p53 和NF-κB 信号通路在MTB 感染AECⅡ细胞中的免疫调控作用研究

目的：研究在结核分枝杆菌（MTB）感染肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）过程中,p53和NF-κB信号通路中相关信号分子是否参与了抗结核的先天免疫调控。方法：利用实时荧光定量PCR、Western blot和蛋白芯片技术,通过过表达和抑制AECⅡ细胞中的p53和NF-κB基因,分析在牛结核分枝杆菌弱毒株卡介苗（BCG）感染过程中p53和NF-κB信号通路的信号分子和细胞炎症因子的表达变化,并探讨p53与NF-κB信号通路在AECⅡ细胞抗MTB感染免疫应答中的“cross-talk”关系。结果：在A549细胞中,p53信号通路通过p53协同CBP来负调控NF-κB、TLR-4及TRAF6的表达,从而抑制NF-κB信号通路的活化,并上调IL-6、IL-8、TNF-α、IFN-γ的表达;而NF-κB信号通路通过NF-κB协同TLR-4、TRAF6与CBP来负调控p53与MDM2的表达,从而抑制p53信号通路的激活,同时上调了IL-6、IL-8、TNF-α、IFN-γ的表达。当BCG感染A549细胞时,p53信号通路中p53协同MDM2负调控CBP,进而上调NF-κB信号通路的TLR-4和TRAF6...     

白藜芦醇对体外培养的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞周期与凋亡的影响

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对体外培养的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞周期与凋亡的影响。方法:通过不同浓度0.5～150μmol/L Res作用于体外培养的SH-SY5Y,72 h后用流式细胞术检测细胞周期构成比和细胞凋亡率,用Hochest染色观察细胞凋亡情况。结果:0.5～5μmol/L各组,进入G2/M期细胞所占活细胞比率逐渐升高;5～150μmol/L各组,随浓度升高,凋亡率呈现逐渐上升的趋势,而且显著高于对照组(P<0.01),其中150μmol/L组凋亡率为51.80±1.72%,进入G0/G1期间细胞为78.54±0.60%,显著高于对照组(P<0.01),而进入G2/M期细胞为0.48±0.50%,即大多细胞停留于DNA复制前期。结论:Res在0.5～150μmol/L浓度范围内对SH-SY5Y具有双向浓度依赖性,即在0.5～5μmol/L浓度范围内,Res促进SH-SY5Y细胞增殖,而在15～150μmol/L浓度范围内Res抑制SH-SY5Y细胞增殖并促进其凋亡;其中Res抑制SH-SY5Y细胞增殖并促进凋亡主要表现为阻止G1期细胞进入S期。     

枸杞叶茶对糖尿病小鼠血糖的影响

目的 探讨枸杞叶茶水煎剂对糖尿病小鼠的降血糖作用.方法 制备四氧嘧啶糖尿病小鼠模型后,将其分为4组,即枸杞叶茶低剂量组(250 mg·kg-1)、枸杞叶茶高剂量组(500 mg· kg-1)、盐酸二甲双胍组(125 mg· kg-1)及对照组.灌胃21d后,测定各组小鼠空腹血糖并进行比较.结果 给药后,血糖降低值由高到低依次是枸杞茶低剂量组、盐酸二甲双胍组和枸杞叶茶高剂量组,血糖降低率分别为39.99％,39.84％和19.25％.与对照组相比,各给药组血糖降低值均有显著差异(P＜0.05),其中枸杞叶茶低剂量组和盐酸二甲双胍组的降血糖作用相当,比枸杞叶茶高剂量组更为显著.结论 一定剂量的宁夏枸杞叶茶水煎剂对四氧嘧啶糖尿病小鼠具有明显的降血糖作用.     

