO 300μmol.L-1的顺序灌流,持续5 min,于灌流5 min末记录豚鼠离体心脏心电图。分析P-R间期和心率校正QT间期(QTc间期)。③膜片钳全细胞法记录细胞膜离子通道电流:按照灌流液(空白对照)→尼莫地平2μmol.L-1顺序灌流左心室肌细胞,记录电流。灌流液(空白对照)→LZDO100μmol.L-1的顺序灌流,于灌流5 min末记录其5个细胞的L型钙电流。另两组实验按照灌流液(空白对照)→LZDO 1→10→100→300μmol.L-1的顺序灌流,于灌流5 min末记录hNav1.5和hERG电流。④激光共聚焦方法测定左心室心肌细胞的钙释放量:按照灌流液(空白对照))→LZDO 100μmol.L-1的顺序灌流,于灌流2 min和30 min末记录心肌细胞钙释放量。结果①大鼠离体心脏实验:尼莫地平1μmol.L-1和rethenium red 5μmol.L-1均能完全阻断LZDO 100μmol.L-1的正性肌力作用。②豚鼠在体和离体心电图实验:豚鼠在体给予LZDO 1.7 g.kg-1或豚鼠离体心脏灌流LZDO 300μmol.L-1后,P-R及QTc间期并没有显著性改变。③细胞膜离子通道电流实验:LZDO 100μmol.L-1未能显著地增加大鼠左心室肌细胞的L型钙电流;LZDO 1,10,100和300μmol.L-1未能显著地改变hNav1.5和hERG电流。④激光共聚焦测定左心室心肌细胞钙释放实验:LZDO 100μmol.L-1显著增加左心室心肌细胞钙释放,于2 min末钙释放量达到最大值,并能维持到30 min(P<0.05)。结论 LZDO对L型钙通道无直接作用,LZDO是通过作用肌浆网钙释放来起到正性肌力作用的;LZDO在体1.7 g.kg-1或离体300μmol.L-1无致心律失常的作用。