脑泰方对缺血再灌注沙鼠脑组织谷氨酸及其转运体功能的影响

目的：探讨脑泰方对脑缺血再灌注沙姒脑组织谷氨酸及其转运体功能的影响。方法：采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断模型。利用脑组织突触膜颗粒对^3H-L谷氨酸摄入量及高效液相色谱仪观察脑泰方对脑组织谷氨酸含量的影响。结果：模型组脑组织谷氨酸含量明显高于假手术组（P＜0．01），而其转运体功能则明显低于假手术组（P＜0．01）；脑泰方治疗组明显降低脑组织谷氨酸含量（P＜0．01）及显著升高大脑皮层、海巴、纹状体谷氨酸转运体功能（P＜0．01）。结论：脑泰方对缺血脑组织的保护作用是通过提高谷氨酸转运体功能以降低神经元突触中过多堆积的谷氨酸，从而减轻其兴奋性毒性。     

脑泰方对缺血再灌注沙鼠脑组织谷氨酸及其转运体功能的影响

目的探讨脑泰方对脑缺血再灌注沙鼠脑组织谷氨酸及其转运体功能的影响。方法 :采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断模型。利用脑组织突触膜颗粒对3H L 谷氨酸摄入量及高效液相色谱仪观察脑泰方对脑组织谷氨酸含量的影响。结果 :模型组脑组织谷氨酸含量明显高于假手术组 (P <0 0 1) ,而其转运体功能则明显低于假手术组 (P <0 0 1) ;脑泰方治疗组能明显降低脑组织谷氨酸含量 (P <0 0 1)及显著升高大脑皮层、海马、纹状体谷氨酸转运体功能 (P <0 0 1)。结论 :脑泰方对缺血脑组织的保护作用是通过提高谷氨酸转运体功能以降低神经元突触中过多堆积的谷氨酸 ,从而减轻其兴奋性毒性     

加味脑泰方对血管性痴呆大鼠学习记忆和海马区NR2A及NR2B表达的影响

目的 观察加味脑泰方对血管性痴呆（VaD）大鼠学习记忆的影响,同时检测海马区NR2A及NR2B表达情况以探讨其可能机制.方法 将36只SD大鼠随机均分成假手术组、模型组和加味脑泰方组.采用四血管阻断法制备血管性痴呆模型.Morris水迷宫评价大鼠学习记忆能力;应用免疫组织化学技术观察各组大鼠海马NR2A及NR2B的表达情况.结果加味脑泰方组逃避潜伏期（27.4±6.5 s）显著低于模型组（64.4±10.1 s）,穿越平台次数（8.1±0.98次）显著多于模型组（5.6±0.8次）,差异均有显著性（P〈0.05）;加味脑泰方组海马NR2A＋、NR2B＋分别是22.4±2.6、18.9±3.0个,模型组分别为14.8±3.3、12.6±2.9个,两组NR2A＋、NR2B＋相比,差异均有显著性（P〈0.05）;加味脑泰方组海马NR2A＋、NR2B＋的平均光密度值较模型组显著提高（P〈0.05）.结论加味脑泰方可改善VaD大鼠学习记忆能力,其机制可能与上调大鼠海马区NR2A及NR2B的表达相关.     

脑泰方提取物抗肿瘤坏死因子诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的研究

目的 观察重组人肿瘤坏死因子α(rhTNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(HUEC)凋亡及中药脑泰方提取物(NTE)的作用。方法 将融合生长的HUEC随机分为空白对照组(正常培养，不加rhTNF-α)、NTE对照组(加中剂量NTE，不加rhTNF-α)、rhTNF-α组(仅加100ngmL rhTNF-α)和NTE高、中、低剂量组(加100ng/mL rhTNF-α和6mg/mL、2mg/mL、0．67mg/mL NIE)，观察rhTNF-α作用24h后内皮细胞吖啶橙/溴乙啶双重荧光染色和凋亡细胞计数。结果 荧光显微镜下可见，空白对照组和NTE对照组HUEC为正常结构的活细胞、染色质主要着亮绿色，凋亡细胞率分别为14．0％和14．5％；rhTNF-α组与NTE低剂量组细胞大多呈均匀橙色，染色质多被染为橘红色，以固缩状或圆珠状为主，凋亡细胞率分别为75．0％和63．5％；NTE高、中剂量组细胞多呈亮绿色，凋亡细胞率分别为43．5％和53．0％。结论 一定浓度的肿瘤坏死因子引起的内皮细胞损伤主要表现为细胞凋亡，脑泰方提取物可明显抑制这种凋亡的过度发生。     

