甲基硝基亚硝基胍灌胃诱发小鼠胃癌和小肠癌的观察

用较大剂量MNNG多次灌胃LACA小鼠,分阶段处死,肿瘤的最高发生率可达100％(5/5),良瘤与癌均为82％(9/11)。缩短了前胃、腺胃及小肠的诱癌时间。探讨了各部位肿瘤发生率不同的原因。     

大鼠胃粘膜上皮微核试验

为筛选遗传毒胃致癌物,我们以N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)为模型诱变剂,发展大鼠胃粘膜微核试验。Wistar大鼠经口给以MNNG灌胃2次,间隔24h,末次染毒后24h处死。取腺胃,以1％链霉蛋白酶E于37℃消化30～45min,离心消化液收集胃粘膜细胞,制片,Giemsa染色。胃粘膜细胞收率为每鼠4.0 ×10~6细胞。在涂片上,胃粘膜细胞可分为3组:表面上皮细胞、泌酸细胞、腺颈细胞和酶原细胞。研究结果表明:MNNG可引起大鼠胃粘膜细胞微核率增加,并有剂量一效应关系。     

甲基亚硝基胍致小鼠腭裂的分子机制

目的探讨小鼠腭裂发生的分子机制。方法以甲基亚硝基胍(MNNG)为受试物诱导腭裂动物模型,采用抑制消减杂交技术从全基因组水平上对MNNG致腭裂相关差异表达基因进行筛选。结果得到MNNG逆向表达片断27个,正向差异表达片断14个。经测序和GeneBank比对后得到已知基因9条,余者为未知功能基因或未知基因。结论Gpc3可能通过调节腭发生过程中某些基因干扰间充质细胞正常增殖;Ptprs的表达抑制影响了某种腭突发生中细胞信号转导通路;腱生蛋白的抑制表达可能使细胞粘连力的去除失败或者由于基质中MMPs的表达降低而使腭中缝消除受阻;抑或由EgfrPtprsTnC协同作用而导致腭裂发生。还可能影响细胞对营养物质的摄取而引起Rps25的上调诱发过度的细胞凋亡而在腭裂发生中发挥作用。     

中华猕猴桃的防癌作用(三)在模拟人胃液中对N-亚硝酰胺合成的阻断作用——Ames试验

本文用Ames试验的方法研究了中华猕猴桃汁对N-亚硝酰胺体外合成的阻断作用。 在模拟人胃液的条件下,亚硝酸钠和甲基硝基胍能反应生成N-甲基-N′-硝基-N亚硝基胍,在Ames氏平皿掺入试验中引起鼠伤寒沙门氏菌TA100菌株的突变反应,有明显的剂量反应关系。当亚硝酸钠浓度为50mM,甲基硝基胍为100mM时,突变菌落数高达4327个/皿,为自发回变的19.94倍。中华猕猴桃汁能阻断N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍合成,抑制突变反应。在亚硝酸钠浓度为22.2mM,甲基硝基胍为44.4mM时,猕猴桃汁能完全阻断N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍的合成,致突变反应为阴性。而不加猕猴桃汁的同浓度反应体系引起的突变反应为自发回变的12.59倍。桃汁组低于此浓度的反应体系结果皆是阴性,而对高于此浓度的反应体系,猕猴桃汁不能完全阻断N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍合成,但能明显抑制突变反应。对中等浓度的反应体系,与桃汁含量相同的抗坏血酸溶液亦能部分阻断N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍的合成,但作用低于猕猴桃汁。实验结果证明猕猴桃汁阻断N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍体外合成的作用明显优于同浓度抗坏血酸溶液。 在相同实验条件下,单独的亚硝酸钠或甲基硝基胍均无致突变作用。经薄层层析方法定性分析,反应生成物是N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍。     

MNNG诱导的DNA损伤对人肺癌H1299细胞中FOXO1亚细胞定位的影响

目的探讨甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对DNA造成损伤后,对人叉头蛋白转录因子(FOXO1)核质分布的影响。方法体外培养人肺腺癌细胞系H1299,经不同浓度MNNG处理细胞后,采用彗星电泳、细胞免疫荧光、Western blot等方法,对细胞DNA损伤程度、FOXO1核质定位情况及GADD45蛋白表达变化进行检测。结果 H1299细胞DNA损伤程度随MNNG处理浓度增加而显著增强,伴随DNA损伤程度的加深,FOXO1转录因子在核内的分布逐渐增加,且在细胞DNA发生损伤4h后GADD45表达升高。结论 MNNG能造成H1299细胞DNA损伤,并促进FOXO1转录因子的核转位,从而启动损伤修复过程。     

