吗替麦考酚酯治疗小鼠间质性肺炎的作用及风险研究

目的 通过小鼠体内实验研究吗替麦考酚酯(mycophenolate mofetil, MMF)对于缓解博来霉素诱导的间质性肺炎的作用,以及引起继发性肺泡蛋白沉积症的风险。方法 选取SPF级雄性C57BL/6小鼠18只,按数字表法随机分为3组,即PBS组、MMF1组(用20mg/kg浓度MMF灌胃处理组)和MMF2组(用35mg/kg浓度MMF灌胃处理组),均予以博来霉素滴鼻吸入构建肺损伤模型。通过Western blot法、qPCR法检测肺IL-1β、TNF-α以及TGF-β的表达水平,通过HE染色评估各组小鼠肺部炎症以及纤维化水平的差异,通过免疫组化检测各组小鼠肺CD68阳性巨噬细胞的数量,通过酶联免疫吸附试剂盒检测各组小鼠血清粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)自身抗体以及GM-CSF的水平。结果 与PBS比较,MMF可以显著减少博来霉素诱导的小鼠肺部IL-1β、TNF-α以及TNF-α的蛋白和mRNA水平(P均<0.01)。病理结果也证实MMF可缓解博来霉素诱导的小鼠肺部炎症和纤维化水平。与对照组比较,MMF处理后小鼠肺泡巨噬细胞的数量明显减少(P<0.01)。此外,MMF处理不影响血清GM-CSF自身抗体以及GM-CSF的水平(P=0.62,0.53)。结论 MMF治疗间质性肺炎具有一定的疗效,但也会显著减少肺泡巨噬细胞的数量,可能具有导致继发性肺泡蛋白沉积症的风险。     

纳米磁珠联合MALDI-TOF-MS技术在甲状腺微小乳头状癌诊断中的应用价值

目的探讨纳米磁珠联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）技术构建甲状腺微小乳头状癌（PTMC）血清蛋白质指纹图谱诊断模型的应用价值。方法应用纳米磁珠联合MALDI-TOF-MS技术检测65例PTMC患者和45例健康体检者的血清,其中60例标本（PTMC35例,健康体检者25例）作为试验组,50例标本（PTMC30例,健康体检者20例）作为验证组。结果单独区分PTMC和健康体验者能力最强的2个蛋白质峰m/z为7979.56、3320.19,所构建组合可达到最佳诊断效果,交叉检验灵敏度1,特异度0.96,验证组盲法测试灵敏度0.87,特异度0.90。结论通过MALDI-TOF-MS技术能在PTMC患者血清中筛选出特异度强、灵敏度高的差异蛋白,有望成为诊断PTMC的一种新方法。     

Wnt诱导分泌蛋白3对软骨细胞增殖分化的作用

目的研究重组人Wnt诱导分泌蛋白3(rhWISP3)对人永生化软骨细胞株T/C-28a2增殖和分化的作用,探讨其作用是否通过胰岛素样生长因子-1(IGF-1)信号通路发生。方法分别应用不同浓度rhWISP3干预T/C-28a2细胞株,用[3H]-脱氧胸腺嘧啶([3H]-TdR)摄入法测定细胞增殖活性。rhWISP3与重组人IGF-1蛋白(rh IGF-1)同时干预T/C-28a2细胞,[3H]-TdR摄入法测定细胞增殖活性。免疫印记法检测不同浓度rhWISP3干预的T/C-28a2细胞Ⅱ型胶原表达变化。用IGF-1信号通路阻断剂JB1干预细胞后,免疫印记法检测rhWISP3对T/C-28a2细胞Ⅱ型胶原表达的影响。结果 rh-WISP3对软骨细胞增殖无明显影响。rh IGF-1明显促进T/C-28a2细胞增殖,rhWISP3对rh IGF-1促T/C-28a2细胞增殖作用无影响。rhWISP3明显促进软骨细胞Ⅱ型胶原的表达,呈浓度依赖性。rh IGF-1干预T/C-28a2细胞能明显促进软骨细胞Ⅱ型胶原的表达。IGF-1信号通路阻断剂JB1能阻断rh IGF-1促进软骨细胞Ⅱ型胶原的表达作用,不能阻断rhWISP3促进软骨细胞Ⅱ型胶原的表达作用。结论 rhWISP3对T/C-28a2细胞增殖作用无明显影响,呈浓度依赖型促进Ⅱ型胶原的表达,这种促表达的作用可能是通过独立于IGF-1信号通路而产生。     

Apelin抑制人成骨细胞的凋亡

目的 研究apelin对人成骨细胞凋亡的作用.方法 用茜素红染色观察原代培养的人成骨细胞矿化结节的形成.碱性磷酸酶(ALP)用ELISA检测;骨钙素(OC)用放射免疫测定法测定;Ⅰ型胶原用ELISA法检测.用ELISA法检测细胞凋亡.Bcl-2,Bax,caspase-3,cytochmme C,P-Akt,Akt用Western blot检测.PI3-K p85α用免疫沉淀法检测.用小分子RNA干扰技术(siRNAs)抑制APJ表达,联合PI3-K信号转导阻断剂LY294002及Akt信号转导阻断剂HIMO干预,以观察Apelin对成骨细胞凋亡的作用及信号转导.结果Apelin能抑制无血清诱导的人成骨细胞凋亡,siRNAs转染阻断APJ表达可消除此效应.Apelin干预可诱导入成骨细胞Bcl-2蛋白质表达,抑制Bax蛋白质表达和Cytochrome C的分泌及caspase-3的裂解活化.Apelin可诱导人成骨细胞PI3-K及Akt磷酸化;siRNAs转染沉默APJ可消除此效应;PI3-K信号转导阻断剂LY294002或Akt阻断剂HIMO能消除Apelin对人成骨细胞Akt的活化作用;LY294002或HIMO也能阻断Apelin对人成骨细胞抑制凋亡作用.结论 Apelin可抑制人成骨细胞的凋亡;Apelin通过APJ/PI3-K/Akt信号通路介导参与对成骨细胞凋亡的调节.     

