一氧化氮诱导HL-60细胞凋亡及其机制探讨

目的：观察一氧化氮对人类白血病细胞是否具有致凋亡作用，并研究Bcl-2基因和P53基因在此过程中的作用。方法：将不同浓度的外源性一氧化氮供体亚硝基铁氰化钠与HL-60细胞作用，观察其作用的时间效应和剂量效应；用MTT法观察NO对细胞的抑制作用，用透射电镜观察细胞结构改变，用DNA凝胶电泳、细胞DNA含量、DNA末端标记、Annexin-V/PI法等分析细胞凋亡，并用流式细胞法进一步观察在NO作用过程中凋亡调控因子Bcl-2和P53蛋白及线粒体膜蛋白表达变化。结果：NO能抑制HL-60细胞生长，并在一定的剂量范围内显示作用时间和剂量的量效关系；典型的细胞形态改变、DNA片段化、亚G1峰检出、DNA末端标记、Annexin-V/PT^-表达增加等证实。NO能诱导白血病细胞凋亡；在此过程中，P53蛋白表达上调，而Bcl-2蛋白表达下调，线粒体膜蛋白表达增加。结论：NO对HL-60细胞有强的致凋亡作用，Bcl-2和P53参与NO诱导HL-60细胞凋亡的调控。     

三七总皂苷对大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的:观察三七总皂苷(total Panax Notoginseng Saponins,tPNS)对体外培养的SD大鼠肾小球系膜细胞(Mesangial cells,MCs)增殖以及细胞周期的影响,以探讨tPNS在防治肾小球炎症和硬化中的作用及可能机理。方法:分离培养SD大鼠MCs,分为5组(n=8):空白对照组、血清刺激组、3个不同浓度(100,200,400μg/mL)的tPNS干预组。分别采用MTT法、细胞毒检测及流式细胞术观察大鼠MCs增殖及细胞周期的变化。结果:tPNS呈量效依赖抑制MCs增殖;降低S G2/M期细胞比例,且对MCs均无明显细胞毒性。结果:三七总皂苷通过减少DNA合成期(S期)细胞数量,抑制大鼠MCs增殖,而非依赖于诱导细胞凋亡和细胞毒性。     

四嗪二甲酰胺抑制肝癌细胞株HepG2增殖并诱导细胞凋亡的研究

目的观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制肝癌细胞株HepG2增殖并诱导细胞凋亡作用。方法将不同浓度的ZGDHu-1与HepG2细胞在体外培养,用台盼蓝染色、MTT法、5′-溴-2′脱氧尿苷(B rdu)-ELISA法观察ZGDHu-1对HepG2细胞增殖的抑制作用;用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记、Ho-echst33258荧光染色和ELISA法测定DNA片段等技术检测细胞凋亡。结果ZGDHu-1能抑制HepG2细胞增殖和活力,呈现作用时间和剂量的量效关系。HepG2细胞与ZG-DHu-1作用后,大部分细胞阻滞于G2-M期;出现典型的细胞形态改变,DNA片断化,亚G1峰检出并增加,Annexin V+/PI-表达升高,细胞内DNA片段含量增加,Hoechst33258荧光染色后出现凋亡细胞的特征性改变等均证实ZGDHu-1能诱导HepG2细胞凋亡。结论ZGDHu-1能抑制HepG2细胞增殖,并可诱导其细胞凋亡。     

白细胞介素6膜结合受体在子宫内膜异位症患者腹腔液中的表达及意义

子宫内膜异位症(内异症)是育龄期妇女的常见病和多发病,病因学涉及遗传、免疫、内分泌等多种因素.内异症患者腹腔液中巨噬细胞显著增多,并产生大量的细胞因子,如白细胞介素(interleukin,IL)6等,共同参与内异症的发生、发展.     

雷公藤内酯醇对AngⅡ介导的大鼠GMC增殖的影响

目的:观察不同剂量雷公藤内酯醇对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导的肾小球系膜细胞增殖的影响,探讨其可能机制。方法:分离培养大鼠GMC,用10-6mol/LAngⅡ刺激GMC,将培养的大鼠GMC随机分为5组:正常培养对照组、AngⅡ刺激组、AngⅡ和3种不同浓度(15、10、5μg/L)的雷公藤内酯醇共孵育组。分别采用MIT法及流式细胞术检测大鼠GMC增殖及细胞周期的变化。结果:雷公藤内酯醇能抑制AngⅡ介导的大鼠GMC增殖,降低S G2/M期细胞比例,其中以高浓度雷公藤内酯醇作用最强(P<0.01)。结论:雷公藤内酯醇可能通过减少DNA合成期(S期)细胞数量,抑制大鼠GMC增殖。     

