铜绿假单胞菌噬菌体PaP3生物学特性的研究

目的测定铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的最佳感染复数、一步生长曲线和吸附K值及交叉吸附K值等基本生物学特性。方法按照感染复数（MOI）分别为0．0001、0．001、0．01、0．1、1和10加入噬菌体纯培养液和宿主菌，充分裂解细菌后，测定噬菌体滴度；以MOI=10的比例加入噬菌体及宿主菌，进行一步生长实验；纯化PaP3颗粒，免疫家兔，获得抗血清，通过中和反应实验测定PaP3和其抗血清之间的吸附反应常数K值。同时，利用抗血清交叉中和试验确定本室分离的三株噬菌体之间的血清学关系。结果当MOI=0．001时PaP3感染其宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高；根据一步生长实验结果绘制一步生长曲线；通过血清交叉中和反应得出不同的吸附常数。结论PaP3最佳感染复数为0．001，感染宿主菌的潜伏期是20min，爆发期是60min，平均爆发量约为31，其抗血清反应的吸附常数K值为262。     

噬菌体基因组PaP1的鸟枪法测序及其生物信息学分析

目的对分离的铜绿假单胞菌噬菌体PaP1进行全基因组测序，并进行初步的生物信息学分析，为噬菌体的改造及其治疗奠定基础。方法采用鸟枪法随机测序和重叠群组装的策略对PaP1进行基因组测序，并通过EditSeq、开放读码框架（ORF）finder、GeneMark^TM、BPROM、FindTerm、Palindromes、Equicktandem及FAStRNA等软件对所获得的基因组序列的一般特征、蛋白质同源性序列及tRNA基因等进行分析和预测。结果PaP1基因组约为90000bp，其中最大重叠群为28249bp。在已获得序列中预测出120个ORFs、41个推定基因及9个簇集在5’末端的tRNA基因。在41个推定基因中，预测出编码DNA末端酶大亚单位、DNA解旋酶B亚单位、肽聚糖结合蛋白及3个尾丝蛋白等6个基因的功能。结论鸟枪法只能测出噬菌体基因组PaP1的部分序列，重复序列的存在是该基因组测序困难的原因。     

内源性光动力疗法抑制人结肠癌裸鼠种植瘤的实验研究

目的　探讨基于 5 氨基乙酰丙酸 (ALA)的光动力疗法 (PDT)对结肠癌的生长抑制作用。方法　建立人结肠癌SW 480细胞裸鼠种植瘤模型 ,经尾静脉注入ALA液 (2 5 0mg/kg体重 ) ,光敏化 3h后半导体激光仪垂直照射肿瘤 3 0min(能量密度 9J/cm2 ) ,照射后连续观察肿瘤体积 ,瘤体HE染色病理分析。结果　ALA PDT在治疗后早期产生明显的抑制肿瘤增殖作用 ,瘤体组织坏死 ,腺腔样结构解离破坏 ,延命率 40 .2 % ,体积抑瘤率达 64 .1% ,治疗后期 ,肿瘤体积仍会缓慢增长 ,但增长速度明显小于对照组。结论　SALA PDT治疗可明显抑制裸鼠结肠种植瘤生长 ,延长荷瘤裸鼠生存期 ,但仍不能完全抑制肿瘤生长。     

细菌对噬菌体感染的抵抗

噬菌体对其宿主菌具有特异性感染力,反之,宿主菌对噬菌体的感染具有抵抗现象.根据噬菌体侵入宿主的不同阶段,可以将宿主菌对噬菌体的天然抵抗机制分为4个主要的类别吸附抑制,流产感染,限制-修饰系统和穿入阻滞.此外,还有源于噬菌体的抗性作用以及通过人工插入突变获得的广谱噬菌体抗性菌株等.     

