肝脏调节胆固醇代谢稳态的研究进展

胆固醇代谢稳态是机体发挥生理功能的重要保障。胆固醇代谢紊乱引起的体内胆固醇异常积聚可导致肝脏脂肪病变以及高胆固醇血症,与动脉粥样硬化等心血管疾病的发生发展密切相关。肝脏在维持机体胆固醇代谢稳态过程中发挥着关键性作用,其胆固醇代谢涉及摄取、合成、生物转化以及外排等多个环节。文章就肝脏调节胆固醇代谢稳态的最新进展作一综述。     

胰岛β细胞去分化与2型糖尿病

<正>最新的流行病学数据显示,截止2018年,我国糖尿病患病率已上升至12.4%,在非传染性疾病中仅次于心血管疾病和肿瘤,是严重威胁我国人民健康的常见病、多发病[1],其中绝大多数为2型糖尿病（type 2 diabetes, T2D）。胰岛β细胞数量减少与胰岛素分泌功能障碍是T2D的病理生理学基础之一。以往认为,β细胞减少与细胞凋亡相关,近十年的研究发现β细胞去分化是T2D进程中β细胞衰竭的主要原因。本文就β细胞去分化的特征、     

基于家庭的物理性康复疗法在慢性阻塞性肺疾病中的应用

慢性阻塞性肺疾病（COPD）对患者个人及社会危害巨大。肺康复（PR）作为目前最具成本效益的COPD治疗策略之一,有助于减少COPD患者住院次数,降低医疗费用,还能改善COPD患者运动耐力及生活质量。在当前新冠肺炎疫情影响下,以及有部分患者不愿或不能外出进行PR治疗,故如何在家庭环境中进行PR训练具有重要现实意义。本文对基于家庭能开展的物理康复疗法进行综述,以期为居家环境下实施COPD康复治疗提供选择方案及理论指导。     

利用CRISPR/Cas9技术体内标记示踪小鼠内源性NPC1L1蛋白

目的:对小鼠内源性NPC1L1蛋白进行标记和示踪,为研究体内胆固醇的吸收机制提供新的技术手段。方法:利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术,针对小鼠NPC1L1基因的3′末端非编码区,设计不同sgRNA,利用细胞内的荧光素酶法,检测分析其Cas9/sgRNA核酸酶活性,筛选出高活性的sgRNA序列,经体外转录制备sgRNA和Cas9 mRNA。PCR扩增基因打靶的两侧同源臂,与FLAG-EGFP的编码cDNA一起克隆至打靶载体。经酶切和测序鉴定正确的打靶载体DNA与sgRNA、Cas9 mRNA一起显微注射入小鼠受精卵,移植至假孕小鼠体内自然发育;通过基因组DNA 的PCR和Southern 印迹分析,筛选、鉴定重组正确且无随机插入的子代小鼠。制备小肠组织冰冻切片,荧光显微镜下观察NPC1L1-EGFP的表达分布。结果:成功构建了NPC1L1基因敲入打靶载体,筛选了高活性的sgRNA,利用CRISPR/Cas9技术获得了对内源性NPC1L1蛋白C端进行FLAG和EGFP双重标记的子代小鼠,荧光显微镜下观察到该融合蛋白分布于小肠绒毛上皮细胞的刷状缘,与NPC1L1的分布特征一致。结论:成功实现了对小鼠内源性NPC1L1蛋白进行体内标记,为研究NPC1L1囊泡转运和胆固醇吸收机制提供了有效手段。     

两种小鼠颈总动脉内膜增生模型的制备和比较

目的:制备颈总动脉结扎及颈总动脉导丝损伤2种小鼠颈总动脉内膜增生模型,并比较其优缺点。方法:C57BL/6小鼠右侧颈总动脉实施结扎或导丝损伤术,左侧为阴性对照侧。14d后行颈总动脉彩超检查,检测颈总动脉血流速度的变化;行H-E染色比较内膜面积、中膜面积及内中膜比;行免疫荧光SM22染色比较平滑肌细胞的分化程度。结果:结扎侧颈总动脉血流基本消失,非结扎侧血流代偿性加快;导丝损伤侧颈总动脉血流增快,非导丝损伤侧血流亦增快,但小于导丝损伤侧。颈总动脉结扎侧和导丝损伤侧新生内膜面积分别为(35.08±4.40)×10~3μm~2和(12.02±2.00)×10~3μm~2,中膜面积分别为(49.31±3.39)×10~3μm~2和(39.63±4.05)×10~3μm~2,内中膜比分别为0.71±0.05和0.30±0.05。两组间差异均有统计学意义。手术侧血管平滑肌细胞均由分化型转变为去分化型,且结扎侧平滑肌细胞去分化程度较导丝损伤侧高。结论:在模拟血管内膜增生方面,颈总动脉结扎模型优于颈总动脉导丝损伤模型。     

果糖与代谢性疾病

随着社会经济的发展,肥胖、糖尿病、脂肪肝、高血脂和痛风等代谢性疾病的患病率在全球呈现快速上升趋势。这些代谢性疾病可进一步发展为动脉粥样硬化、高血压和冠心病等心血管疾病或肾脏疾病,严重危害人们的身心健康和社会发展。因此,代谢性疾病及其相关心血管疾病已经成为我国公共卫生领域的重大挑战。     

醛缩酶B在果糖耐受与血糖稳态中的作用研究

目的：建立全身性醛缩酶B(aldolase B,Aldob)基因敲除小鼠模型,探讨Aldob基因缺陷对小鼠果糖耐受和血糖稳态的影响。方法：利用敲除优先策略和胚胎干细胞基因打靶技术,建立全身性Aldob基因敲除小鼠模型,并通过Western blot验证敲除效果;监测普食喂养小鼠生长发育过程中的体重、体长、血糖和血脂水平;检测果糖灌胃前后小鼠血糖及血浆天冬氨酸转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）和丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）水平,取材分析肝、肾等器官的大小及形态学变化。结果：Aldob缺陷小鼠普食喂养时出现生长迟滞和低血糖;果糖灌胃后血糖呈降低趋势,血浆AST和ALT水平升高,并伴有肝肾肿大和肝脏病理性损伤。结论：Aldob在维持小鼠生长、血糖稳态和果糖耐受性中发挥重要作用。     

锌指蛋白ZBTB20敲低的血管平滑肌细胞稳转株的构建及鉴定

目的 构建并鉴定锌指蛋白ZBTB20敲低的血管平滑肌细胞稳转株。方法 本实验时间为2022-04-18至2022-11-29。设计合成针对ZBTB20基因的短发夹RNA(shRNA)，构建ZBTB20干扰慢病毒载体——pHBLVZBTB20 shRNA，包装ZBTB20干扰慢病毒。将人肺动脉平滑肌细胞（HPASMCs）接种于6 cm培养皿中，分别加入含8μg/ml polybrene和0.5 ml ZBTB20干扰慢病毒上清液的无血清培养液3 ml（实验组）和含8μg/ml polybrene和0.5 ml含无意义干扰序列的慢病毒的无血清培养液3 ml（阴性对照组）进行转染，48 h后加入嘌呤霉素（优化剂量为1.5μg/ml）以筛选转染成功的HPASMCs。采用荧光定量PCR检测两组ZBTB20 mRNA相对表达量，采用Western blot法检测两组ZBTB20，采用免疫组化试验检测两组ZBTB20表达情况，并进行细胞增殖实验和细胞迁移实验。结果 实验组ZBTB20mRNA相对表达量、ZBTB20均低于阴性对照组（P<0.05）。免疫组化试验结果显示，ZBTB20在阴性对照组...