利用同源重组构建大鼠甘油二酯激酶γ(DGKγ)慢病毒过表达载体

文题释义： 甘油二酯激酶γ(DGKγ)：属于第Ⅰ类DGK亚型,主要分布于神经系统,参与浦肯野细胞树突的发育、突触可塑性调节、神经上皮细胞的增殖和迁移、神经元分化等功能活动。 同源重组技术：一种利用同源重组的原理,进行无缝克隆的技术。该技术无需考虑插入片段的酶切位点,可将插入片段PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点。同源重组技术还能实现多个DNA片段的一步组装,操作简单,重组效率高。 背景：慢病毒载体作为外源性转基因载体已被广泛应用,但是大鼠甘油二酯激酶γ(diacylglycerol kinase γ,DGKγ)基因慢病毒载体未见报道。 目的：用同源重组的方法构建大鼠DGKγ慢病毒过表达载体。 方法：提取成年SD大鼠脑组织总RNA,以反转录得到的cDNA作为模板,通过PCR反应分段扩增大鼠DGKγ基因CDS区5'端1 029 bp和3'端1 362 bp,用同源重组技术将这2个片段与线性化载体进行定向连接,构建CMV-rat DGKγ-GFP慢病毒载体并进行PCR扩增及测序鉴定。经293T细胞包装后产生慢病毒,收集慢病毒感染293T细胞,荧光显微镜下观察细胞中GFP的表达并应用实时荧光定量PCR和Western blotting法检测细胞中DGKγ mRNA和蛋白的表达。 结果与结论：CMV-rat DGKγ-GFP慢病毒载体经PCR扩增和测序鉴定构建成功;经CMV-rat DGKγ-GFP慢病毒感染后的293T细胞,荧光显微镜下呈GFP阳性,实时荧光定量PCR显示DGKγ mRNA的表达较空载体组显著升高(P < 0.01),Western blotting显示DGKγ蛋白表达较空载体组极显著升高(P < 0.001)。提示：成功构建了大鼠DGKγ慢病毒过表达载体,DGKγ在293T细胞有效高表达。 ORCID: 0000-0001-9352-3043(李蕾) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

X线机曝光量减小少见故障1例

Ｘ线机曝光量减小少见故障１例杨广胜①谢建山单相全波整流的Ｘ线机，最常见的故障是高压整流器件开路或击穿短路，造成毫安量减少一半或毫安表指针冲到头。作者介绍一种毫安减少至１／３的故障现象，较为少见。故障现象：我科一台Ｆ３０－ⅡＤ型２００毫安Ｘ线机，摄影中...     

甘油二酯激酶ζ参与大鼠胚胎神经管的早期发育

目的:观察甘油二酯激酶ζ(DGKζ)在大鼠胚胎神经管的表达变化,探讨DGKζ与神经管早期发育的关系。方法:取胎龄E9.75～E12大鼠胚胎各6只,连续切片,免疫组织化学方法检测DGKζ、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和巢蛋白(nestin)在神经管发育过程中神经上皮的表达,并对GFAP和nestin阳性细胞进行计数;免疫荧光双标检测DGKζ、纤维状肌动蛋白(F-actin)和磷酸化蛋白激酶Cδ(p-PKCδ)在神经上皮细胞的表达。结果:DGKζ在E9.75～E12胚胎神经上皮均呈阳性甚至强阳性表达,表达强度和细胞内定位随胎龄和部位发生变化,动态表达于神经上皮细胞的胞浆或胞核。免疫荧光结果显示：F-actin表达在神经上皮的胞核和胞浆,DGKζ、p-PKCδ均与F-actin共表达。GFAP于E9.75表达在神经上皮,表达强度在E10.5达到高峰,然后逐渐减弱,阳性细胞数量呈逐渐下降趋势;Nestin于E10.25出现弱阳性表达,随着胎龄增加阳性逐渐增强,阳性细胞数也逐渐增多。结论:在大鼠神经管发育过程中,NSCs的增殖速度加快,DGKζ持续表达在神经上皮细胞内,核内DGKζ可能通过DAG...     

Videomed K 电视通道维修要点

国内组装的西门子ＳＩＲＥＧＲＡＰＨＣ遥控胃肠机主机性能优良,故障率低。该机电视通道电路、除自动控制剂量、低压直流产生电路装在电子控制柜内外、其余摄像机电路、视频放大器、脉冲发生器都紧凑地固定在摄像管外围。与西门子Ｖｉｄｅｏｍｅｄ其它系列产品相比,其结构不同,电路简单,但说明书未将电路原理详细介绍,给非专维修者带来了一定困难。本文总结多年的维修经验,并绘制出故障检查流程图（附图）,供同道们借鉴。ＶｉｄｅｏｍｅｄＫ电视中心主要电路板功能：Ｄ１预视放电路（含自动增益控制）;Ｄ２视频放大器;Ｄ３摄像机及…     

B超在羊驼繁殖技术中的应用

羊驼是南美洲安第斯山脉的一种地方性物种,有较高经济价值.羊驼独特的繁殖特性,给养殖业造成很大困难,制约着羊驼大规模发展,引起广大科学家的关注.B超因其无损伤、操作简单、准确率高等特点,在羊驼繁殖中的应用有重要意义.本文结合B超的工作原理,对B超在羊驼卵巢发育检测、雌性生殖道检测、胎儿发育检测中的应用和繁殖新技术中的应用...     

