UHPLC-MS/MS同时测定黄芩清热除痹胶囊中6种活性成分

目的 建立超高效液相色谱-串联质谱同时测定黄芩清热除痹胶囊中6种成分（黄芩苷、栀子苷、木犀草素、齐墩果酸、薏苡素、苦杏仁苷）含量的方法。方法 采用Phenomenex Luna Omega C18色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.6 μm）,以含10 mmol/L甲酸铵的0.1%甲酸水溶液（A）-0.1%甲酸的乙腈（B）为流动相,进行梯度洗脱,柱温为30 ℃,流速为0.25 mL/min,进样量5 μL,分析时间10 min。采用电喷雾离子源,以多反应监测模式在负离子条件下进行检测。结果 所测6种活性成分在测定浓度范围内线性关系良好（r≥0.999 0）,精密度、稳定性和重复性良好,平均加样回收率为98.62%~103.7%,RSD≤2.70%。结论 该方法准确度高、分析速度快、检测限低、重复性高,适用于黄芩清热除痹胶囊质量控制。     

康复新液保留灌肠治疗放射性肠炎的临床观察

目的：优选枇杷清肺颗粒的最佳醇提工艺。方法醇提工艺以盐酸小檗碱含量和浸膏得率为指标,采用正交试验优选枇杷清肺颗粒最佳醇提工艺。结果醇提最佳工艺条件为加10倍量70％乙醇,回流提取3次,每次2 h。结论优选出的提取工艺稳定,主要有效成分转移率高,为枇杷清肺颗粒的成型工艺研究奠定了基础。     

绿萼梅抗β淀粉样蛋白致阿尔茨海默病细胞模型活性部位的筛选及其化学成分分析

目的 筛选绿萼梅水提物抗β淀粉样蛋白（amyloid β,Aβ）致阿尔茨海默病（Alzheimers disease,AD）细胞模型的活性部位,并对活性较好的部位进行化学成分辨识。方法 采用水和不同浓度乙醇提取绿萼梅活性部位,再用AB-8型大孔吸附树脂富集并制备绿萼梅4个不同洗脱部位样品,采用Aβ诱导的SH-SY5Y细胞AD模型筛选绿萼梅不同部位样品活性,借助超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱对活性较好的部位进行成分鉴定。结果 不同浓度乙醇洗脱物对Aβ诱导的SH-SY5Y细胞毒性均有较好的抑制作用（P<0.05）,药效呈现出浓度依赖性,其中60%、90%乙醇洗脱物作用极为显著（P<0.05）;从两个活性部位共鉴定出24个化合物,包括16个黄酮类成分,4个苯丙素类成分和4个其他类成分;两个活性组分中共有成分14个,其中主要为黄酮类成分。结论 60%乙醇洗脱部位和90%乙醇洗脱部位是抗Aβ毒性的活性部位,黄酮类成分为该活性部位的主要物质基础。     

巨噬细胞来源的外泌体不同提取方法的比较

目的根据聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)沉淀原理,结合超高速离心改进一种简便、快速的细胞外泌体分离方法。方法采用超高速离心法、PEG6000沉淀结合超高速离心和EXO Quick试剂盒,分别提取巨噬细胞外泌体。通过透射电镜、NanoSight ZS及Nanoparticle tracker(NTA)分析外泌体的形态和粒径;蛋白印迹法鉴定细胞外泌体标志物Alix、TSG101的表达情况。结果 PEG6000沉淀结合超高速离心法获得的外泌体,其粒径分布和差速离心法相当,小于商品化的EXO Quick试剂盒。而外泌体表面蛋白Alix、TSG101在3种方法提取的沉淀物中都有表达。透射电镜结果显示,3种方法均获得典型的盘状囊泡。结论实验改进的细胞外泌体提取方法操作简洁、效率高,并且成本较低。     

多重PCR方法同时鉴别中药苍耳子及其混淆品北大核心CSCD

建立一种能同时鉴别苍耳子及其混淆品蒙古苍耳子和意大利苍耳子的方法。对植物苍耳、蒙古苍耳和意大利苍耳的基因组序列进行测序,分别获得约2.21、2.24、2.54 Gb大小的基因序列;结合BLASTN法和Bowtie 2软件筛选出76条特异性contigs并设计对应引物;通过PCR扩增,筛选出3对扩增稳定、重复性好的特异性鉴别引物并建立多重PCR反应体系,并对其退火温度、DNA模板用量、循环数、DNA聚合酶种类和不同PCR仪等扩增条件进行优化。结果表明,在退火温度为52℃,DNA模板用量为30 ng,循环次数为35时,苍耳子能同时扩增出262、458 bp的片段,蒙古苍耳子扩增出260、454、927 bp的片段,意大利苍耳子扩增出260、926 bp的片段。应用该多重PCR方法,对18批苍耳样品、17批蒙古苍耳样品和12批意大利苍耳样品进行验证,结果表明所建立的多重PCR鉴别方法可以准确、快速开展苍耳子及其混淆品的鉴别,为中药苍耳子的分子鉴定提供了新的方法。     