脑泰方调控细胞铁转运抑制铁死亡保护脑卒中缺血损伤的机制研究

目的 探讨脑泰方是否通过调控热休克转录因子1（heat shock factor 1,HSF1）/热休克蛋白B1（heat shock proteins B1,HSPB1）通路降低脑铁沉积、抑制活性氧沉积及脂质过氧化产物产生、减轻神经元铁死亡,从而发挥脑卒中缺血损伤保护作用。方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、脑泰方（27 g/kg）组和去铁酮（125 mg/kg）组,给予药物干预。通过大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）法制备脑缺血大鼠模型,术后2 h进行神经功能评分及取材。TTC染色法检测脑梗死体积;苏木素-伊红（HE）染色观察脑组织形态结构及损伤情况;尼氏染色观察脑组织尼氏体数目;普鲁士蓝染色观察脑组织神经元内铁聚集水平;免疫组化及Western blotting法检测脑组织HSF1、HSPB1、转铁蛋白受体1（transferrin receptor 1,TFR1）和铁蛋白重链多肽（ferritin heavy polypeptide1,FTH1）蛋白表达;铁离子检测试剂盒与丙二醛检测试剂盒及活性氧检测试剂盒检测脑组织铁、丙二醛及活性氧含量。结果 与模型组比较,脑泰方组大鼠脑梗死体积减少,神经功能评分降低（P<0.01）;脑缺血区尼氏体增多,细胞损伤程度降低;含铁聚集颗粒细胞的数目减少;脑铁、丙二醛及活性氧含量降低（P<0.05、0.01）;脑组织HSF1、HSPB1及FTH1蛋白表达上调（P<0.05、0.01）,TFR1蛋白表达下调（P<0.05）。结论 脑泰方可能通过上调HSF1/HSPB1通路,抑制TFR1的表达以减少神经元铁的吸收,上调FTH1的表达以增加铁蛋白的铁存储,以此调控铁代谢稳态平衡,进而抑制因过量的铁通过芬顿反应产生的活性氧及随后脂质过氧化产物引起的缺血性脑卒中神经元铁死亡。     

加味脑泰方通过SIRT1途径减轻脑缺血再灌注损伤

目的研究加味脑泰方通过沉默信息调节蛋白1(SIRT1)途径减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及机制。方法雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、加味脑泰方(JWF)组、JWF+EX527组,采用线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型,JWF组给予加味脑泰方灌胃干预14天,JWF+EX527组给予加味脑泰方灌胃及SIRT1拮抗剂EX527腹腔注射干预14天,比较四组大鼠神经功能评分、炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平及B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、SIRT1、核因子κB(NF-κB)、叉头框蛋白(FoxO1)表达量的差异。结果与对照组比较,模型组大鼠神经功能评分、血清及脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α水平、脑组织中Bax、NF-κB和FoxO1表达量均明显增加,脑组织中Bcl-2、SIRT1表达量均减少(P0.05);与模型组比较,JWF组大鼠神经功能评分、血清及脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α水平、脑组织中Bax、NF-κB和FoxO1表达量均明显减少,脑组织中Bcl-2、SIRT1表达量均明显增加(P0.05);与JWF组比较,JWF+EX527组大鼠神经功能评分、血清及脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α水平、脑组织中Bax、NF-κB和FoxO1表达量均明显增加,脑组织中Bcl-2、SIRT1表达量均明显减少(P0.05)。结论加味脑泰方能够减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,其可能的机制为激活SIRT1并抑制NF-κB介导的炎症反应以及FoxO1介导的细胞凋亡。     

Effect of Naotaifang(脑泰方)Extract on Changes of Coagulation in Human Umbilical Cord Vein Endothelial Cell and Fibrinolysis Tumor Necrosis Factor-α

Objective:To observe the changes of coagulation and fibrinolysis function in human um-bilical cord vein endothelial cells(HUVEC)induced by recombinant human tumor necrosis factor-α(rhT-NF-α)and the effect of Naotaifang extract(脑泰方,NTE)on it.Methods:Cultured HUVEC is randomlydivided into six groups:Control group,NTE Control group(Only 2 g/L NTE),rh TNF-αgroup(100μg/L rhTNF-α),and low-dosage,middle-dosage and high-dosage NTE group(100μg/L rhTNF-αand 0.67g/L,2 g/L,6 g/L NTE).The coagulation activity of frozen-dissolved HUVEC,von Willebrand factor(vWF)content in the conditioned medium and tissue-type plasminogen activator(tPA)and plasminogenactivator inhibitor(PAI)activity were to be detected after 24 hrs.Results:Compared with the controlgroup,PAI activity were enhanced,vWF release markedly increased in conditioned medium of TNF-αgroup(P<0.01)and the frozen-dissolved HUVEC markedly shortens the rabbit plasma prothrombintime,and the above changes could be significantly inhibited by the 3 dosages o     