临床医学专业基础医学整合课程实施与初步评价：以山西医科大学为例

山西医科大学基础医学整合课程方案为,9门基础医学课程整合为10个教学模块,期间穿插PBL和TBL案例讨论、临床观摩见习、翻转课堂教学及未能整合的其他学科教学。为了评估学生对整合课程的兴趣和内在动机、知识的掌握和应用情况,对149名学生、16名基础教师和10名临床带教教师进行无记名问卷调查。发现90%以上的学生愿意参与课程整合、PBL和TBL案例讨论,少于10%的学生不愿意参与,认为新课程体系知识不连贯;但随着年级增高,不愿意参与翻转课堂的学生比例从6.7%增加到95.0%。大多数基础和临床教师认为,新课程体系使学生对基础知识掌握扎实、其辨析能力增强;但没有提升学生的动手能力。后期教改中,针对课程衔接、自主学习内容的选择等细节,仍需改进。     

羊驼胚胎移植研究动态

羊驼作为中国首次引进的动物新品种,其繁殖时间较长,作为一项普遍饲养的畜牧业,存在许多不利因素。运用家畜胚胎移植技术,可以提高羊驼的繁殖速度及品质。因此,掌握胚胎移植技术,加速发展羊驼养殖业,应是目前一项重要任务。     

临床医学专业基础医学整合课程实施及初步评价----以山西医科大学为例

山西医科大学基础医学整合课程方案为9门基础医学课程整合为10个教学模块,期间穿插PBL和TBL案例讨论、临床观摩见习、翻转课堂形式的教学、以及未能整合的其他学科教学。为了评估学生对整合课程的兴趣和内在动机、知识的掌握和应用情况,对149名学生以及16名基础和10名临床带教老师进行无记名问卷调查,发现90%以上的学生愿意参与课程整合、PBL和TBL案例讨论,少于10%的学生不愿意参与,认为新课程体系知识不连贯;但随着年级增高,不愿意参与翻转课堂的学生比例从6.7%增加到95%。基础和临床教师认为学生基础知识扎实（比例分别为81.3%,80.0%）,辨析能力明显增强（75.0%,70.0%）,但动手能力没有增强（50%,70.0%）。因此可知,基础医学课程整合教学模式能够激起学生的学习兴趣并有利于训练学生的辨析能力,但在课程衔接、自主学习内容的选择等细节上,还需辅以在线课程方法来提供有效资源。     

鼠胚呼吸内胚层相关第二生心区发育中的上皮-间充质转化

目的 探讨上皮-间充质转化与鼠胚呼吸内胚层相关第二生心区发育的关系。方法 用免疫印迹法检测转化生长因子β2（TGF-β2）和转化生长因子β3（TGF-β3）在胚龄9～14 d小鼠胚胎心脏的表达情况。另用叉头框蛋白A2（Foxa2）、胰岛因子1（ISL-1）、层黏连蛋白（LN）及上皮型钙黏蛋白（E-cad）抗体,对35例胚龄10～12 d小鼠胚胎心连续石蜡切片进行免疫组织化学或免疫荧光染色。结果 TGF-β2和TGF-β3蛋白于胚龄10～12 d在小鼠胚胎心脏均有表达。在上述呼吸内胚层相关第二生心区发育的时间点,均可见ISL-1阳性呼吸内胚层与周围ISL-1阳性第二生心区间充质分界不清或混为一体的现象,同时伴有相应部位基底膜的断续状或者模糊不清状改变;尤其在胚龄11 d和12 d,部分呼吸内胚层或其实心细胞索细胞失去Foxa2表达,呈较强ISL-1表达,同时伴有基底膜的断裂或者缺失,E-cad表达减弱,细胞间隙出现,甚至从内胚层脱离,失去上皮细胞的顶 底极性。结论 TGF-β信号调节的上皮-间充质转化参与鼠胚呼吸内胚层相关第二生心区发育形成。     

Cx43、β-catenin、Smo在第二生心区的表达规律及意义

背景：第二生心区对于胚胎心脏发育具有重要意义，其发育异常会导致多种心脏畸形，Cx43基因敲除后第二生心区细胞的形成和增殖减少，但具体原因尚未明确。目的：(1)明确β-catenin、Smo以及Cx43在内胚层与第二生心区的表达模式，观察其有无共表达；(2)探究Cx43与Wnt/β-catenin通路或Shh通路之间是否存在相互作用，共同参与第二生心区的发育。方法：选取胚龄10-12 d的ICR小鼠胚胎石蜡包埋连续切片，进行免疫组织化学染色、苏木精-伊红染色、免疫荧光染色；剥离胚龄11 d小鼠胚胎的原始消化管用于蛋白印迹实验和免疫共沉淀。结果与结论：(1)胚龄10-12 d,Cx43与Isl1在前肠腹侧和心包腔背侧壁的部分间充质细胞呈共表达，Isl1阳性细胞增多的同时Cx43阳性细胞也增多；(2)胚龄10-12 d,Cx43与β-catenin在内胚层腹侧共表达；(3)胚龄10-12 d,Cx43与Smo在内胚层上共表达；(4)免疫共沉淀结果表明Cx43与β-catenin之间存在相互作用，共同参与第二生心区的发育。