大鼠Hp相关性慢性胃炎模型的制做

目的　建立较理想的幽门螺杆菌 (Hp)相关性慢性胃炎大鼠模型。方法　二级雄性Wister大鼠 4 3只 ,随机分为制模组 [H .pylori及 1 甲基 3 硝基 1亚硝基胍 (N methyl N’ nitro N nitrosoguanidine ,MNNG)组 ]1 3只、对照Ⅰ组 (正常对照组 ) 1 0只 ,对照Ⅱ组 (H .pylori感染组 ) 1 0只 ,对照Ⅲ组 (MNNG组 ) 1 0只。对模型组动物 ,采用H .pylori及MNNG的综合方法制模 ,共 1 2周。采用胃黏膜涂片革兰染色和快速尿素酶试验检测H .pylori定植情况。并对胃窦黏膜组织学各项指标进行评定。结果　 (1 )H .pylori感染情况 :正常对照组和MNNG组 :其胃窦黏膜无H .pylori感染 ;H .pylori感染组和制模组分别处死 9只、1 0只大鼠 ,其中 8/9、7/1 0胃窦黏膜有H .pylori定植。 (2 )胃窦黏膜病理组织学变化 :制模组胃窦黏膜变薄 ,固有层腺体中度减少 ,未见腺体化生及不典型增生 ,伴有中度慢性活动性炎症。MNNG组胃窦黏膜变薄 ,固有层腺体中度减少 ,亦无腺体化生及不典型增生。伴轻度慢性炎症 ,但无明显急性活动性炎症。H .pylori感染组仅有中度慢性活动性炎症 ,胃窦黏膜厚度正常。正常对照组胃黏膜基本正常。制模组慢性活动性炎症与H .pylori感染组比较 ,差异无显著意义 ,P >0 0 5。萎缩性病变 [病理积分 (2 2±0 4 2     

人REV3基因启动子区的克隆和生物信息学分析及其对MNNG的反应

目的：了解人REV3基因对化学致癌物N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱发转录上调的机制。方法：根据BLAST序列比对、启动子和转录因子结合部位预测软件，对人REV3基因促进子区进行生物信息学分析；用巢式PCR技术克隆了人REV3基因启动子区；用瞬时转染二重荧光素酶报道基因系统检测人REV3启动子对化学致癌物MNNG的反应。结果：生物信息学分析显示，人REV3基因启动子区位于6号染色体PAC克隆RP3-415N12，假设的启动子区有启动子序列、富含cpG岛和包括AP-1／c-Jun／c-Fos、AP-2、STAT、CREBP和NF-kB等的转录因子识别部位。将启动子区2582bp的片段插入荧光素酶报道基因载体pGL3-Basic中，构建了重组体质粒pGL3-2582。瞬时转染检测显示，该假设的启动子区确有启动子功能，对MNNG发生反应。结论：成功地克隆了人REV3基因启动子区，并证明其对MNNG发生反应。提示当细胞处于基因毒应激状态下可在转录水平调节REV3基因。     

N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍诱导共表达的蛋白基因启动子区的转录因子结合部位分析

目的：分析甲基硝基亚硝基胍（MNNG）诱导的共表达蛋白的编码基因启动子区的转录因子结合部位。方法：用进化足迹法，结合转录因子数据库的搜索，预测共表达蛋白编码基因启动子区共有的转录因子结合部位。凝胶阻滞试验验证对于预测出的转录因子结合部位，在MNNG处理细胞中是否确实有相关转录因子的反应。结果：预测出11个共同存在于这些蛋白编码基因启动子区的转录因子结合部位，其中除已知转录因子激活蛋白1（activatorprotein1，AP1）在MNNG处理后被激活外，用凝胶阻滞试验又发现在MNNG处理细胞的核提取液中有2个转录因子——核因子Y（nuclear factor Y，NFY）和GATA结合因子（GATA-binding factor，GATA）的活性升高。结论：进化足迹法可以有效地降低转录因子结合部位预测结果中的假阳性率。NFY和GATA转录因子结合部位可能参与对MNNG诱导的共表达蛋白的共调控。