铜绿假单胞菌外毒素A的表达、纯化与生物学活性研究

目的利用基因工程技术制备铜绿假单胞菌外毒素A(PE),为深入研究PE的致病机理和免疫防治奠定基础。方法应用PCR技术从铜绿假单胞菌基因组中扩增外毒素A全长结构基因,将其克降于原核表达载体pQE-31中,所构建的重组质粒经测序鉴定后转化大肠埃希菌JM109, IPTG诱导表达;制备融合蛋白包涵体,并采用Ni-NTA柱亲和层析、葡聚糖凝胶过滤和阴离子交换层析分离和纯化目的蛋白;采用透析法对纯化后的目的蛋白进行复性,MTT法测定复性后的重组PE对L929细胞、B16黑素瘤细胞的细胞毒活性。结果通过对PCR反应体系的优化,扩增到了PE全长结构基因。所构建的pQE-PE重组质粒经酶切及测序鉴定与设计序列一致;转化E.coli JM109后,IPTG诱导目的蛋白表达率约为25%;SDS-PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(M_r)约为66×10~3,与理论预期值一致;破菌后电泳证实目的蛋白主要以包涵体形式表达。经亲和层析、葡聚糖凝胶过滤和阴离子交换层析后蛋白纯度大于95%。MTT法测得重组PE对L929细胞和B16黑素瘤细胞的半数抑制浓度(IC_(50)值)分别为2.13μg/ml、2.58μg/ml。结论通过对PE的表达纯化,获得了具有细胞毒活性的重组PE,为利用基因工程手段大量制备PE的工作奠定了基础。     

Cathelicidin的特性及其应用

Cathelicidin是在哺乳动物体内发现的一类结构多变的抗微生物肽，因在表达的信号肽与成熟肽之间含有一高度保守的cathelin肽段而自成一家族。Cathelicidin 和防御素一样，也是宿主免疫防御系统的重要组成部分。除了主要的抗菌活性以外，Cathelicidin还具有抑制组织损伤，促进创伤修复，结合内毒素，诱导血管生成等多种生物学功能。在临床耐药菌问题日益严重的今天，进一步了解Cathelicidin的生物学活性和临床作用，无疑将推动整个抗感染治疗事业的发展。     

医学微生物学实验室管理探讨

医学微生物学是生物医学领域中一门重要的前沿基础学科,在医科类高等院校和科研机构进行细菌、病毒等微生物的科学研究工作,已成为顺应时代需求,推进医学微生物学、医学免疫学等领域发展的重要动力。基于实验室管理的重要性,分析了当前医学微生物学实验室管理现状及主要问题,结合实际工作情况提出了加强和改善实验室管理的对策和措施。     

肾综合征出血热病毒R22株感染人血管内皮细胞的核酸原位杂交研究

用地高辛配基（Ｄｉｇ－）标记我国肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒Ｒ２２株片段ｃＤＮＡＲ３克隆探针对ＨＦＲＳ病毒Ｒ２２株感染的人血管内皮细胞（ＨＥＣｓ）作核酸原位杂交，杂交结果显示在受染的血管内皮细胞胞浆内有明显的杂交信号，而正常细胞和ＨＦＲＳ病毒感染经ＲＮＡ酶处理组不出杂交信号，结果表明ＨＦＲＳ病毒ＲＮＡ主要定位于血管内皮细胞的细胞浆中，提示病毒ＲＮＡ在胞浆中复制。     

与接头蛋白Bam32相互作用的蛋白分子的鉴定

目的:研究接头蛋白(adaptorprotein)Bam32在B细胞抗原受体(Bcellantigenreceptor,BCR)信号转导级联反应中的作用。方法:以Bam32全序列为诱饵,应用酵母双杂交技术筛选能与Bam32相互作用的蛋白分子,并用293T细胞共转染和免疫共沉淀法加以证实。结果:应用酵母双杂交技术筛选出能与Bam32相互作用的蛋白分子,其中1个出现强阳性反应的克隆编码酪氨酸激酶Lyn。用293T细胞共转染和特异性免疫共沉淀法证实,Bam32可在哺乳动物细胞中与Lyn共沉淀。应用抗磷酸化酪氨酸抗体检测显示,Bam32与Lyn相互作用可导致Bam32磷酸化。结论:Bam32可同Lyn相互作用,导致Bam32磷酸化,这在激活下游产物的级联反应中可能起重要作用。     

临床微生物室进修生带教体会

目前临床微生物室肩负着微生物病原体检测、抗生素药敏试验、院内感染监测以及耐药菌流行趋势监测等重任.而传统的临床微生物进修生单一的技术传授带教模式已无法满足现代医疗的需求,笔者将现代临床微生物和微生物进修生的特殊性进行结合,在带教方式和带教理念方面都进行了改进.一定程度上改变了传统的技术传授为主的带教模式,让进修生在理论与实践相结合的同时还培养了将临床微生物与临床各科室紧密联系的思维.