厄贝沙坦对血管紧张素Ⅱ介导的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的观察不同剂量厄贝沙坦(Irb)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导的肾小球系膜细胞(MCs)增殖及细胞周期的影响,探讨Irb抑制MCs增殖的可能机制。方法分离培养大鼠MCs,用10-6mol/LAngⅡ刺激MCs,将培养的大鼠MCs随机分为空白对照组、AngⅡ刺激组、高浓度Irb组(10-5mol/L)、中浓度Irb组(10-6mol/L)、低浓度Irb组(10-7mol/L)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法及流式细胞术检测大鼠MCs增殖及细胞周期的变化。结果AngⅡ刺激组A值显著高于空白对照组,而高、中、低浓度Irb组A值均明显低于AngⅡ刺激组,且浓度越高作用越明显;AngⅡ刺激组较其他各组G0/G1降低,(S G2)/M升高,而高、中、低浓度Irb组较AngⅡ刺激组G0/G1明显上升、(S G2)/M明显降低,且浓度越高作用越明显;10-7～10-5mol/LIrb对MCs无明显细胞毒性作用。结论Irb可能是通过阻断AT1R介导的MCs的有丝分裂、增生及蛋白合成,从而抑制MCs的增殖。     

细胞免疫表型分析在急性白血病诊断中的应用

采用流式细胞术对４５例急性白血病病人进行免疫表型分析。急性髓系白血病均表达髓系抗原，部分同时伴有淋系抗原（ＣＤ７）表达，急性淋系白血病均表达淋系抗原，少数伴有髓系抗原（ＣＤ１３、ＣＤ３３）表达。１例慢粒急淋变既表达髓系抗原标记，又表达Ｂ系抗原标记。结果表明，白血病免疫表型是急性白血病诊断与分型的重要手段一仍需结合细胞形态学、组织化学检测。     

Bcl-2,Bax和线粒体膜蛋白在一氧化氮供体诱导HL-60细胞凋亡中的改变

本研究探讨外源性一氧化氮 (NO)供体硝普钠 (SNP)对HL 6 0细胞诱导凋亡的可能机制。将HL 6 0细胞与SNP在体外培养 ,用DNA片段原位末端标记法 (TUNEL)测定原位细胞凋亡率 ;用流式细胞仪测定细胞DNA倍体和周期分析及Bcl 2、Bax、线粒体膜蛋白表达率的变化。结果表明 :SNP可诱导HL 6 0细胞凋亡 ,两者之间有明显的量效和时效关系。 1.0mmol/LSNP作用 4 8小时后 ,HL 6 0细胞的凋亡率分别为亚二倍体峰 (4 2 .2± 3.5 ) % ,TUNEL测定凋亡细胞率为 (5 2 .5± 7.6 ) % ,显著高于空白对照组和同浓度的高铁氰化钾 (PFC)组 ;Bax基因蛋白和线粒体膜蛋白 (APO2 .7)表达增加 ,bcl 2基因蛋白表达降低。Bax、Bcl 2和APO2 .7的表达率与SNP两者之间也有明显的量效和时效关系。结论 :外源性一氧化氮供体诱导HL 6 0细胞凋亡过程中 ,线粒体膜蛋白表达显著上调并伴随Bax和Bcl 2蛋白的表达改变。     

从ALT异常患者外周血中检出CD3- CD4+ 淋巴细胞一例

我科于2006年6月从一患者外周血检出CD-3CD+4淋巴细胞.对该患者进行跟踪观察,发现该群淋巴细胞始终存在于外周血中.现报告如下.     

木瓜蛋白酶体外对血小板聚集的抑制作用

目的：以洗涤血小板为模型,观察木瓜蛋白酶在体外对血小板聚集的抑制作用,以探讨其抗血栓作用的可能机制。方法：将不同剂量木瓜蛋白酶与洗涤血小板作用,以血小板聚集分析仪检测ADP、花生四烯酸（AA）、胶原和凝血酶诱导的血小板最大聚集率,以流式细胞仪检测活化血小板膜纤维蛋白原受体（FIB-R）和P-选择素表达水平,以SDS-PAGE分析血小板肌动蛋白聚合体的变化。检测ADP诱导的原发性高血压（PH）及急性心肌梗死（AMI）患者血小板最大聚集率和FIB-R表达水平。结果：木瓜蛋白酶剂量依赖性地抑制血小板聚集,降低血小板最大聚集水平,血小板聚集水平与木瓜蛋白酶剂量呈负相关（P〈0.01）。木瓜蛋白酶剂量依赖性地抑制ADP诱导的血小板FIB-R表达,降低FIB-R表达水平（P〈0.01）。木瓜蛋白酶降低ADP诱导的血小板膜P-选择素表达水平和抑制肌动蛋白聚合体增加（P〈0.01）。木瓜蛋白酶抑制PH及AMI患者血小板聚集和FIB-R表达（P〈0.01）。结论：木瓜蛋白酶通过抑制活化血小板膜纤维蛋白原受体的表达,并抑制肌动蛋白聚合以及释放反应从而剂量依赖性地抑制血小板的聚集反应,有抗血栓形成作用。