黄连粗多糖协同小檗碱改善溃疡性结肠炎肠黏膜屏障损伤的作用

目的 考察黄连粗多糖与小檗碱在溃疡性结肠炎小鼠治疗中的协同作用。方法 采用雄性BALB/c小鼠30只随机分为5组,除正常组6只外,其余在小鼠日常饮水中给予5%葡聚糖硫酸钠建立结肠炎模型。建模成功后,每组分别进行灌胃给药4 d,每日1次,小檗碱组（100 mg·kg^-1 BBR）、小檗碱+低剂量粗多糖组（100 mg·kg^-1 BBR+22.8 mg·kg^-1 CCP）、小檗碱+高剂量粗多糖组（100 mg·kg^-1 BBR+45.6 mg·kg^-1 CCP）,模型组和正常组灌胃同体积生理盐水。实验结束后处死小鼠提取结肠,通过蛋白免疫印迹法检测小鼠结肠组织紧密连接闭锁连接蛋白-1（ZO-1）、紧密连接蛋白-1（Claudin-1）和闭合蛋白（Occludin）蛋白的表达。以正常组为对照,评价各治疗组模型小鼠疾病活动指数（DAI）评分、结肠长度、结肠组织形态和结肠紧密连接蛋白的表达水平。结果 与正常组比较,模型组小鼠ZO-1、Claudin-1和Occludin蛋白表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,小檗碱组Claudin-1蛋白表达无明显差异,ZO-1和Occludin蛋白表达显著升高（P<0.01）,黄连粗多糖联合小檗碱组Claudin-1、ZO-1和Occludin蛋白表达显著升高（P<0.01）;与小檗碱组比较,黄连粗多糖联合小檗碱组紧密连接蛋白表达明显强于小檗碱单独给药（P<0.05）。结论 黄连粗多糖协同小檗碱给药能有效改善溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜屏障损伤。     

高效液相色谱法同时测定脑络欣通复方提取物中三七皂苷和人参皂苷含量

目的建立同时测定中药复方脑络欣通提取物中三七皂苷R1,人参皂苷Rb1、Rg1、Rd、Re的高效液相色谱法分析方法,为脑络欣通制剂的质量控制提供依据。方法采用Welch Materials C8色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),选择乙腈-水作为流动相,进行梯度洗脱,流速1.2ml/min,检测波长为203nm,柱温20℃。结果三七皂苷R1,人参皂苷Rb1、Rg1、Rd、Re分别在0.081 7~0.980 4(r=0.999 9)、0.315 7~3.788 4(r=0.999 9)、0.300 0~3.600 0(r=0.999 6)、0.077 7~0.932 4(r=0.999 9)、0.074 6~0.895 2(r=0.999 9)μg与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率分别为99.72%、99.65%、101.23%、99.38%、100.62%(n=6)。结论所建立的高效液相色谱方法简单方便、准确可靠,5种物质分离度佳、重复性好,可用于中药复方脑络欣通的质量控制。     

灵芝孢子油自微乳的制备及其质量评价

目的 制备不同粒径灵芝孢子油自微乳给药系统并对其质量进行评价。方法 通过优化处方工艺制备不同粒径的灵芝孢子油自微乳,并对其外观、粒径、电位、自乳化时间、载药量以及稳定性等进行考察;采用高效液相色谱法建立灵芝孢子油自微乳的质量评价方法。结果 4种不同处方的灵芝孢子油自微乳粒径分别为（27.3±1.2）、（91.1±2.5）、（142.8±2.1）、（202.6±3.4）nm,相应的电位分别为（-12.1±0.5）、（-10.8±0.7）、（-12.3±0.6）、（-11.2±1.0）mV;高温和高强光实验显示,4组不同粒径的灵芝孢子油自微乳体系质量稳定。结论 自制的不同粒径灵芝孢子油自微乳质量稳定可控。     

不同制备工艺对桃红四物汤中5种成分含量的影响

目的 研究不同制备工艺对桃红四物汤中成分的影响。方法 采用高效液相色谱法测定桃红四物汤中没食子酸、5-羟甲基糠醛、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸含量。结果 桃红四物汤A液中5种成分含量均值分别为82.9、11.1、235.7、917.3、49.3 mg/L;桃红四物汤B液中5种成分含量均值分别为126.6、13.2、187.3、1 040.4、28.6 mg/L,说明不同制备工艺使桃红四物汤中5种成分含量产生显著性差异。结论 不同制备工艺得到的桃红四物汤中化学成分种类和含量会产生变化。     

六味地黄粉体吸湿性及其物理性质相关性研究

目的 研究六味地黄提取物的吸湿特性,及抗张强度与其含水量、休止角、临界相对湿度（CRH）和卡氏指数等其他物理性质相关性。方法 以六味地黄提取物为模型,以不同的添加方法添加不同的辅料,绘制各粉体的吸湿曲线图,考察其吸湿特性,应用多元线性回归法分析抗张强度与休止角、卡氏指数等其他物理性质的关系。结果 添加辅料的六味地黄提取物吸湿性均得到改善,在考察范围内抗张强度与休止角、压缩指数、松密度、吸湿加速度呈负相关,与水溶性、干燥含水量、CRH、平衡吸湿量、吸湿初速度呈正相关。结论 六味地黄粉体的物理特性直接影响其片剂成型性。