妇产科术后静脉血栓栓塞症的诊断和防治

静脉血栓栓塞症（venous thromboembolism,VTE）是妇产科手术后严重的并发症,妇产科手术时应注意预防;临床上对于VTE尤其是肺栓塞（pulmonary thromboeambolism,PTE）的早期发现、早期诊断和及时正确的治疗尤为关键;影像学检查在诊断上占有至关重要的地位;抗凝治疗是其主要治疗方法之一。     

弥可保加银杏达莫治疗糖尿病周围神经病变33例

糖尿病周围神经病变是一种常见的糖尿病慢性并发症,病程越长,治疗越困难。目前尚无特效疗法,仍需要综合治疗。本文旨在探讨弥可保联合银杏达莫对糖尿病周围神经病变的影响。     

Graves眼病眼压临床分析

目的 观察和分析Graves眼病(GO)患者眼压的临床特点及影响因素。 方法 分析2012~2013年间内分泌科门诊随访的66例GO患者的临床资料,探讨GO患者眼压升高与年龄、性别、病程、家族史、吸烟史、甲状腺功能、CAS评分及病情严重度评估、眼压情况、治疗情况等的关系。 结果 本组GO患者眼压升高的发生率为45.5%。与正常眼压组比较,高眼压组的患者年龄偏大,突眼程度更重,甲状腺功能异常。但性别、吸烟史、家族史、病程、病情严重度评估及病情活动度评估两组差异无统计学意义。通过积极的治疗,大部分高眼压患者眼压可恢复正常。 结论 GO眼压升高有其独特的临床特点,临床需要关注GO患者的眼压问题。积极有效的GO治疗可使绝大部分患者的眼压控制在正常范围。     

PD-1在Graves病CD4+、CD8+T细胞中表达水平及作用机制

目的 探讨PD-1在Graves病CD4⁺、CD8⁺T细胞中表达水平,对甲状腺滤泡上皮细胞增殖及炎性细胞因子作用。方法 采用ELISA法检测GD患者和健康人血清炎性细胞因子水平。流式细胞仪检测外周血单个核细胞(PBMC)中CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞的百分率和T淋巴细胞中PD-1的表达。采用CCK-8、流式细胞仪和ELISA法检测CD4⁺PD-1⁺和CD8⁺PD-1⁺T细胞与甲状腺滤泡上皮细胞共培养后的存活率和炎性细胞因子的变化。结果 GD患者炎性细胞因子干扰素-γ、IL-4、IL-17和转化生长因子-β水平均升高(P<0.05)。GD患者CD4⁺T细胞百分率升高,CD8⁺T细胞百分率降低,CD4⁺和CD8⁺细胞PD-1表达均升高。在与CD4⁺PD-1⁺和CD8⁺PD-1⁺T细胞共培养的甲状腺滤泡上皮细胞中,细胞活力及上述炎性细胞因子最高。结论 GD患者CD4⁺、CD8⁺细胞中PD-1表达升高,可促进甲状腺滤泡上皮细胞活性,炎性细胞因子水平升高,可能加速GD的发生和发展。     

机械应力对MG63成骨样细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的 观察力学刺激对MG63成骨样细胞的结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径在这一过程中的作用.方法 应用Western印迹法检测MG63细胞CTGF蛋白表达及细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38磷酸化水平,应用RT-PCR检测CTGF mRNA表达.结果 环状应力刺激可显著上调CFGF蛋白及mRNA表达,3～6 h达高峰,升高2～3倍;并且激活ERK及JNK信号途径,刺激10 min开始活化,ERK在60 min达高峰,而JNK在15～30min达高峰,对p38信号途径没有明显活化作用.JNK信号通路阻断剂SP600125能够阻断应力刺激对CTGF的上调作用,而ERK信号阻断剂PD98059及p38信号阻断剂SB203580却无此作用.结论 环状机械应力通过JNK依赖的途径上调了MG63细胞的CTGF表达.     

SEDT-PA致病基因WISP3突变体的构建及在COS-7细胞中的表达定位

目的通过构建晚发型脊柱骨骺发育不良伴进行性骨关节病（SEDT-PA）致病型（1000 T-C，840deIT）Wnt诱导分泌蛋白3（WISP3）与绿色荧光蛋白融合表达的真核表达载体，观察其在COS-7细胞中的表达和亚细胞定位，为研究WISP3突变致SEDT-PA的机理奠定基础。方法从正常人软骨细胞获得野生型WISP3基因的全长cDNA（WT-WISP3）；定点突变方法构建携带WISP3基因致病型的重组真核表达质粒MUT^1000T-C／pEGFP-C2和MUT^840deIT／pEGFP-C2；以空白载体pEGFP-C2为对照，脂质体转染法将重组质粒瞬时转染COS-7细胞，48h后用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达；半定量RT-PCR法检测WISP3基因的表达。结果测序和酶切鉴定证实插入片段大小和序列的正确；突变体在COS-7细胞中均高效表达；荧光显微镜观察发现，转染野生型WISP3基因的COS-7细胞中绿色荧光均匀分布在细胞浆和细胞膜，转染突变体的COS-7细胞中荧光呈斑点状染色和聚集现象。结论成功构建了SEDT-PA致病基因WISP3突变体，且发现野生型WISP3蛋白定位于细胞浆和细胞膜，而突变型的WISP3蛋白在细胞浆内异常聚集，为进一步探讨SEDT-PA的发病机制创造条件。