茉莉酸甲酯对乌拉尔甘草种子萌发和过氧化物酶活性的影响

目的探讨茉莉酸甲酯(MeJA)能否抑制乌拉尔甘草Glycyrrhiza uralensisFisch种子萌发并初步了解MeJA对种子萌发的作用机理。方法配制含10-4～10-8mol/L MeJA的系列溶液对甘草种子进行处理,试验分析其对种子发芽率、幼苗生长及过氧化物酶(POD)活性的作用效果。结果高浓度(10-4～10-5mol/L)的MeJA抑制甘草种子的萌发,影响其幼苗生长,低浓度(10-6～10-8mol/L)的MeJA对甘草种子的萌发和幼苗的生长具明显的促进作用,甘草幼苗的POD活性也随着MeJA浓度的升高而增强。结论 MeJA对甘草种子萌发及幼苗生长的作用表现出"双重性"效应。     

β 连环蛋白对脑胶质瘤辐射抗性的影响

目的 探讨β 连环蛋白（β-catenin）在X 射线照射条件下对人脑胶质瘤U87 细胞增殖、生存 的影响。方法 U87 细胞经采用5μmol/L IWR-1-endo 处理后,用X 射线照射,采用CCK-8 法平板克隆 形成实验检验细胞增殖和存活能力,免疫荧光染色检验细胞相关蛋白的表达,电镜观察细胞内微结构的变化。 结果 人脑胶质瘤U87 细胞辐射后,照射组β-catenin 蛋白相对表达量比对照组低（P <0.05）;经IWR-1- endo 处理的细胞增殖和平板克隆形成率有增加趋势（P <0.05）。结论 降低β-catenin 抑制Wnt/β-catenin 信号通路,虽然能降低胶质瘤细胞增殖能力,但可能通过保护细胞线粒体的方式增加胶质瘤细胞对辐射治疗 的抗性。     

IL-1β参与调控BCG感染RAW264.7细胞凋亡的研究北大核心CSCD

目的白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)属多肽类生长因子,主要由单核细胞和巨噬细胞分泌。IL-1β可参与细胞分化、增殖等多种细胞的生命活动,并参与调控细胞凋亡过程。本研究旨在探讨IL-1β参与卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin,BCG)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡作用及其机制。方法设计并合成IL-1β的小干扰RNA(si-IL-1β),转染小鼠巨噬细胞RAW264.7后并用BCG感染,采用MTT法检测RAW264.7细胞存活率,ELISA法检测细胞培养液上清中IL-1β的分泌水平,DCF法检测细胞内ROS水平,AnnexinV-FITC/碘化丙啶(propidine iodide,PI)双荧光染色法结合流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR和Western blot法检测凋亡相关因子Caspase3、Bad、Bax以及Mcl-1蛋白及其基因(mRNA)的表达。结果 BCG感染巨噬细胞24 h后,IL-1β表达水平极显著上调,并且呈时间梯度依赖性(P<0.01);同时,与对照相比,BCG感染后巨噬细胞存活率下降,约为33%,而凋亡率显著上调到58.56%(P<0.01),并且凋亡关键调控因子Caspase3、Bad、Bax的mRNA及蛋白表达水平显著上调(P<0.01),而抑凋亡蛋白Mcl-1的表达水平显著下调(P<0.01),细胞内ROS富集(P<0.05),而si-IL-1β处理可显著逆转由BCG诱发的细胞凋亡、ROS含量富集及凋亡相关蛋白表达水平上调等。结论 BCG可诱导细胞内IL-1β的表达;IL-1β通过上调促凋亡蛋白Bad、Bax表达,下调抑凋亡蛋白Mcl-1表达,上调细胞内ROS的表达并参与调控BCG诱导的巨噬细胞RAW264.7细胞凋亡。这为阐明IL-1β在BCG诱导的细胞凋亡中的作用奠定了分子基础。     

运动训练对坐骨神经损伤小鼠神经形态和功能恢复影响的研究

目的:观察运动训练对坐骨神经损伤小鼠神经形态和功能恢复的影响。方法:雄性昆明小鼠120只,随机分为对照组、假手术组、损伤模型组和损伤后水中运动训练组。采用右侧坐骨神经卡压模型,观察运动训练对小鼠爬网漏脚率、神经传导速度、神经髓鞘计数和神经形态的影响。结果:运动训练组小鼠术后3周爬网漏脚率明显低于损伤模型组(P0.01),术后3、4周神经传导速度也明显快于损伤模型组(P0.01,P0.05),神经髓鞘计数明显高于损伤模型组(P0.01),电镜下损伤神经得到修复,细胞形态基本恢复正常,明显好于损伤模型组。结论:运动训练可促进坐骨神经损伤小鼠的神经修复和功能恢复。     