Extract of Naotaifang,a compound Chinese herbal medicine,protects neuron ferroptosis induced by acute cerebral ischemia in rats

ObjectiveOur previous research showed that Naotaifang (a compound traditional Chinese herbal medicine) extract (NTE) has clinically beneficial effects on neurological improvement of patients with acute cerebral ischemia. In this study, we investigated whether NTE protected acute brain injury in rats and whether its effects on ferroptosis could be linked to the dysfunction of glutathione peroxidase 4 (GPX4) and iron metabolism.MethodsWe established an acute brain injury model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) in rats, in which we could observe the accumulation of iron in neurons, as detected by Perl’s staining. Using assay kits, we measured expression levels of ferroptosis biomarkers, such as iron, glutathione (GSH), reactive oxygen species (ROS) and malonaldehyde (MDA); further the expression levels of transferrin receptor 1 (TFR1), divalent metal transporter 1 (DMT1), solute carrier family 7 member 11 (SLC7A11) and GPX4 were determined using immunohistochemical analysis, real-time quantitative polymerase chain reaction and Western blot assays.ResultsWe found that treatment with NTE reduced the expression levels of TFR1 and DMT1, reduced ROS, MDA and iron accumulation and reduced neurobehavioral scores, relative to untreated MCAO rats. Treatment with NTE increased the expression levels of SLC7A11, GPX4 and GSH, and the number of Nissl bodies in the MCAO rats.ConclusionTaken together, our data suggest that acute cerebral ischemia induces neuronal ferroptosis and the effects of treating MCAO rats with NTE involved inhibition of ferroptosis through the TFR1/DMT1 and SCL7A11/GPX4 pathways.     

脑泰方血清和血浆蛋白质（肽）组学比较研究

目的：通过对脑泰方含药血清和含药血浆蛋白质（肽）组学的比较研究,发现脑泰方含药血清和含药血浆中的差异蛋白（肽）;以质谱分析技术确定差异蛋白的特征。从而为探索脑泰方的药效物质基础和发展中药血浆药理学方法提供科学依据。方法：取健康成年SD 大鼠20 只,按体重随机分为空白组、脑泰方给药组,每组10 只,连续灌胃给药7 天。手术前12 h 禁食不禁水,末次给药后1 h,用10%水合氯醛腹腔麻醉,经颈总动脉插管取血。每只大鼠采血后分别制备血清和血浆。每组随机抽取5 只大鼠的血清及血浆,采用2-DE 技术进行蛋白质（肽）组学比较研究, 运用300DPI 扫描、PDQuest 7.3.0 软件进行分析;采用ESI-MS/MS 对重要差异蛋白质点进行鉴定,筛选脑泰方血清和血浆差异蛋白的特征。结果：共获得20 张胶图,各胶图分别得到664 个蛋白位点。其中与空白血浆组比较,脑泰方血浆样品中共识别到20 个差异蛋白点,其中15 个差异点表达上调,5 个差异点表达下调;与空白血清组比较,脑泰方血清样品中共识别到19 个差异蛋白点,其中15 个差异点表达上调,4 个差异点表达下调;与脑泰方血浆组比较,脑泰方血清样品中共识别到24 个差异蛋白点,其中9 个差异点表达上调,15 个差异点表达下调。选取在脑泰方血浆组和脑泰方血清组中高表达的10 个差异蛋白质点进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）,成功鉴定了6 个蛋白,分别是：inter-alpha trypsin inhibitor, heavy chain 3、Group specificcomponent、complement factor B、Receptor Complexed With A Heterodimeric Fc、complement factor B, isoform CRA-d、Transferrin。结论：脑泰方含药血浆、血清中明显变化的蛋白质可能与其抗凝血促纤溶作用机制相关,这些蛋白参与血管新生、炎症调控等病理生理过程,对研究脑泰方作用的可能有效靶点及其信号转导通路意义重大。     

脑泰方对缺血再灌注损伤沙鼠大脑皮层氨基酸类神经递质含量的影响

目的 :探讨脑泰方对缺血再灌注损伤沙鼠大脑皮层氨基酸类神经递质含量的影响。方法 :采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断模型。利用高效液相色谱 -荧光法检测大脑皮层氨基酸含量。结果 :脑泰方可显著降低沙鼠脑缺血再灌注损伤时大脑皮层兴奋性氨基酸类神经递质(EAAs)Glu、Asp含量 (P <0 .0 1) ,并显著升高抑制性氨基酸类神经递质 (IAAs)GABA、Gly、Tau含量 (P <0 .0 1) ,提高GABA/Glu比值。结论 :调节脑组织兴奋性和抑制性氨基酸类神经递质含量的平衡可能是脑泰方抗脑缺血再灌注损伤的机制之一。