利用groupⅡ intron构建产气荚膜梭菌突变体

目的通过插入失活α毒素基因获得产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）突变体。方法利用MobilegroupⅡintron的自我剪切作用,对本室保藏的1株野生型C.perfringens的α基因plc插入失活。通过菌落PCR检测,以及观察突变株在哥伦比亚血琼脂培养基和脑心浸液培养基（4%卵黄）平板上的形态变化,进行阳性筛选。蛋白质免疫印迹分析α毒素蛋白活性。结果 PCR检测到α毒素突变体的plc基因中,存在Mobile groupⅡintron片段,并且观察到该菌在哥伦比亚鲜血琼脂平板培养基上的α毒素溶血环消失,在脑心浸液培养基（4%卵黄）平板上无白晕。蛋白质免疫印迹分析表明,plc突变体不表达α毒素蛋白。结论成功构建C.perfringensα毒素突变体,为后期探索C.perfringens口服疫苗打下了重要基础。     

桃儿七内生真菌分离及其抑菌活性初步研究

目的 探明桃儿七内生真菌资源多样性及其抑菌活性特征.方法 通过组织块法对内生真菌进行分离,并选择5种植物病原真菌和4种细菌作为指示菌,采用对峙法和改进的菌块法测定抑菌活性.结果 从桃儿七根、茎、叶中分离出49株内生真菌,根部最多,22株,其次为茎部,18株,叶部最少,9株;经形态学分类鉴定归于2个目,3个科,9个属,梭孢霉属为优势菌属;有22株菌对1种或多种供试植物病原真菌有不同程度的抑制作用,占分离菌株数的44.8％,有8株菌对2种或多种供试植物病原真菌有明显的抑制作用,其占所分离菌株总数的16.3％,有3株菌对4种或多种供试植物病原真菌有明显抑制作用,2株内生真菌分别对2种供试指示细菌具有明显的抑制作用.结论 桃儿七内生真菌具有多样性和明显的抗外源真菌活性,抑菌活性菌株主要分布在曲霉属、单孢枝霉属、梭孢霉属,其内生真菌的研究和开发具有重要的生态和经济意义.     

基于网络药理学和分子对接技术的银柴胡解热作用机制探讨

目的 采用网络药理学与分子对接技术探讨银柴胡解热作用的机制。方法 借助中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）、中医药整合药理学研究平台（TCMIP）和中药分子机制生物信息学分析工具（BATMAN-TCM）筛选银柴胡活性成分和相关作用靶点;使用GeneCards、OMIM和TTD数据库筛选发热相关靶点;通过STRING数据库构建活性成分靶点与发热疾病靶点蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络;利用Cytoscape软件的Network Analysis插件对获得的PPI网络进行拓扑分析,筛选核心节点;使用Venny软件获得银柴胡活性成分靶点、发热疾病靶点和核心节点的交集靶点,并通过进一步的拓扑分析筛选得到关键成分和关键靶点;通过DAVID数据库进行基因本体（GO）功能注释和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析;利用Schr?dinger软件对关键靶点与对应的关键成分进行分子对接。结果 银柴胡解热关键成分为银柴胡胺D和银柴胡新木质素-β-D-葡萄糖苷A~D,71个关键靶点主要包括促丝裂原活化蛋白激酶10（MAPK10）、蛋白激酶B1（Akt1）、热休克蛋白90AA1（HSP90AA1）、细胞周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）、转化蛋白p21（HRAS）、血管内皮生长因子受体2（KDR）、原癌基因受体酪氨酸激酶（KIT）等;KEGG富集的67条通路主要包括Rap1信号通路、Toll样受体信号通路、肿瘤坏死因子（TNF）信号通路、Ras信号通路等;分子对接结果表明,银柴胡新木质素-β-D-葡萄糖苷A与KDR,银柴胡新木质素-β-D-葡萄糖苷C与CDK2、HRAS和HSP90AA1,银柴胡新木质素-β-D-葡萄糖苷D与Akt1、HRAS和KIT具有良好的结合能力。结论 银柴胡解热作用机制可能与抗炎、抗过敏、调节新陈代谢、促进免疫调节等过程有关。